12.Толстая капля крови. Приготовление и окраска.

ТОЛСТАЯ КАПЛЯ КРОВИ

С целью обнаружения гемопаразитов микроскопируют с иммерсионным маслом под большим увеличением мазок (см. курс общеклинических лабораторных исследований) и толстую каплю крови (рис. 9.1).

Толстую каплю в отличие от мазка, крови не фиксируют. Под влиянием водного раствора краски нефиксированные эритроциты гемолизируются, препарат становится прозрачным. Это ускоряет и облегчает нахождение паразитов, так как в одном поле зрения можно исследовать гораздо больший объем крови, чем в мазке.

Если же толстая капля будет зафиксирована, то гемолиза эритроцитов не произойдет, они будут наслаиваться друг на друга и препарат окажется непригодным для микроскопии.

Слой крови в толстой капле не должен быть очень толстым, иначе после высушивания оиа трескается и может отпасть. Нормальной считается толстая капля, через которую после высушивания слабо просвечивает крупный печатный текст, а при микроскопии в одном поле зрения насчитывается в среднем 10—15 ядер лейкоцитов.

Хорошие препараты крови можно приготовить только используя чистые обезжиренные предметные стекла.

Стекла моют горячей водой с мылом или кипятят в 1 % растворе стирального порошка, затем тщательно прополаскивают горячей и дистиллированной водой. Вымытые стекла вытирают хлопчатобумажной тканью или сушат в сухожаровом шкафу, заворачивают в неворсистую бумагу и хранят до употребления.

Приготовление толстой капли крови

Оборудование: предметные стекла (сухие, чистые, обезжиренные); копья или скарификаторы одноразового применения для прокола кожи; вата; 70 % этанол; эфир; простой и восковый карандаши.

Методика работы. 1. Несколько чистых предметных стекол положить на стол.

2. Ватой, смоченной 70 % этанолом, протереть концевую фалангу IV пальца левой руки пациента (на занятии учащиеся

берут кровь для приготовления препаратов друг у друга).

3. После высыхания этанола проколоть кожу пальца с ладон6 — этапы приготовления тонкого мазка; 7—9 — неправильно приготовленные мазкн; 10—12 — разные способы приготовления толстой каплн.

ной стороны копьем, ставя плоскость копья поперечно к линиям кожного рисунка.

4. Выступившую первую каплю крови снять сухой ватой.

5. Нажимая на боковые поверхности пальца по направлению

к месту прокола (палец пациента при этом держат опущенным)

выдавить крупную каплю крови.

6. Предметным стеклом, держа его за боковые ребра, прикоснуться и снять выступившую каплю крови, которую располагают отступя на 2—2,5 см от узкого края стекла.

7. Круговыми движениями стекла размазать каплю, доводя ее размер до 1,5 см в диаметре.

8. Точно так же приготовить толстую каплю на другой половине стекла. Расстояние между каплями должно быть не менее 2 см.

9. В промежутке между каплями нанести на стекло полоску крови, на которой после высушивания написать простым каран-шом номер по списку или фамилию пациента. Делать подобную надпись на поверхности толстой капли недопустимо, так как это портит препарат и затруднит микроскопическое исследование.

10. Стекла в горизонтальном положении положить на стол (в

кювету) для просушивания, предохраняя от попадания прямых

солнечных лучей, пыли и мух.

11. Ранку на пальце обработать ватой, смоченной этанолом.

ОКРАСКА ТОЛСТОЙ КАПЛИ КРОВИ

Чем выше температура в помещении, тем быстрее окрашивается препарат, и наоборот. В среднем мазок окрашивается в течение 45—50 мин, толстая капля — 15—30 мин.

Если толстые капли сохранялись более недели неокрашенными, что само по себе действует как слабая фиксация, особенно в условиях жаркого климата, то препараты после окраски могут получиться недостаточно прозрачными из-за неполного гемолиза эритроцитов.

В таких случаях предварительно следует налить на препарат несколько капель дистиллированной воды. Через 10—15 мин гемоглобин эритроцитов переходит в воду, придавая ей буроватый оттенок, а толстая капля становится белесоватой. Воду сливают, каплю осторожно прополаскивают дистиллированной водой и затем наливают краску.

Можно окраску проводить и в специальных контейнерах, в которых стекла расположены на ребре, а выпадающая в осадок краска не портит препарат. Однако при этом возрастает риск смывания толстой капли со стекла.

Правильно окрашенная толстая капля имеет фиолетовый цвет, перекрашенная — темно-фиолетовый, недокрашенная — светло-голубой. Длительно хранившаяся при высокой температуре или зафиксированная толстая капля приобретает почти черный цвет.

Техника окраски толстой капли крови

Оборудование: плоская ванночка или кювета; подставки для окраски и сушка стекол; иипеткн; краска Романовского; дистиллированная вода или фосфатный буферный раствор; иммерсионное масло; вата; эфир; препараты крови для окрашивания; микроскоп.

Методика работы. 1. Предметные стекла с сухими толстыми каплями крови положить на подставку над кюветой препаратами кверху. Стекла не должны соприкасаться.

2. В стакан- налить дистиллированную воду или, лучше, фосфатный буферный раствор и добавить пипеткой краску Романовского из расчета 1 каплю на 1 мл воды.

3. Пипеткой нанести разведенный рабочий раствор краски так, чтобы она полностью покрыла препараты без образования пузырьков.

4. Оставить краску на препаратах на 30 мин, следя за тем, чтобы краска не стекла с препаратов, добавляя ее при необходимости пипеткой.

5. По окончании процедуры каждое стекло, не сливая с него краски, осторожно промыть слабой струей воды, например из стакана (сильная струя воды может смыть толстую каплю), до тех пор, пока промывная вода не станет бесцветной.

Примечание. Если сначала слить краску, а затем промывать, то образовавшаяся пленка краски может испортить препарат или послужить причиной диагностической ошибки.

6. Предметные стекла поместить в подставку для просушки в

вертикальном или наклонном положении, предохраняя от попадания пыли и солнечных лучей.

. 7. После просушивания препараты исследовать под микрокопом с масляной иммерсией. Оценить качество толстой капли и ее окраски.

8. Совместно с преподавателем провести микроскопию готовых препаратов малярийных плазмодиев в мазке и толстой капле крови.