Лабораторна робота № 3.4. Морфологія хромосом

Мета роботи

Завдання

Дослідження препаратів клітин тварин під світловим мікроскопом з використанням різних об’єктивів.

Теоретичні відомості

Хромосоми всіх еукаріотичних клітин побудовані по одному плану. Вони включають в себе три основних компоненти: власне тіло хромосоми (плече), теломерна, кінцевий ділянку, і центромеру. Найбільш просто влаштовані хромосоми дріжджових клітин: паличкоподібні тіло хромосоми на одному кінці має теломери, а на іншому - центромеру. Хромосоми тварин і рослин також є паличкоподібні структури різної довжини з досить сталою товщиною, але зазвичай мають два хромосомних плеча, з'єднаних в зоні центромери. Ця зона називається первинною перетяжкою. Відповідно обидва плеча хромосоми закінчуються теломерами. Хромосоми з рівними або майже рівними плечима називають метацентріческая, з плечима неоднакової довжини - субметацентрічними. Паличкоподібні хромосоми з дуже коротким, майже непомітним друге плече - акроцентрічні.

В області первинної перетяжки (центромери) розташований кінетохора - пластинчаста структура, що має форму диска. До нього підходять пучки мікротрубочок мітотичного веретена, що йдуть у напрямку до центриолях. Ці пучки мікротрубочок беруть участь в русі хромосом до полюсів клітини при мітозі.

Зазвичай кожна хромосома має тільки одну центромеру (моноцентричні хромосоми), але можуть зустрічатися хромосоми діцентріческіе і поліцентричний, тобто володіють множинними кінетохора.

У зоні первинної перетяжки присутня особлива, центромерная, сателітна ДНК, що відрізняється високим рівнем повторене нуклеотидних послідовностей.

Деякі хромосоми мають вторинну перетяжку. Остання зазвичай розташована поблизу дистального кінця хромосоми і відокремлює маленьку ділянку, супутник. Вторинні перетяжки називають, крім того, ядерцевих організаторами, так як саме на цих ділянках хромосом в інтерфазі відбувається утворення ядерця. Тут же локалізована ДНК, відповідальна за синтез рРНК. У хромосомах людини ядерцеві організатори розташовані в коротких плечах поблизу центромер.

Обладнання, матеріали і методи.

Мікроскопи, предметні скельця, скельця з лункою, скляні палички, петлі, покривні скельця. піпетки градуйовані на 2мл, 5 мл, 10мл, камера Горяєва, пробірки, чашки Петрі, мірні колби на 100 – 200 мл

Порядок виконання роботи і рекомендації

• Отримати постійні препарати – тонкі зрізи тканин тварин та людини

• При наявності фарбованих за різними методиками препаратів, підготувати до мікроскопії всю групу зрізів.

• Налаштувати освітлення і зображення в мікроскопі.

• Мікроскопувати зразки на різних ступенях збільшення.

• При дослідженні внутрішньої структури клітин слід віддавати перевагу найбільшому ступеню збільшення, що забезпечує імерсійний об’єктив х90.

• При роботі з групою зрізів візуалізувати одну й ту саму ділянку, використовуючи кілька препаратів що фарбовано за різними методиками.

• Мікрозображення занести в протокол лабораторної роботи, додати масштабну лінійку.

• Для перевірки масштабу зображень провести калібрування за сіткою камери Горяєва.

• В кінці роботи ретельно видалити залишки імерсійної олії з об’єктиву мікроскопа і препаратів.