21.Серологическая диагностика токсоплазмоза.

Для выделения токсоплазм используют ИФА.

Принцип реакции:

ИФА – метод, основанный на использовании ферматотивного маркера (пероксидазы хрена, входящего в состав коньюгата), присутствие которого в свою очередь позволяет определить реакцию взаимодействия Аг с Ат.

Компоненты:

• иммуносорбент (полистирол);

• исследуемый материал;

• коньюгат;

• хромоген.

Ход реакции:

Реакция протекает на твердом носителе – полистероловом планшете. Планшет может быть сорбирован в заводских условиях или же поставляется в наборе «чистым», в последнем случае нанесения, т.е. сорбцию Аг или Ат, проводят в лаборатории. После сорбции в лунку планшета наносят образцы материала (слюна, сыворотка, фекальная взвесь, пробы внешней среды). При гомологичности Аг и Ат образуются иммуные комплексы после чего в ход исследования вступает коньюгат. Он взаимодествует с иммуными комплексами, но остается невидимым. Для выявления комплекса Аг + Ат + коньюгат используют хромоген ОФД (ортофенелендиамин), который соединяется с атоммарным кислородом и вызывает изменение цвета в результате окисления.

Результат реакции:

• при положительном результате образуется комплекс Аг + Ат, который связывается с коньюгатом и окрашивается в присутствии ОФД.

• при отрицательном результате комплекс не образуется, коньюгат не связывается и после промывки «выходит» из реакции, ОФД его не выявляет, лунка не окрашивается.

Этап взаимодействия ОФД с комплексом требует особого внимания и своевременной остановки реакции, что достигается внесением стоп-реагента (H₂SO₄).

С помощью спектрофотометра с вертикально направленными пучками света замеряют показатели экстинции (оптической плотности).

Особенности ИФА:

1.После каждого этапа необходима тщательная промывка планшет.

2.Следует избегать попадания ОФД на кожу, слизистые. При попадании тщательно промыть проточной водой.

3.Работать только в перчатках.

4.Нельзя дотрагиваться до дна планшета, т.к. отпечатки изменяют оптическую плотность полистирола и вызывают ложноположительные результаты.

22.Серологическая диагностика пневмоцистоза.

Для выделения кокцидиоза, саркоцистоза, пневмоцистоза используют ИФА.

Принцип реакции:

ИФА – метод, основанный на использовании ферматотивного маркера (пероксидазы хрена, входящего в состав коньюгата), присутствие которого в свою очередь позволяет определить реакцию взаимодействия Аг с Ат.

Компоненты:

• иммуносорбент (полистирол);

• исследуемый материал;

• коньюгат;

• хромоген.

Ход реакции:

Реакция протекает на твердом носителе – полистероловом планшете. Планшет может быть сорбирован в заводских условиях или же поставляется в наборе «чистым», в последнем случае нанесения, т.е. сорбцию Аг или Ат, проводят в лаборатории. После сорбции в лунку планшета наносят образцы материала (слюна, сыворотка, фекальная взвесь, пробы внешней среды). При гомологичности Аг и Ат образуются иммуные комплексы после чего в ход исследования вступает коньюгат. Он взаимодествует с иммуными комплексами, но остается невидимым. Для выявления комплекса Аг + Ат + коньюгат используют хромоген ОФД (ортофенелендиамин), который соединяется с атоммарным кислородом и вызывает изменение цвета в результате окисления.

Результат реакции:

• при положительном результате образуется комплекс Аг + Ат, который связывается с коньюгатом и окрашивается в присутствии ОФД.

• при отрицательном результате комплекс не образуется, коньюгат не связывается и после промывки «выходит» из реакции, ОФД его не выявляет, лунка не окрашивается.

Этап взаимодействия ОФД с комплексом требует особого внимания и своевременной остановки реакции, что достигается внесением стоп-реагента (H₂SO₄).

С помощью спектрофотометра с вертикально направленными пучками света замеряют показатели экстинции (оптической плотности).

Особенности ИФА:

1. После каждого этапа необходима тщательная промывка планшет.

2. Следует избегать попадания ОФД на кожу, слизистые. При попадании тщательно промыть проточной водой.

3. Работать только в перчатках.

4. Нельзя дотрагиваться до дна планшета, т.к. отпечатки изменяют оптическую плотность полистирола и вызывают ложноположительные результаты.