Ход определения.

К гемолизированной крови (гемолизат) добавляют серную кислоту и арсений. Пробу подвергают термообработке в течение 1 часа. Затем к ней добавляют ТХУ и раствор фильтруют. В полученный фильтрат вносят тиобарбитуровую кислоту. Окрашенное соединение формируется в условиях прогревания (40°C) течение 40 мин.

Для определения концентрации гемоглобина могут быть использованы наборы реагентов «Гемоглобин» («Био-Ла-Тест», «Лахема»), производства НТК «Анализ-Х и др., в основу которых положен гемоглобинцианидный метод исследования.

Приложение № 4.

Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1. Выполнение лабораторной работы.

4.2. Учёт результатов.

Приложение № 5.

Контроль конечного уровня знаний, умений.

5.1. Оформление работы. Вывод.

5.2. Запись кдз определения содержания гликированного гемоглобина.

Тест используется для диагностики сахарного диабета и наблюдения за состоянием углеводного обмена у страдающих им больных. Классическая исследования показали 2-3-кратное увеличение содержания гликозилированного гемоглобина у пациентов с диабетом по сравнению с уровнем его у здоровых людей.

Основные преимущества теста перед определением уровня глюкозы в сыворотке (плазме) крови следующие:

1. Если уровень глюкозы отражает гликемию на момент взятия материала для исследования, то уровень гликозилированного гемоглобина позволяет определить, насколько высоким был уровень сахара в крови у пациента на протяжении 2-3 месяцев.

2. Зависящая от особенности питания, стрессовых воздействий и других факторов гипергликемия приводит к гипердиагностике сахарного диабета. Все эти влияния не сказываются на результатах определения гликозилированного гемоглобина.

3. Тест установления содержания гликозилированного гемоглобина более специфичен для сахарного диабета, чем определение уровня глюкозы.

4. Метод определения НвА1с предусматривает удобные способы взятия, хранения и транспортирование проб крови для осуществления скрининга сахарного диабета (использование тест-полосок).

При определении гликозилированного гемоглобина следует иметь в виду, что процедуре определения могут мешать гемолиз, состояние уремии, беременность.

Реакция неферментативного гликозилирование неспецифична: при гипер-гликемии глюкоза взаимодействует не только с гемоглобином, но и с другими белками сыворотке крови, например альбумином.

Гликированию подвержены также липопротеины, фибриноген, белки тромбоцитов, плазматических мембран, эритроцитов.

5.3. Фронтальный опрос.

1. Какие соединения подвергаются неферментативному гликированию? Ответ: белки, контактирующие с глюкозой.

2. С чем связан процесс гликилирования? Ответ: наличие в белках свободных аминогрупп и содержание в плазме крови и тканях ациклических форм редуцирующих моносахаридов – глюкозы и др., продолжительности контакта с ними белков – альбумина и гемоглобина.

3. Почему у здоровых людей в биологических жидкостях мало гликированных белков? Ответ: т.к. содержание в биологических жидкостях ациклической формы глюкозы невелико.

4. На каком уровне находится содержание гликозилированных белков при нарушении углеводного обмена – сахарном диабете, галактоземии? Ответ: т.к. при нарушении углеводного обмена увеличивается уровень глюкозы, галактозы и др. моносахаридов в крови, то содержание гликозилированных белков даже превышает верхнюю границу нормы в 2-3 раза.

5. Назовите первый неферментативно гликозилированный белок, обнаруженный у человека. Ответ: гемоглобин А – НвА1с к аминогруппе концевого валина β-цепи присоединён остаток глюкозы.

6. Каковы свойства гемоглобина А? Ответ: обладает повышенным сродством к кислороду.

7. К чему приводит увеличение содержание НвА1с? Ответ: к гипоксии тканей, в крови увеличивается суммарный Нв за счёт стимуляции эритропоэзоа и в кровоток выбрасываются молодые формы эритроцитов.

8. Какие методы используются для обнаружения и количественного определения содержания гликозилированного гемоглобина? Ответ: методы хроматографического анализа, электрофорез, адсорбционная фотометрия и др.

9. Какова норма гликозилированного гемоглобина? Ответ: 6,0-8,3%.

10. В чём КДЗ определения гликозилированного гемоглобина? Ответ: уровень гликозилированного Нв не зависит от особенностей питания, стрессовых воздействий и др. факторов на гипердиагностику сахарного диабета. Этот тест более специфичен для сахарного диабета, чем определение уровня глюкозы.