1 разделение и количественное определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге.

принцип метода: Электофорез-это движение заряженных частиц в поле постоянного эл.тока. Скорость перемещения молекул белков зависит от величин заряда, молекулярной массы , pH, ионной силы раствора. Белки сыворотки крови помещаются на полоску бумаги, смоченную буферным раствором, через которую пропускают постоянный электрический ток. При рН 8,6 белки сыворотки крови заряжаются отрицательно и под воздействием электрического тока перемещаются к аноду. Сыворотка крови содержит различные белки. С помощью электрофореза на бумаге выделяются 5 фракций: альбумины, α1, α 2,β,γ глобулины. Окрашивают белки раствором бронфенолового-синего, затем промывают, электрофореграммы сушат на воздухе. Белковые фракции окрашиваются в сине-зеленый цвет. Окрашенные пятна вырезают, краситель элюируют раствором щелочи. Мнтенсивность окраски каждой фракции определяют колориметрически на ФЭКе. Количественное определение белковых фракция на электрофореграмме можно установить путем элюирования краски и фотоколориметрирования и денситометрическим методом.

Нормы: Альбумины 53-62%, α1-Глобулины 2,7-5.1%, α2-Глобулины 7,4-10%, β-Глобулины 11-15%, γ-Глобулины 15-21,4%

Клинико-диагностическое значение: многие пат.состояния сопровождаются количественными изменениями соотношения белковых фракций крови-диспротеинемиями. Уменьшение содержания фракций альбуминов характерно для заб-й печени за счет снижения белоксинтез. функции гепатоцитов. Гипоальбуминемия сопровождаетя заб-ем почек, из-за потери белка с мочой. Увеличение содержания фракция а1 и а1-глобулинов при стрессе, воспал.процессах, при коллагенозах, метастазировании злокачественных образований. Фракция в-глобулинов растет при гиперлипопротеинемиях, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, кровоточащей язве желудка, гипотиреозе. Фракции г-глобулинов повышается при иммунных реакциях, вызв.вирусныи и бакт.инфекциями, Снижение г-глобулиновой фракции может быть при первичном и вторичном иммунодефиците.

2. Определение активности амилазы в слюне и в моче по Вольгемуту.Амилаза(диастаза)-фермент осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы.конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой слюнные и поджелудочная железы.

принцип метода метод основан на том что слюну разводят в определенной последовательности,после чего приливают одно и то же количество раствора крахмала и находят наименьшее содержание фермента,которое полностью расщепляет добавленное количество крахмала.затем производят пересчет активности фермента на 1мл слюны

активность амилазы или амилокластическая сила слюны выражается количеством 0.1% раствора крахмала в миллилитрах,которое расщемляется 1 мл слюны при температуре 37°С в течение 30 минут.

в норме активность амилазы слюны равна 160-320 единицам.

Клинико-диагностическое значение: имеет определение активности амилазы в крови, куда она попадает из поджелудочной железы(40%) и слюнных желез(40%). Амилазная активность крови по Вольгемуту сост 25-125 Ед/л. При остром панкреатите в первые сутки заб-я активность амилазы слюны возрастает в десятки раз, а затем постепенно возвращается к норме. Амилазная активность крови увеличивается также при паротите(воспалении слюнных желез). Амилаза именн небольшую молекулярную массу 45000, поэтому легко попадает в мочу через почечный фильтр.Опухоли или камни в протоке поджелудочной железы – нарушают отток амилазы из поджелудочной железы, что приводит к попаданию ее в кровь.

Эпидемический паротит, или «свинка» - это вирусное заболевание околоушной слюнной железы, которое характеризуется повреждением ее клеток с выходом амилазы в кровь.

3. Определение содержания пировиноградной кислоты в моче

Принцип: пировиноградная кислоты является одним из промежуточных продуктов углеводного обмена.ПВК взаимодействует с 2,4 динитрофенилгидразином в щел.среде,образует 2,4 динитрофенилгидразоны ПВК жел.-оранж. цвета, интенсивность окрашивания которых пропорциональна концентрации ПВК.Гидразоны кетоглутаровой, щавелвоеуксусной, дегидроаскорбиновой кислот нестойки в щел.среде и быстро разлагаются. Расчеты выполняют по калибровочному графику, при этом находим содержание ПВК в моче м мкг/мл. Найденную величину умножаем на суточный диурез(1500мл для мужчин и 1200 мл для женщин) и получаем содержание ПВК в суточной норме.

Норма:норма 10-25 мг. В сутки(113,7-283,9 мкмоль/сут)

Клинико-диагностическое значение: Увеличение выделения ПВК вс мочой наблюдается при авитоминозе и гиповитоминозе B1. Возрастает содержание ПВК при сахарном диабете,сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно-ажреналовой системы. При наркозе ПВК в крови снижается.

4. Количественное определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом.

Принцип: Глюкоза с помощью глюкозооксидазы окисляется до глюконовой кислоты с образованием пероксида водорода. Пероксид водорода в присутствии фермента пероксидазы окисляет краситель 4-аминоантипирин, превращая его в окрашенное соединение. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы и определяется фотоколориметрически.

Норма: 0.6-1.0 г/л (3,3-5,5 ммоль/л)

Клинико-диагностическое значение: Увеличение концентрации глюкозы в крови –гипергликемия-наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара(алиментарная гипергликемия), при клинической форме сахарного диабета, остром панкреатите, травмах, опухолях мозгла, повышении горм.деятельности зитовидной железы, коры и мозгового слоя надпочечников, гипофиза, сильном эмоциональном и психическом возбуждении. Уменьшение уровня глюкозы-гипогликемия- при передозировке или неоправданном назначении инсулина, некоторых формах гликогенозов, нарушении всасывания углеводоов, заболеваниях поджелудочной железы, сопровожд.гиперсекрецией инсулина, гиперплазия В-клеток островков Лангерганса(гиперплазия -клеток островков Лангерганса).

5. Количественное определение холестерина в сыворотке крови.

Принцип:холестерин который содержится в сыв.крови обрабатывается реактивом Лимбермана-Бурхарда(смесь уксусного ангидрида, ледяной уксусной кислоты и концентрированной H2SO4)при этом холестерин теряет воду и превращается в непредельный углеводород, который с уксусным ангидридом образует зеленое окрашивание. Интенсивность полученной окраски определяется на ФЭКе.

Норма: 4-6,5 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение: содержание холестерина в сыворотки крови у человека зависит от возрастаю Это связано с уменьшением продукции и секреции в кровь половых гормонов. Содержание холестерина в сыворотке крови у женщин детородного возраста ниже чем у мужчин. Половые различия в уровне этого показателя после 60 лет исчезают. Уровень крови холестерина отражает состояние липидного обмена. Обмен холестерина часто нарушается при различных заболеваниях. Гиперхолестеринемия отмечается при атеросклерозе, гипертонической болезни, ишемической болезни, ишемической болезни сердца, дислипопротеинемиях, сахарном диабете, гипотиреозе, подагре, хроническом алкоголизмеЮ заболеваниях печени, почек. Гиперхолестеринемия является фактором риска коронарного атеросклероза. Гипохолестеринемия возникает при гипертиреозе, голоданиях, синдроме мальабсорбции, поражении ЦНС, заб-ях легких, острой стадии восп.процесса, онкологических заболеваниях.