3. Цитогенетический метод

Основу метода составляет микрооскопическое изучение кариотипа. Кариотип – это совокупность признаков хромосомного набора соматической клетки организма (форма хромосом, их количество, размеры). Он используется в диагностике хромосомных заболеваний. Различные отклонения, связанные с хромосомами, вызывают своеобразные изменения фенотипа в виде комплекса аномалий, называемых синдромами.

Этот метод стали применять с 60-ых годов ХХ века, после установления в 1956 году Дж. Тийо и А.Леваном точного числа хромосом человека. На Международных совещаниях в Денвере (1960), Лондоне (1963), Чикаго (1966) была разработана классификация и номенклатура хромосом человека . В соответствии с рекомендациями этих конференций хромосомы располагаются в порядке уменьшения их длины. Все пары аутосом пронумерованы арабскими цифрами с 1(самая крупная) до 22( самая мелкая) и 23 пара – половые хромосомы : ХХ или ХУ

По положению центромеры различают: равноплечие хромосомы (метацентрические), слабонеравноплечие (субметацентрические), сильнонеравноплечие (акроцентрические) В соответствии с морфологическими особенностями и размером хромосомы человека разделены на семь групп, которые обозначены буквами английского алфавита от А до G. Для дифференцировки хромосом со сходной морфологией и размерами используют специальную их обработку – дифференциальное окрашивание, в результате которого появляется специфический линейный рисунок по длине хромосомы, связанный с наличием по-разному окрашенных сегментов, уникальных для каждой хромосомы (рис.6)

Рис.6. Хромосомы человека после дифференциального окрашивания

По Ф. Фогелю и А Мотульски, 1989 (16)

Группа А (1-3) –крупные суб- и метацентрические хромосомы. Группа В (4-5) – крупные субметацентрические. Группа С – (6-12 и Х-хромосома) – средние суб- и метацентрические хромосомы. Группа D –(13-15)- средние акроцентрические хромосомы. Группа Е (16-18) – мелкие метацентрические хромосомы . Группа F (19-20) – самые мелкие метацентрические хромосомы. G (21-22) – мелкие акроцентрические хромосомы (рис 6.)

Препараты для анализа кариотипа готовят из делящихся клеток лейкоцитов периферической крови. Разработка методики приготовления и анализа хромосом ознаменовала возникновение новой отрасли исследований – клинической цитогенетики (более подробно о хромосомах см. гл. «Наследственный аппарат соматических и генеративных клеток человека»)

4.Метод генетики соматических клеток. Он основан на культивировании отдельных соматических клеток и получении из них клонов, с последующей их гибридизацией и селекцией. При гибридизации соматических клеток двух разных организмов образуются гетерокарионы-клетки, содержащие оба родительских ядра. В течение первых делений происходит постепенная утрата хромосом одного из ядер. Так при гибридизации клеток мышь х человек, случайным образом утрачиваются хромосомы человека, причем в разных гибридных клетках могут сохраняться разные хромосомы Функционирующие хромосомы синтезируют определенные белки. Остается только выяснить какие хромосомы за синтез каких белков отвечают. Это позволяет картировать хромосомы человека, изучать метаболические процессы, исследовать генные мутации, изучать мутагенную и канцерогенную активность химических веществ (18)