15.Забор и исследование проб воды для исследования на наличие яиц гельминтов и цист простейших.

Пробы воды в зависимости от цели исследования берут в реке, озере, арыках, бассейнах, из колодцев или водопровода. Количество воды, взятой для анализа, должно быть тем больше, чем крупнее исследуемый водоем и чем прозрачнее вода.

Пробу рекомендуют забирать не всю сразу, а по 0,5 л через каждые 5—10 мин примерно в течение часа (если обследуется проточный водоем). При определении мест взятия проб необходимо учитывать вероятность загрязнения воды.

По методу 3. Г. Васильковой воду фильтруют через мембранные фильтры № 6 или фильтровальную бумагу ФО в аппарате Гольдмана под вакуумом. Затем влажный фильтр помещают на предметное стекло, добавляют несколько капель 50% водного раствора глицерина и микроскопируют.

В течение часа можно профильтровать 10 л речной воды при смене 10— 20 фильтров. Густой осадок с фильтра можно соскоблить на предметное стекло в каплю водного раствора глицерина и исследовать одновременно снятый осадок и оставшийся фильтр.

По методу Н. А. Романенко исследуют сточную воду. В стеклянный цилиндр помещают 1 л сточной воды и добавляют один из коагулянтов — сульфат алюминия, сульфат железа или сульфат меди в количестве 0,4—0,6 г/л, тщательно перемешивают.

Образующиеся в щелочной среде сточной воды обильные хлопья коагулянта в течение 40—50 мин полностью осветляют воду, увлекая с собой в осадок все взвешенные частицы, в том числе и яйца гельминтов.

Затем насадочный слой жидкости отсасывают, осадок переносят в центрифужные пробирки вместимостью 250 мл (на пробирку— 1 проба) и центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин, воду сливают. К осадку добавляют 2—4 мл 3 % раствора хлороводородной кислоты, растворяющей хлопья коагулянта. Повторно центрифугируют, надосадочный слой воды отсасывают.

После этого в пробирки добавляют 50—100 мл насыщенного раствора нитрата натрия, размешивают осадок и вновь центрифугируют 3 мин. Затем пробирки помещают в шататив, доливают пипеткой этот же раствор до образования выпуклого мениска и накрывают предметным стеклом. Через 20—30 мин отстаивания стекло снимают и микроскопируют. Содержимое пробирки размешивают стеклянной палочкой, вновь центрифугируют и процедуру анализа повторяют. С целью упрощения исследования центрифугирование с раствором нитрата натрия можно не проводить, достаточно только отстаивания раствора.

Обильный осадок сточных вод рекомендуется предварительно 2—3 раза отцентрифугировать с водой для его промывки при 1000 об/мин в течение 5 мин и 1 раз промыть 0,5—1 % раствором щелочи. Затем осадок исследуют как почву по методу Романенко.

16.Забор и исследование проб почвы, пыли с объектов окружающей среды для исследования на наличие яиц гельминтов и цист простейших.

Почву для исследования отбирают на индивидуальных и общественных огородах, полях орошения, территории усадеб, детских учреждений, рынков, мест игр детей, животноводческих ферм, в местах проживания владельцев скота и т. д. Исследуют также активный ил и осадок на очистных сооружениях, донные осадки в местах впадения сточных вод или других стоков в водоемы. После обследования участка намечают места для отбора проб, где можно ожидать наличие яиц гельминтов.

Пробы почвы отбирают с поверхности и на глубине 10— 20 см, а с иловых площадок, компостов—на глубине до 1 — 2 м.'

На однотипном участке {«точка обследования») почву собирают в 5—10 различных местах по 10—20 г, объединяя пробы в одну общей массой не менее 100—200 г. На территории одного объекта {усадьба, детский сад и т. д.) отбирают 10 проб.

Пробу помещают в плотно закрытую стеклянную посуду или полиэтиленовый пакет. Внутрь вкладывают этикетку с указанием места и условий отбора пробы.

Пробы, доставленные в лабораторию, желательно исследовать немедленно, так как яйца ряда гельминтов или личинки могут погибнуть и разрушиться. Хранить пробы рекомендуется в холодильнике {5 °С) не более месяца.

Для исследования по методу Н. А. Романенко из общей пробы отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.

Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования (для этой цели пригодна центрифуга марки ЦЛС-3) в течение 3 мин при 800—1000 об/мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают палочкой и вновь центрифугируют 3 мин.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным стеклом (размер 6X12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20—30 мин стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50 % водного раствора глицерина и микроскопируют. С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2—3 раза.

В очагах тениидозов и эхинококкоза обнаружение яиц затруднено тем, что они обладают определенной липкостью и, склеиваясь с частицами почвы, плохо всплывают во флотационном растворе. Поэтому предложено (Р. И. Бабаева, А. Н. Брудастов) пробу почвы замачивать на 20 ч в 1—2 % растворе стирального порошка, а затем обрабатывать в растворе следующего состава с относительной плотностью 1,4—1,42: натриевой селитры — 600 г; тиосульфата натрия — 500 г; хлорида натрия — 200 г; воды горячей — 1 л.

Флотационный раствор с еще большей относительной плотностью (1,46— 1,47) можно получить, растворив в 1 л горячей воды 900 г натриевой селитры и 400 г калиевой селитры.

При обследовании очагов геогельминтозов исследуют почву на наличие личинок методом Бермана). Отбирают пробу почвы массой 20—40 г. В прохладном помещении воронку с трубкой помещают в теплую воду. При высокой температуре окружающего воздуха рекомендуют почву предварительно охладить в холодильнике или положить сверху лед.

Исследование пыли проводят с помощью различных приспособлений, в частности камеры В. В. Каледина (рис. 11.1). Она представляет собой металлический цилиндр длиной 110—120 мм с внутренним диаметром 27 мм по ширине стандартного предметного стекла. В боковой стенке цилиндра прорезана всасывающая щель размером 25Х 1 — 2 мм. Внутри укреплены два взаимоперпендикулярных стержня, фиксирующих предметное стекло в диаметральной плоскости и продольном направлении. Один конец камеры закрывается съемной крышкой, другой, открытый, присоединяется к патрубку пылесоса. Для этой цели лучше всего подходит малогабаритный пылесос «Шмель», но можно использовать пылесос и другой конструкции.

На одну сторону предметного стекла наносят тонкий слой 50 % водного раствора глицерина в виде полоски шириной 1 — 1,5 см и длиной 4—5 см. Стекло вставляют так, чтобы смазанная глицерином поверхность была обращена к всасывающей щели камеры. Затем камеру закрывают крышкой и, обращая ее щелью к исследуемому предмету, производят сбор пыли.

Для одной пробы собирают пыль с поверхности площадью до 0,25 м2 или с одного предмета.

В процессе обследования учитывают состояние запыленности предметов {постельное белье, дорожки, мягкие игрушки и др.). Чем выше запыленность, тем меньше времени должно уходить на сбор пыли, иначе препарат получится очень плотным. На сбор одной пробы затрачивают 10 с.

После выключения пылесоса снимают крышку камеры, извлекают стекло, на котором хорошо видна пылевая дорожка — готовый препарат для микроскопирования. Даже единичные яйца, не обнаруживаемые другими методами, попадают и хорошо удерживаются на стекле. Если пылевая дорожка получилась слишком густой, то ее разводят раствором глицерина или переносят на несколько стекол и исследуют.