Процес фарбування

1. На фіксований мазок наливають один з основних фарбників на 2—3 хвилини. Щоб уникнути опадів фарбують через фільтрувальний папір.

2. Зливають фарбу, акуратно видаляють фільтрувальний папір. Мазок заливають на 1—2 хв розчином Люголя або йодистим розчином, по Граму (водний розчин йодиду калія і кристалічного йода в співвідношенні 2:1) на 1—2 хвилини до почорніння препарату.

3. Розчин зливають, мазок прополіскують 96° етиловим спиртом або ацетоном, наливаючи і зливаючи його, поки і мазок не обезбарвиться і стікаюча рідина не стане чистою (приблизно 20-40-60 секунд).

4. Ретельно промивають скельця в проточній або дистилюючій воді 1—2 хв.

5. Для виявлення грам-негативних бактерій препарати додатково офарблюють фуксином або сафраніном (2—5 мін).

6. Промивають в проточній воді і висушують фільтрувальним папером.

Контрольні запитання

• Яку роздільну здатність мають мікроскопи оптичний та 2 типи (ТЕМ/РЕМ) електронних?

• Якими факторами пояснюються обмеження роздільної здатності для різних типів мікроскопів?

• Які різновиди оптичних мікроскопів вам відомі?

• Будова живої клітини.

Лабораторна робота № 1.5. Вивчення ознак рослинних клітин.

Мета роботи

Вивчення ознак рослинних клітин.

Завдання

Самостійно препарувати та дослідити мікропрепарат.

Теоретичні відомості

Підготовка матеріалу для фарбування

Досліджуваний матеріал розподіляють тонким шаром по поверхні добре знежиреного скла. Приготований мазок висушують на повітрі і після повного висихання фіксують.

Фіксація

При фіксації мазок закріплюється на поверхні скла, і тому при подальшому фарбуванні препарату мікробні клітки не змиваються. Крім того, убиті мікробні клітки забарвлюються краще, ніж живі. Розрізняють фізичний спосіб фіксації, в основу якого покладена дія високої температури на мікробну клітку, і хімічні способи, що передбачають застосування хімічних засобів, зухвалих коагуляцію білків цитоплазми.

Обладнання, матеріали і методи.

Мікроскопи, предметні скельця, скельця з лункою, скляні палички, петлі, покривні скельця.

Бактерії; нижчі рослини – водорості, мох, папороть.

Порядок виконання роботи і рекомендації

Фізичний спосіб фіксації: Скло з препаратом беруть пінцетом і плавним рухом проводять 2-3 рази над верхньою частиною полум'я пальника. Важ процес фіксації повинен займати не більш 2 с. Надійність фіксації перевіряють наступним прийомом: вільну від мазка поверхню скла прикладають до тильної поверхні лівої кисті. При правильній фіксації мазка скло повинне бути гарячим, але не викликати відчуття опіку (70—80 °С).

Хімічний спосіб фіксації: Для фіксації мазків застосовують метиловий спирт, ацетон, суміш Никіфорова (суміш етилового спирту 96 % і наркозного ефіру в співвідношенні 1:1), рідина Карнуа (етилового спирту 96 % — 60 %, хлороформу 30 %, крижаної оцетової кислоти 10 %). Скло з висушеним мазком занурюють в склянку з фіксуючою речовиною на 10-15 хвилин і потім висушують на повітрі.

Контрольні запитання

• Як відбувається фіксація клітин і тканин?

• Назвіть основні фіксуючі суміші.

• Як проводять зневоднення досліджуваного матеріалу?

• Як відбувається просочення досліджуваного матеріалу?