3.2. Теоретичні питання до заняття:

Термін

Визначення

1

2

Реакція зв’язування комплементу

Реакцією зв’язування комплементу – багатокомпонентна серологічна реакція, що полягає у взаємодії антигену з відповідним специфічним антитілом з утворенням специфічного комплексу антиген-антитіло та зв’язуванням комплементу. Утворений комплекс не викликає ніяких зовнішніх змін того середовища, в якому він утворився. Щоб встановити, чи відбулось зв’язування комплементу чи він лишився вільним (незв’язаним), в реакцію вводять другу систему (гемолітичну), яка в свою чергу складається з антигену (3% завис еритроцитів) та специфічної гемолітичної сироватки (взятої в потроєному титрі). За відсутності вільного активного комплементу гемолізу еритроцитів під дією специфічних гемолізинів не відбувається (реакція позитивна). У випадку невідповідності антитіла та антигену в першій системі, комплемент лишається вільним та в його присутності настає гемоліз другої системи (реакція негативна).

Моноклональні антитіла

Моноклональні антитіла (МКАТ) – антитіла, що отримують за допомогою гібридомних технологій. Належать до одного класу імуноглобулінів і реагують зі специфічним епітопом антигену, проти якого вони продуковані. В серологічних реакціях з міткою використання антитіл має цілу низку переваг у порівнянні з поліклональними антитілами, а саме: висока гомогенність, відсутність неспецифічних антитіл, простота розпізнавання і відсутність варіативності від партії до партії зразків.

1

2

Серологічні реакції з мітками

Серологічні реакції з міткою засновані на виявленні взаємодії антигену з антитілом з утворенням імунного комплексу антиген-антитіло за міткою одного з учасників реакцій, що виявляється або візуально, або за допомогою спеціальних високочутливих приладів, що дозволяють кількісно виявити мічений субстрат і, відповідно, невідомий антиген чи антитіло.

Мітка

В якості мітки застосовують або флуоресціюючий в ультрафіолетовому світлі барвник (ізоционат флюоресцеїну) при постановці реакції імунофлуоресценції (РІФ), або фермент (пероксидаза, лужна фосфатаза), що виявляється за зміною забарвлення відповідного субстрату при постановці імуноферментного аналізу (ІФА), або ізотоп, що виявляється радіометрією при постановці радіоімунного аналізу (РІА).

Реакція імунофлуоресценції

Реакція імунофлуоресценції (РІФ) заснована на властивості флуоресціюючих антитіл специфічно з’єднуватись з гомологічним антигеном і викликати їх світіння в фіолетовій і ультрафіолетовій частині спектру люмінесцентного мікроскопу. РІФ специфічна, високочутлива, використовується в основному для ідентифікації антигену і може бути здійснена в кількох варіантах.

1. Пряма РІФ – заснована на використанні імунофлуоресціюючих сироваток проти кожного досліджуваного антигену.

2. Непряма РІФ – заснована на використанні двох різних сироваток. Спочатку на першому етапі вживають немічені антитіла проти досліджуваного антигену, а на другому етапі реакції утворений комплекс антиген-антитіло обробляють флуоресціюючою сироваткою, що містить антитіла проти гамма-глобулінів того виду тварин, на яких була одержана специфічна немічена сироватка.

Імуноферментний аналіз

Імуноферментний аналіз (ІФА) заснований на використанні як мітки антитіл ферментів, здатних розкладати субстрати з утворенням забарвлених продуктів. Використовуються як прямий, так і непрямий варіанти ІФА. Суть її полягає в тому, що спочатку на якомусь твердому матеріалі сорбують антигени (або антитіла), а потім додають всі інші інгредієнти серологічної реакції. Як твердофазні носії антигену чи антитіл широко використовуються пластикові планшети, шарики, плівки, пробірки з різних синтетичних матеріалів. Адсорбовані на поверхні таких матеріалів антигени чи антитіла навіть у висушеному стані довгий час зберігають свою імунологічну специфічність і здатність вступати в серологічні реакції.

Наявність і активність ферменту, зв’язаного з антитілом чи комплексом антиген-антитіло виявляють і оцінюють візуально за інтенсивністю забарвлення після інкубації з відповідним субстратом. ІФА може бути виконаний за допомогою спеціального обладнання, в якому автоматично відбувається промивка реагентів буфером (вошер) та результат реєструється за допомогою фотометра (рідер).

Радіоімунний аналіз

Радіоімунний аналіз (РІА) заснований на використанні як мітки одного з компонентів серологічної реакції радіоактивних ізотопів. Метод найбільш чутливий і дозволяє виявляти незначні кількості реагентів. Як і при постановці ІФА використовують прямий і непрямий варіанти. Для проведення РІА і реєстрації результатів необхідна спеціальна радіометрична апаратура.