8.Обнаружение личинок по Берману.

Основан на способности личинок гельминтов мигрировать по направлению к теплу и служит для их выявления в фекалиях, в первую очередь при подозрении на стронгилоидоз.

Оборудование: Металлический штатив, стеклянные воронки, мелкоячеистая металлическая сетка к воронкам, резиновые трубки и зажимы к ним, марля или широкие бинты, центрифужные пробирки, центрифуга, микроскоп.

1.На узкий конец стеклянной воронки надеть резиновую трубку с зажимом. Воронку укрепить в штативе.

2.В воронку поместить металлическую сетку и заполнить воронку подогретой до 40-45 ^оС водой так, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду.

3.На сетку положить 2 слоя марли и на нее 5-10 г кала. Личинки из фекалий активно мигрируют в теплую воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки надетой на воронку.

4.Через 4 ч. зажим на трубке открыть и опустить жидкость в 2 центрифужные пробирки.

5.После центрифугирования в течение 2-3 мин. надосадочную жидкость быстро слить, а осадок перенести на предметное стекло и микроскопировать при сухом объективе 8, 40, окуляр 10.

6.Марлю с фекалиями поместить в бак с дез. р-ром, воронки и сетки обезвредить кипячением.

9.Метод Горячева.

Основан на принципе осаждения яиц.Для обнаружения яиц описторха.

1.В пробирку наливают 3-4мл насыщенного р-ра NaCl.

2.Осторожно сверху наслаивают размешанные в 3-4 мл воды фекалии так, чтобы образовалось 2 четко разграниченных слоя.

3.Пробирки ставят в штатив на 15-20 ч. За это время яйца трематод оседают на дно пробирки. Затем жидкость осторожно отсасывают или сливают.

4.Осадок переносят пипеткой на предметное стекло. Микроскопируют без покровного стекла (объектив *8,*40).

10.Обнаружение личинок гельминтов в фекалиях культивированием (Метод Харада и Мори).

Рекомендован для исследования на анкилостомидозы.

Алгоритм работы:

Метод основан на том, что в тепле на влажной фильтровальной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки.

На полоску фильтровальной бумаги размером 151,5 см наносят 0,5г фекалий, оставляя оба конца полоски чистыми. Бумагу с фекалиями помещают в пробирку, заполненную водой так, чтобы нижний конец полоски, свободный от фекалий был погружен в воду, а другой чисты конец выступал из пробирки и мог бы быть закреплен пробкой.

Пробирку выдерживают в термостате при температуре 28 ^оС в течение 5-6 дней. В теплое время года можно оставить пробирки при комнатной температуре на 8-10 дней. По окончании инкубации бумагу извлекают и уничтожают, а жидкость исследуют под лупой. В сомнительных случаях жидкость центрифугируют и осадок микроскопируют, убив предварительно личинки нагреванием жидкости в пробирке при температуре 60 ^оС.

11.Исследование крови, желчи, мокроты, мочи.).

Микроскопия крови. В мазках и толстой капле крови, приготовленных по обычной методике и окрашенных по романовскому могут быть обнаружены личинки филярий.

Кровь для анализа необходимо брать не только днем но и ночью, так как при некоторых тропических филяриозах личинки в крови можно обнаружить только ночью.

Исследование дуоденального содержимого и желчи. Яйца и личинки гельминтов, паразитирующих в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе(описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз) и 12-перстной кишке( стронгилоидоз), могут быть обнаружены в дуод. содержимом и желчи, полученных при дуоденальной зондировании.

Дуод. содержимое и желчь получают обычным путем. Для порции В рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря путем введения через зонд 33% р-ра сульфата магния. Из исследуемой жидекости сначала выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья , а затем смешивают ее с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Недостаточную жидкость сливают, а весь остаток микроскопируют. При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром.

Исследование мокроты. В мокроте обнаруживают яйца парагонима, личинки аскариды, стронгилоида и некатора, элементы эхинококкового пузыря.

Мокроту размазывают на предметном стекле, плотно прикрывают другим стеклом и рассматривают невооруженным глазом на светлом или черном фоне, а затем под микроскопом. Частицы мокроты («ржавые» скопления, обрывки тканей и др.) исследуют отдельно под покровным стеклом при малом и большом увеличениях.

В ряде случаев мокроту, особенно гнойную, смешивают в колбе с равным количеством 0,5 \% раствора гидроксида натрия или калия (едкие натрий или калий), встряхивают в течение 5 мин слегка подогревают на водяной бане и затем центрифугируют 5—10 мин при 1500 об/мин. Осадок микроскопируют.

Исследование мочи. С целью обнаружения яиц шистосом мочу в объеме не менее 50 мл, собранную в середине дня,, помещают в конический стакан. После отстаивания в течение 30 мин мочу сливают, пипеткой переносят каплю осадка на предметное стекло, добавляют 1—2 капли 50 \% водного раствора глицерина и микроскопируют.

Наиболее распространен метод центрифугирования с последующей микроскопией осадка. Пробу мочи помещают в 2 центрифужные пробирки по 10 мл и центрифугируют при 1000— 1500 об/мин в течение 5—10 мин. Из осадка готовят препараты и микроскопируют. В препараты рекомендуется добавлять I — 2 капли раствора Люголя или 1—2 \% водного раствора метиле-нового синего. Образующийся при этом цветной фон облегчает выявление яиц шистосом и других гельминтов.