Лабораторна робота № 3.5. Дослідження брунькування дріжджових клітин

Мета роботи

Дослідження поділу клітин

Завдання

Дослідження постійних та живих мікропрепаратів.

Теоретичні відомості

Як постулює клітинна теорія, збільшення числа клітин відбувається виключно за рахунок розподілу вихідної клітини, попередньо подвоївши свій генетичний матеріал. Це - головна подія в житті клітини як такої, а саме завершення відтворення собі подібного. Вся «інтерфазних» життя клітин спрямована на повне здійснення клітинного циклу, що закінчується клітинним поділом. Саме ж поділ клітин - процес невипадковий, суворо генетично детермінований, де в послідовний ряд вибудувана цілий ланцюжок подій. Як уже зазначалося, поділ прокаріотів клітин протікає без конденсації хромосом, хоча повинен існувати ряд метаболічних процесів і, в першу чергу, синтезів ряду специфічних білків, що беруть участь в «простому» поділі бактеріальної клітини надвоє.

Розподіл всіх еукаріотичних клітин пов'язано з конденсацією подвоєних (реплікованих) хромосом, які набувають вигляду щільних нитчастих структур. Ці нитчасті хромосоми переносяться в дочірні клітини спеціальної структурою - веретеном поділу. Такий тип поділу еукаріотичних клітин - мітоз (від грец. Mitos - нитки), або каріокінезом, або непряме розподіл - є єдиним повноцінним способом збільшення числа клітин. Пряме поділ клітин або амитоз достовірно описано тільки при розподілі поліплоїдних макронуклеуса інфузорій, їх мікронуклеуси діляться тільки мітотичним шляхом.

Розподіл всіх еукаріотичних клітин пов'язане з утворенням спеціального апарату клітинного ділення. При подвоєнні клітин відбуваються дві події: розбіжність реплікованих хромосом і поділ клітинного тіла, цитотомії. Перша частина події у еукаріот здійснюється за допомогою так званого веретена поділу, що складається з мікротрубочок, а друга частина відбувається за рахунок участі акто-міозінових комплексів, що викликають утворення перетяжки у клітин тваринного походження або за рахунок участі мікротрубочок і Актинові філаментів в освіті фрагмопласта, первинної клітинної перегородки у клітин рослин

Обладнання, матеріали і методи.

Мікроскопи, предметні скельця, скельця з лункою, скляні палички, петлі, покривні скельця. піпетки градуйовані на 2мл, 5 мл, 10мл, камера Горяєва, пробірки, чашки Петрі, мірні колби на 100 – 200 мл

Дріжджі, тканини тварин та людини

Порядок виконання роботи і рекомендації

• Отримати зразки живих клітин та тканин.

• Підготувати для мікроскопії нативні (нефарбовані препарати) типів „висяча крапля” та „роздавлена крапля”.

• Приготувати мазки та інші препарати для фарбування.

• Фіксувати зразки хімічно та термічно

• Провести фарбування за методикою.

• Отримані препарати мікроскопувати. Фіксувати зображення на всіх доступних ступенях збільшення, починаючи з меншого в порядку зростання.

• При дослідженні внутрішньої структури клітин слід віддавати перевагу найбільшому ступеню збільшення, що забезпечує імерсійний об’єктив х90.

• Порівняти вигляд клітин фіксованих і фарбованих та нативних.

Контрольні запитання

• Порівняти зображення клітин фіксованих і фарбованих та нативних.

• Вказати розміри мікрооб’єктів.