- •М.В. Ефимова
- •ВВЕДЕНИЕ В ПРИКЛАДНУЮ БИОТЕХНОЛОГИЮ
- •ВВЕДЕНИЕ
- •Таблица 1
- •Таблица 2
- •ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
- •РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
- •РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
- •Таблица 3
- •Таблица 4
- •Окончание таблицы 4
- •Таблица 5
- •7.1.3.1. Культивирование микроводорослей в открытых системах
- •Таблица 6
- •Рис. 12. Схема сооружения для очистки сточных вод:
Современная биотехнология далеко ушла от той науки о живой материи, которая рождалась в середине прошлого века. Успехи молекулярной биологии, генетики, цитологии, химии, биохимии, биофизики электроники позволии получить новые сведения о процессах жизнедеятельности микроорганизмов.
В 1984 г. на Третьем съезде Европейской ассоциации биотехнологов в Мюнхене голландский ученый Е. Хаувинк разделил историю биотехнологии на пять периодов. Их характеристика приведена в табл. 1.
|
|
Таблица 1 |
|
|
|
|
Период |
Характеристика периода |
|
1 |
2 |
Допастеровский период |
Использование спиртового и молочнокислого |
|
(до 1865 г.) |
брожения при получении пива, вина, хлебопе- |
|
|
|
карных и пивных дрожжей, сыра, получение |
|
|
ферментированных продуктов и уксуса |
Послепастеровский |
Производство этанола, бутанола, ацетона, гли- |
|
период (1866–1940 гг.) |
церола, органических кислот и вакцин. Аэроб- |
|
|
|
ная очистка канализационных вод. Производст- |
|
|
во кормовых дрожжей из углеводов |
Период антибиотиков |
Производство пенициллина и других антибио- |
|
(1941 – 1960 г.г.) |
тиков путем глубинной ферментации. Культи- |
|
|
|
вирование растительных клеток и получение |
|
|
вирусных вакцин. Микробиологическая транс- |
|
|
формация стероидов |
Период |
управляемого |
Производство аминокислот с помощью микроб- |
биосинтеза |
ных мутантов. Получение чистых ферментов. |
|
(1961–1975 гг.) |
Промышленное использование иммобилизован- |
|
|
|
ных ферментов и клеток. Анаэробная очистка |
|
|
канализационных вод и получение биогаза. |
|
|
Производство бактериальных полисахаридов |
Период |
новой биотехно- |
Использование генной и клеточной инженерии |
логии (после 1975 г.) |
в целях получения агентов биосинтеза. Получе- |
|
|
|
ние гибридов, моноклональных антител, транс- |
|
|
плантация эмбрионов |
Современная биотехнология оказывает огромное влияние на все аспекты практической деятельности человека. С ее помощью в настоящее время получают десятки дорогостоящих биологически активных веществ (гормоны, ферменты, витамины, антибиотики, некоторые лекарства).
Огромна роль биотехнологии в медицине. Здесь благодаря применению генной инженерии, позволяющей «встраивать» чужие гены в клетки-продуценты, удается производить такие ценнейшие вещества, как человеческий инсулин, интерфероны и др.
6
Важное значение имеет биотехнология в экологизации промышленных производств на основе создания безотходных процессов; биотехнологические методы применяются для очистки воды; биологические методы подавления вредителей сельскохозяйственных культур уверенно вытесняют химические инсектициды. Благодаря биотехнологии разработаны и внедрены энерго- и ресурсосберегающие производства.
Биотехнологические процессы являются базой для получения кормового и пищевого белка. Биотехнологическим способом получают возобновляемые источники энергии.
Дальнейший прогресс человечества связывают с широким применением во всех сферах жизни электроники и биотехнологии.
Продукты биотехнологической промышленности можно условно разделить на крупнотоннажные (этиловый спирт, дрожжи, органические кислоты, фруктозные сиропы) и медикаменты, аминокислоты, гормоны
идругие продукты тонкого микробного синтеза.
2.КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ
2.1. СТРОЕНИЕ МИКРОБНОЙ КЛЕТКИ
Микроорганизмы, применяемые в биотехнологии, принадлежат к разным таксонометрическим группам (бактерии, сумчатые грибы, фикомицеты, актиномицеты и др.) и существенно отличаются друг от друга по морфологии, размерам клеток, отношению к кислороду, по потребностям к ростовым факторам, по способности ассимилировать разные компоненты субстрата и т.д. Наиболее широко используемыми микроорганизмами являются дрожжи, бактерии и микромицеты.
Из более чем 100 тысяч известных видов микроорганизмов в промышленности используют около 100 видов, к которым принадлежат несколько тысяч штаммов.
Из всех микроорганизмов, пожалуй, лучше всего изучена кишечная палочка Escherichia coli (рис. 1). Она открыта венским врачом Теодором Эшерихом.
Кишечные палочки в ограниченных количествах населяют органы пищеварения животных и человека и даже снабжают своих «хозяев» витаминами, которые они могут синтезировать из сахаров.
