1. Построение градуировочного графика

В мерные колбы вместимостью 100,0 мл последовательно вносят 0,20; 0,40; 0,60; 0,80 и 1,00 мл стандартного раствора рибофлавина (40,0 мкг/мл), доводят водой до метки и перемешивают. Измеряют интенсивность флуоресценции каждого раствора. Полученные результаты помещают в таблицу.

№	1	2	3	4	5
V(рибофлавина), мл	0,20	0,40	0,60	0,80	1,00
C(рибофлавина), мкг/мл	0,08	0,16	0,24	0,32	0,40
I

По полученным данным методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение зависимости С от I.

2. Определение массы рибофлавина в пробе

Полученную пробу количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100,0 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора. По рассчитанному обратному уравнению градуировочного графика определяют концентрацию рибофлавина в растворе (С_х, мкг/мл), а затем по формуле m = C100,0 - массу рибофлавина в анализируемой пробе (мкг).

Занятие 30

Цель занятия

1. Знать:

• общую характеристику и классификацию хроматографических методов разделения и определения веществ;

• основные хроматографические характеристики удерживания, параметры хроматографического пика и параметры разделения веществ;

• сущность хроматографического разделения, причины размывания хроматографических пиков.

1. Уметь:

• проводить определение хлорида натрия методом ионообменной хроматографии.

1. Хроматография. Принцип метода. Классификация хроматографических методов.

2. Хроматографические параметры: основные характеристики внешней хроматограммы, характеристики удерживания, характеристики, используемые для количественного определения веществ.

3. Теории хроматографического разделения. Теория хроматографических тарелок. Кинетическая теория (уравнение Ван-Деемтера).

1. Почему хроматографическое разделение является более эффективным по сравнению со статическими методами разделения - сорбцией и экстракцией?

2. Что такое проявительная, вытеснительная и фронтальная хроматография? Нарисуйте примерные внешние хроматограммы для данных методов хроматографического разделения. Какой из них и почему обычно используют в количественном хроматографическом анализе?

3. Что такое внутренняя и внешняя хроматограмма? Дайте определение понятиям «нулевая линия», «хроматографический пик», «основание пика», «ширина пика», «высота пика», «ширина пика на половине высоты».

4. Почему исправленное время удерживания (исправленный удерживаемый объём) является более надёжной качественной характеристикой вещества, чем время удерживания (удерживаемый объём)?

5. В чём физический смысл хроматографической характеристики, называемой коэффициентом ёмкости ( )?

6. Какие хроматографические параметры используются при количественном определении? Что такое «метод внутреннего стандарта»?

7. Что такое «теория теоретических тарелок»? Почему она так называется?

8. Согласно кинетической теории хроматографии размывание хроматографических пиков обусловлено одновременным действием трёх независимых друг от друга процессов. Охарактеризуйте данные процессы.

9. Как будет выглядеть зависимость ВЭТТ от скорости подвижной фазы для газовой хроматографии в случае газовой хроматографии с использованием капиллярной колонки, в которой неподвижная фаза нанесена в виде равномерной тонкой плёнки на внутренней поверхности колонки (капилляра) и в случае жидкостной хроматографии?

10. Что такое «разрешение» (R_S)? Почему разделение двух хроматографических пиков считается полным, если R_S  1,5?