Вопросы для проверки исходного уровня знаний по общей вирусологии

1. Современная классификация вирусов.

2. Морфология вирусов.

3. Этапы взаимодействия вирусов с чувствительной клеткой.

4. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций:

а) экспресс-методы (иммунофлуюресцентный и др.) ;

б) вирусологический;

в) серологический;

г) морфологический.

5. Методы культивирования вирусов:

а) в куриных эмбрионах;

б) в культуре клеток;

в) в организме лабораторных животных.

6. Виды тканевых культур и основные этапы их получения.

7. Методы индикаций вирусов в культуре клеток, в организме животного и курином эмбрионе.

8. Серологические реакции, методы их постановки, цель приме­нения в вирусологии:

а) реакция торможения гемагглютинации - РТГА;

б) реакция биологической нейтрализации - РБН;

в) реакция связывания комплемента – РСК;

г) реакция непрямой гемагглютинации - РНГА;

д) иммуноферментный метод;

е) радиоиммунный метод;

ж) иммунофлюоресцентный метод.

9. Современные методы диагностики вирусных инфекций с применением методов ДНК-ДНК (РНК-РНК)-гибридизаиии.

10. Особенности противовирусного иммунитета.

Основные вопросы занятия:

1. Грипп. Этиология, эпидемиология, патогенез, лабора­ торная диагностика, профилактика и терапия.

2. Аденовирусные инфекции. Этиология, эпидемиология, па­ тогенез, лабораторная диагностика, профилактика и терапия.

3. Риновирусные инфекции. Этиология, эпидемиология, па­ тогенез, лабораторная диагностика, профилактика и терапия.

Самостоятельная работа студентов:

1. Стерильным ватным тампоном забрать друг и друга отделяемое слизистой носа и зева. Тампоны помещают в пробирки, содержащие 3-5 мл раствора Хенкса (или мясо-пептонного бульона с 10% нормальной сыворотки, или стерильного физиологического раствора).

2. Заразить смывом из зева куриные эмбрионы в аллантоис, амнион, на хорионалантоисную оболочку и в желточный мешок.

3. Студентам предлагается заразить мышей смывом из носоглотки инграназально.

4. Учесть результаты, обсудить и прокомментировать различные варианты от­ветов по результатам РСК с аденовирусным диагностикумом. Сделать за­ключение по серодиагностике аденовирусных инфекций (демонстрация).

5. Поставить РТГА (по схеме) с целью обнаружения вируса гриппа и определе­ния титра вирусных ГА.

Разведение вирус содержащей жидко­сти	Неразведенная жидкость	1:2	1:4	1:8	1:16	Кон­троль
I. Вируссодержащая жидкость	0,5	0,5
2. Физиологический раствор		0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
3. 1% Суспензия эритроцитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

Результат учитывается через 30 минут при комнатной температуре.

6. Поставить РТГА (по схеме) с целью типирования выделенного вируса и оце­нить результат.

№	Ингредиенты	1	2	3	4	5	6	7
		1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	К	К
1	Физиологический раствор		0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
2	Сыворотка 1:10	0,25	0,25				0,25
3	Вирус 4АЕ	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25		0,25
	40-60 минут при комнатной температуре
4	1% взвесь эритро­цитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

(-) - отсутствие гемагглютинации. Сделать заключение по серодиагностике гриппа (демонстрация PITA). Учесть ре­зультаты, оценить, обсудить и прокомментировать различные варианты ответов по результатам РТГА, поставленной с гриппозным диагностикумом.

Задание 2.

Провести вирусологическое исследование при аде­новирусных инфекциях.

Задача. В глазное отделение поступил больной с симптома­ми тяжелого кератоконъюнктивита. Было высказано предполо­жение о вирусной природе заболевания, в частности возможно­сти аденовирусной или герпетической инфекции. Отделяемое конъюнктивы было отправлено в вирусологическую лаборато­рию для выделения и идентификации вируса в культуре клеток. Учтите результаты, сделайте выводы, оформите протокол.

Методика 1. Выделение вируса в культуре клеток.

Исследуемый материал в различных разведениях (1:10, 1:100, 1:1000) в объеме 0,1—0,2 мл вносят в пробирки с куль­турой клеток (можно использовать как перевиваемые, так и неперевиваемые линии). В течение 7 дней наблюдают появле­ние цитопатического действия.

Методика 2. Идентификация вируса в реакции нейтрализации.

Вирус в рабочей дозе смешивается с соответствующей иммунной, диа­гностической сывороткой. Эта смесь инкубируется 1 - 1,5 ча­са при температуре 37 °С, затем помещается в культуру кле­ток. Учет реакции проводят по отсутствию цитопатического действия в культуре клеток, при наличии его в контроле.

Протокол исследования

Выделение вируса	Идентификация вируса
Исследуемый материал + культура клеток	Выделенный вирус + сыворотка к аденовирусу + культура клеток	Исследуемый вирус + сыворот­ка к вирусу герпеса + культура клеток
Рисунок	Рисунок	Рисунок

Вывод:

Ответить на вопросы:

1. Какой принцип лежит в основе идентификации вируса?

2. Какова этиология заболева­ния у данного больного? Почему?.

Задание 3

Изучить препараты для специфической профилак­тики и диагностики респираторных вирусных инфекций.

Методика.

Изучите аннотации к препаратам, рассмотрите препараты, определите различия специфических профилактических и ди­агностических препаратов. Запишите в форме протокола.

Протокол исследования

Цель...

Название препарата	Состав	Показание к применению	В каком методе лабораторного исследования используется и на каком этапе?	Какой вид иммуни­тета (по происхож­дению) создается в организме?