7
Рис. 1. Схематическое строение клетки Escherichia сoli: 1 – клеточная стенка; 2 – жгутики; 3 – рибосомы;
4 – запасные питательные вещества; 5 – плазмиды; 6 – нуклеотид
Ширина клетки E. сoli составляет около 1 мкм, длина – около 2 мкм. Стенки колибактерии образованы оболочкой, состоящей из деревянистых и жироподобных веществ. В стенках расположены маленькие запирающие поры, окруженные кольцами из белковых тел, и большое количество канальцев. Через эти отверстия пищевые вещества из питательной среды поступают во внутренний объем клетки. Снаружи клетка покрыта слизистой массой, из которой выступают длинные жгутики, которые непрерывно вращаются и продвигают бактерию. Клетка заполнена цитоплазмой. В цитоплазме находится около 200 млн. молекул сахаров. В накопительных отсеках клетки сахара отлагаются в форме крахмала. Кроме того, в цитоплазме около 30 млн. молекул аминокислот и 25 млн. молекул липидов. Из трех главных «строительных блоков» – сахара, аминокислоты и жира – построены почти все вещества клетки. Всего в одной клетке содержится около 1 млн. молекул белков, причем около 5000 из них – это белковые молекулы различных типов: фибриллярные, транспортные, ферменты.
Бактерии принадлежат к группе прокариот (доядерных), у которых, в отличие от эукариот (ядерных), ядра как такового нет. Оно может быть представлено в виде аналога – нуклеотида, или ядерное вещество просто диффузно распределено в протоплазме.
Главные функции ядерного вещества – хранение информации и передача информации дочерним клеткам при репликации.
В бактериальных клетках и в клетках низших эукариот присутствуют плазмиды – кольцевые двухспиральные молекулы ДНК длиной от
8
нескольких тысяч до ста тысяч пар оснований. Носителем генетической информации у большинства живых существ является дезоксирибонуклеиновая кислота, только у некоторых бактериальных вирусов и вирусов животных генетическая информация закодирована в рибонуклеиновой кислоте. Плазмиды играют важную роль в обмене генетической информацией между клетками микроорганизмов.
2.2. МЕТАБОЛИЗМ МИКРОБНОЙ КЛЕТКИ
Метаболизм – это вся сумма целенаправленных реакций, протекающих под действием ферментных систем клетки, которые регулируются различными внешними и внутренними факторами. Метаболизм обеспечивает все жизненные процессы в клетке в зависимости от среды обитания. В результате метаболизма происходит увеличение размеров клетки, ее деление. Обмен веществ клетки происходит тремя центральными метаболическими путями:
–из внешней среды в клетку поступает энергия либо в виде химической энергии органических веществ, либо в виде энергии солнечного света;
–из веществ питательной среды, перенесенных в клетку собираются «строительные блоки», которые формируют биополимеры клетки
исинтезируют макромолекулы белков, нуклеиновых кислот, углеводов, жиров и других клеточных компонентов;
–в клетке происходят постоянные синтез и разрушение биополимеров, выполняющих различные специфические функции.
Сверхсинтез, т. е. способность микроорганизма синтезировать определенный продукт в количествах, превосходящих физиологические потребности, довольно часто встречается в природе. Нередко тот или иной продукт обмена веществ (органические кислоты, спирты, антибактериальные вещества), выделяемый микроорганизмом в окружающую среду, является токсичным для других видов и служит продуценту как средство защиты обитаемого пространства или как резерв питательного вещества.
Обмен веществ у микроорганизмов можно рассматривать как сумму катаболизма и анаболизма. Катаболизм – это ферментативное расщепление крупных органических молекул с выделением свободной энергии. Анаболизм – это построение новых биополимеров клетки из простых соединений с поглощением энергии (рис. 2).
В результате этих двух параллельно протекающих процессов строится «тело» клетки, накапливаются необходимые клеткам запасные вещества, ферменты и промежуточные продукты обмена веществ.
Таким образом, обмен веществ слагается в клетке из конструктивного и энергетического обменов.
9
Катаболизм и анаболизм – это два самостоятельных пути в обмене веществ, но отдельные их участки могут быть общими. Такие участки называют амфиболическими.
В катаболических и анаболических процессах биохимические реакции следуют друг за другом в строжайшей последовательности, так как продукты реакции предыдущей стадии процесса, как правило, являются субстратом для протекания последующей стадии. Такая четкая преемственность возможна благодаря высокой специфичности ферментов, участвующих в обмене веществ.
Скорость протекания метаболических процессов зависит от состава питательной среды, от условий культивирования. Интенсивный обмен веществ между клеткой и средой обеспечивается большой поверхностью тела микроорганизма, через которую происходит поступление питательных веществ и выделение в окружающую среду продуктов обмена. На метаболизм клетки оказывают влияния изменения рН среды, концентрация субстрата, содержание продуктов метаболизма в среде и другие факторы культивирования. Регулирование метаболизма в клетке является очень сложным процессом.
Рис. 2. Схема метаболизма микробной клетки
10