Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия и обмен углеводов».

2. Рассказ преподавателя.

2. Указания к занятию. Методические рекомендации:

   1. Внимательно изучите методическую инструкцию.

   2. Внимательно изучите инструкцию к набору реактивов.

   3. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

   4. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, приборами, кровью.

   5. При работе с пипетками используйте резиновую грушу с переходником. Работайте в перчатках.

   6. Соблюдайте дезинфицирующие средства.

Практическая часть.

1. Вводное слово к проведению лабораторной работы.

Для обнаружения и количественного определения содержания гликозилированного гемоглобина используются методы хроматографического анализа, электрофоретического фракционирование, адсорбционной фотометрии и некоторые другие. В клинико-лабораторной практике наиболее широко используются колориметрические методы определения НвА1с

2. Лабораторная работа №1. Определение концентрации гликозолированного гемоглобина (набор фирмы «Лахема», поставляемый через НТК «Анализ-Х).

ПРИНЦИП: Стабильная форма гликогемоглобина НвА1с, содержащая 1-дезокси-1-(N-валил)-фруктозу, дегидратируется фосфорной кислотой с образованием 5-оксиметил-2-фуральдегида, взаимодействующего с 2-тиобарби-туровой кислотой с формированием комплекса, обладающего максимумом абсорбции при 443 нм.

Ход анализа.

1. Гемолизат с фосфорной кислотой вносят в пробирки, закрытые резиновыми пробками с вколотой в них инъекционной иглой. Пробы нагревают 30 мин. (на глицериновой бане) при 100°C.

После 10 мин. нагревания инъекционные иглы из пробок вынимают. По окончании дегидратации пробирки охлаждают в проточной воде в течение 10 мин., затем добавляют раствор ТХУ. После встряхивания содержимое пробирок центрифугируют, отбирают надосадочную жидкость, к которой добавляют раствор ТХУ. После перемешивания пробу инкубируют 40 мин. при 37°C в водяной бане. Измеряют оптическую плотность раствора и проводят расчёт по соответствующей формуле (см. инструкцию к набору).

В состав набора входят: бутылочка с катионитной смолой, склянка с лизирующим раствором и 40 сепараторов. В начале хода определение готовят гемолизат, в стеклянные пробирки отмеряют 3 мл катионитной смолы, затем вносят гемолизат и в каждую пробирку помещают сепаратор. Содержимое пробирки встряхивают 5 мин., после чего сепаратор размещают так, чтобы смола оказалась тесно «спрессованной». Содержащийся вверху раствор переносят непосредственно в измерительную кювету.

Параллельно определяют содержание «полного гемоглобина», производят расчёт результатов.

В норме на долю гликозилированного гемоглобина приходится 6,0-8,3%.

2. Фирмой «Реанал» предлагаются наборы реагентов, с помощью которых реализуется видоизменённый метод.

ПРИНЦИП: Глюкозу, связанную с первичными аминогруппами, отщепляют кислотно-каталитической термообработкой в виде 5-гидрокси-метилфурфурола. Это соединение, вступая в реакцию с тиобарбитуровой кислотой, даёт окрашенный продукт, абсорбцию которого замеряют при длине волны 443 нм.