Лабораторна робота № 2.2. Цитоплазматична мембрана. Міжклітинні з`єднання рослин.

Мета роботи

Дослідження прижиттєвих і постійних препаратів.

Завдання

Задокументувати мікроскопічні зображення, порівняти розміри.

Теоретичні відомості

Якщо виділити будь-яку клітину з організму тварини і помістити її в воду, то через короткий час клітина після набухання лопне, лізує. Це відбувається через те, що через плазматичну мембрану вода буде надходити в цитоплазму, в зону з більш високою концентрацією солей і органічних молекул. При цьому буде збільшуватися внутрішній об'єм клітини до тих пір, поки не розірветься плазматична мембрана. У складі організму тварин цього не відбувається, тому що клітини нижчих і вищих тварин існують в оточенні рідин внутрішнього середовища, концентрація солей і речовин в якої близька до такої в цитоплазмі. Вільноживучі в прісній воді одноклітинні найпростіші організми не лізуються (при відсутності клітинної стінки) через те, що у них постійно працює клітинний насос, відкачує воду з цитоплазми, - скорочувальна вакуоль.

Якщо ж ми в воду помістимо клітини бактерій або рослин, то вони не будуть ціалізуватися до тих пір, поки ціла їх клітинна стінка. Впливом набору різних ферментів ці стінки можна розчинити. В цьому випадку моментально відбувається набухання і розрив, лізис, клітин. Отже, в природних умовах клітинна стінка запобігає цей згубний для клітини процес. Більше того, наявність клітинних стінок є одним з головних факторів, що регулюють надходження води в клітину. Клітини бактерій і рослин мешкають переважно у гіпотонічній водному середовищі, вони не мають скорочувальних (видільних) вакуолей, щоб відкачати воду, але зате міцна клітинна стінка оберігає їх від надзвичайного набухання. У міру надходження води в клітині виникає внутрішній тиск, тургор, яке перешкоджає подальшому надходженню води.

Цікаво, що у багатьох нижчих рослин, наприклад у зелених водоростей, клітини мають добре сформовану клітинну оболонку, але при статевому розмноженні, коли утворюються рухливі зооспори, останні втрачають клітинну оболонку і у них з'являються пульсуючі вакуолі.

Клітинна стінка рослин формується за участю плазматичної мембрани і є екстраклеточной (позаклітинним) багатошаровим утворенням, що захищає поверхню клітини, службовцям як би зовнішнім скелетом рослинної клітини (рис. 158). Клітинна стінка рослин складається з двох компонентів: аморфного пластичного гелеобразного матриксу (основи) з високим вмістом води і опорною фібрилярний системи. Часто для додання властивостей жорсткості, незмочуваність та ін до складу оболонок входять додаткові полімерні речовини та солі.

У хімічному відношенні головні компоненти оболонок рослин відносяться до структурних полісахаридів.

До складу матриксу оболонок рослин входять гетерогенні групи полісахаридів, розчиняються в концентрованих лугах, геміцелюлози і пектинові речовини. Геміцелюлози є розгалужені полімерні ланцюги, що складаються з різних гексоз (глюкоза, маноза, галактоза та ін), пентоз (ксилоза, арабиноза) і уронових кислот (глюкуронова і галактуронова кислоти). Ці компоненти геміцеллюлоз поєднуються між собою в різних кількісних відносинах і утворюють різноманітні комбінації. Ланцюги геміцеллюлозних молекул не кристалізуються і не утворюють елементарних фібрил. Через наявність полярних груп уронових кислот вони сильно гідратованих.

Пектинові речовини - гетерогенна група, в яку входять розгалужені сильно гідратованих полімери, що несуть негативні заряди через безліч залишків галактуроновой кислоти. Завдяки властивостям своїх компонентів матрикс являє собою м'яку пластичну масу, укріплену фибриллами

Обладнання, матеріали і методи.

Мікроскопи, предметні скельця, скельця з лункою, скляні палички, петлі, покривні скельця.

Одноклітинні тварини – інфузорії, амеби; одноклітинні водорості, Дріжджі,

клітини крові людини, тварин.

Порядок виконання роботи і рекомендації

П

Рисунок 2. Базофільний лейкоцит

риготування мазків крові і фарбування їх гематоксиліном і еозином.Краплю свіжої крові наносять на дуже чисте, знежирене предметне скло поблизу від його краю і роблять мазок. Для цього до краплі на предметному склі прикладають ребром інше предметне (чи покривне) скло з відшліфованою гранню. При цьому кут між двома стеклами має становити близько 30°. При зіткненні скла з краплею остання розті­кається по границі двох стекол. Швидким рухом шліфованим склом проводять по предметному склу і крапля розмазується рівною смужкою. Мазок злегка підсушують на повітрі і фіксують 10 —20 хв у метиловому спирті. Потім мазок фарбують спочатку гематоксиліном Бемера чи Караччі, а потім 0,1 %-м водним розчином еозину.

Добрі результати дає фарбування мазків крові азуром ІІ-еозином.

Під час фарбування азуром 11-еозином ядра клітин забарв­люються у синьо-фіолетовий колір, зернистість еозинофілів — у червоно-оранжевий, а базофілів — у фіолетово-вишневий колір. Цитоплазма лімфоцитів і моноцитів — синьо-блакитна, еритроцити — оранжеві.

Контрольні запитання

• Вкажіть розміри спостеріганих клітин

• Опишіть процес виготовлення зрізів на мікротомі.

• Розкажіть про техніку вміщення препарату під покривне скельце.

• Які є методи фарбування зрізів і мазків фіксованих тканин?