Методика окраски по методу Ожешко
На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлороводородной кислоты и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.
Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю- Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий.
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВКЛЮЧЕНИЙ (ЗЕРНА ВОЛЮТИНА У ДИФТЕРИЙНОЙ ПАЛОЧКИ). Зерна волютина – это запас питательных веществ, являющиеся внутриклеточным резервом фосфатов. Характерная особенность волютина – его способность к метахромазии, т.е. окраске в иной цвет, чем цвет красителя. Таким образом, зерна волютина представляют собой соединения, имеющие в отличии от цитоплазмы щелочную реакцию, и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно- синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет.
Методика окраски по методу Леффлера (простой метод)
Фиксированный мазок окрасить метиленовым синим 3-5 мин.
Промыть препарат водой, высушить и ми кроскопировать.
Зерна волютина выглядят красно- фиолетовыми на голубом фоне цитоплазмы.
Методика окраски по методу Нейссера (сложный метод)
На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин.
Добавить раствор Люголя на 10-30 сек.
Промыть мазок водой.
Мазок докрасить водным раствором везувина или хрезоидина в течение 0,5-1 мин.
Промыть мазок водой, высушить и микроскопировать.
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ. Многие микроорганизмы имеют капсулу, которая окружает микробную клетку в виде слизистого слоя. Капсулы могут быть различной величины и химического состава. Чаще они состоят из высокомолекулярных полисахаридов, реже в их состав входят белки. Основная функция капсул - защитная. Капсулы не воспринимают красители при обычных методах окраски. Для их выявления используют метод Бурри – Гинса.
Методика окраски по методу Бурри - Гинса (сложный метод)
Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифованным краем сделать мазок таким же образом, как мазок крови, высушить и зафиксировать.
На мазок нанести водный раствор фуксина на 1-2 мин.
Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать.
Бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно - розовом фоне.
Подпись преподавателя_________________________________________________________
ЗАНЯТИЕ №4.
Морфология микроорганизмов (актиномицеты, спирохеты, микоплазмы, риккетсии, хламидии)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
Изучить морфологию актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсии, хламидий.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
Морфологию актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсии, хламидий.
Принципы классификации изучаемых групп микроорганизмов
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
дифференцировать микроорганизмы в микропрепаратах
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
о методах окраски для выявления актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсии, хламидий
Работа №1. Методы выявления актиномицетов.
Цель: изучить морфологию актиномицетов.
Самостоятельная работа студента: микроскопировать, зарисовать, описать готовые микропрепараты из актиномицетов
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Теоретическая справка
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ АКТИНОМИЦЕТОВ. По химическому составу оболочка актиномицетов близка к оболочке бактерий, поэтому они окрашиваются анилиновыми красителями. Обычно их окрашивают простыми методами или по Граму. Актиномицеты являются грамположительными микроорганизмами.
С помощью прокаленного и остуженного скальпеля отрезают небольшой кусочек культуры актиномицета на плотной питательной среде и помещают его в каплю воды на предметном стекле. Каплю накрывают вторым чистым предметным стеклом. Стекла плотно придавливают друг к другу, растягивают и таким образом получают два мазка, которые высушивают, фиксируют обычным способом и окрашивают водным фуксином.
При микроскопии видно сплетение тонких нитей, истинное ветвление их и большое количество свободно лежащих эктоспор - конидий. В гистологическом срезе из органа при актиномикозе центральная часть друзы актиномицета представляет сплетение тонких нитей, окрашенных в темно-фиолетовый цвет. Отходящие на периферию концевые нити образуют колбовидные вздутия, окрашенные в розовый цвет.
Работа № 2. Методы выявления спирохет
Цель: изучить морфологию спирохет.
Самостоятельная работа студента: используя таблицы и готовые микропрепараты,
зарисовать, описать морфологию спирохет
А) Б) В)
Результат:
А) род Treponema___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) род Borrelia______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
В) род Leptospira____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Теоретическая справка
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ СПИРОХЕТ (ТРЕПОНЕМ, БОРРЕЛИЙ, ЛЕПТОСПИР)
Оболочка спирохет тонкая, эластичная, содержит большое количество липопротеидов до 70 80% и тонкий фрагментированный слой пептидогликана. Обычными методами трепонемы не окрашиваются, так как при фиксации спиртом оболочка легко разрушается и клетка не в состоянии удерживать красители. Спирохеты, так же как и простейшие, плохо окрашиваются: анилиновыми красителями. Для их дифференцирования применяют краску Романовского-Гимзы. Лучше окрашиваются боррелии (в синий цвет), хуже лептоспиры (розовый), еще хуже трепонемы (слабо - розовый). Кроме того, бледная трепонема покрыта мукополисахаридным чехлом, на переднем конце которой под клеточной стенкой имеется скопление протеолитических ферментов, с их помощью она способна активно внедряться в цитоплазму и даже ядро клеток организма хозяина.
Бледная трепонема покрыта мукополисахаридным чехлом, на переднем конце бледно трепонемы под клеточной стенкой имеется скопление протеолитических ферментов, помощью которых она способна активно внедряться в цитоплазму и даже ядро клеток организма хозяина