2.2.2. Мутагенные эффекты экстрактов лекарственных растений Chelidonium majus l., Cichorium intybus l., Tussilago farfara l.

Результаты мутагенной активности исследуемых соединений на штамме S. typhimurium ТА100 представлены на таблице 3.

Как видно из таблицы 3 водный экстракт чистотела большого во всех разведениях не индуцировали заметного превышения над спонтанным фоном мутирования штамма TA100 Salmonella typhimurium. Раствор алкалоидов Chelidonium majus L. также не проявил мутагенной активности в тесте Эймса.

При исследовании водных экстрактов Tussilago farfara L., Cichorium intybus L. В тесте Эймса было показано, что число индуцируемых мать-и-мачехой обыкновенной и цикорием обыкновенным в концентрациях l:10, 1:100 мкг/мл His+ревертантов, не превышало спонтанный фон мутирования (таблица 3). Так как число колоний-ревертантов в опыте и контроле различаются менее чем в 2.5 раза, то можно считать, что исследованные экстракты мать-и-мачехи и цикория не обладают мутагенной активностью в тесте Эймса.

Таблица 3

Результаты оценки мутагенного эффекта водного экстракта (ВЭЧ, ВЭЧ-1, ВЭЧ-2) и раствора алкалоидов (Ал-1,Ал-2,Ал-3) чистотела большого, водного экстракта мать-и-мачехи обыкновенной (ВЭМ, ВЭМ-1, ВЭМ-2),водного экстракта цикория обыкновенного (ВЭЦ, ВЭЦ-1, ВЭЦ-2) на штамме S.typhimurium TA 100 в тесте Эймса

Вариант	Число колоний His+ ревертантов/чашку
НК	85±2,6
ПК	287±6,4
ВЭЧ	60,5±1,8
ВЭЧ-1	76±2,3
ВЭЧ-2	70±2,1
ВЭМ	106±6,5
ВЭМ-1	51±3,9
ВЭМ-2	71±5,0
ВЭЦ	68±4,8
ВЭЦ-1	97±6,1
ВЭЦ-2	76±5,2
НК ДМСО	81±5,3
АЛ-1	83±5,5
АЛ-2	95±6,0
АЛ-3	104±6,4

А Б

Рисунок 1. Различные количества колоний – ревертантов в позитивном контроле (А) и в негативном контроле (Б)

1 2 3

4

Рисунок 2. Мутагенный эффект водного экстракта (1.ВЭЧ-1, 2.ВЭЧ-1:10, 3.ВЭЧ-1:100) чистотела большого на штамме S. typhimurium TA 100 в тесте Эймса, позитивный контроль (4)

1 2 3

Рисунок 3. Мутагенный эффект водного экстракта (1.ВЭЦ-1, 2. ВЭЦ-2) Cichorium intybus L. на штамме S. typhimurium TA 100 в тесте Эймса, позитивный контроль (3)

Таким образом, на основании результатов, полученных в бактериальной тест-системе (тест Эймса), исследованные экстракты лекарственных растений Chelidonium majus L., Cichorium intybus L., Tussilago farfara L. можно охарактеризовать как нетоксичные и немутагенные в исследованном диапазоне концентраций.

2.2.3. Антимутагенные эффекты экстрактов лекарственных растений Chelidonium majus l., Cichorium intybus l., Tussilago farfara l.

При исследовании водных экстрактов и алкалоидов лекарственных растений на штамме S. typhimurium TA 100, максимальный антимутагенный эффект в отношении известного мутагена азида натрия, был установлен для водного экстракта T. farfara L. как неразбавленного, так и в разведении ВЭМ 10^-1 75,2 %, 58 %, соответственно. При последующем разведении водного экстракта мать-и-мачехи ВЭМ 10^-2 антимутагенный эффект составил всего16,4 %(рисунок 6).

Известно, что листья мать-и-мачехи содержат горькие гликозиды, сапонины, каротиноиды, галловую, яблочную и винную кислоты, ситостерин, аскорбиновую кислоту, слизи, дубильные вещества, следы эфирного масла, минеральные соли, полисахариды инулин идекстрин (Кирпичников, 1981; Мать-и-мачеха обыкновенная — Tussilago farfara L., 2010).

Известно, что инулин — карбогидрат, содержащий неперевариваемые фрукто-олигосахариды, — оказывает благоприятное действие на развитие некоторых бактерий кишечной микрофлоры и считается бифидогенным фактором [Mitsuokaetal., 1987].

Более того, в ряде исследований показано, что бутират, образующийся при бактериальной ферментации инулина, обладает противоопухолевым действием [Reddyetal., 1997; Валышев, 2000].

Для алкалоидов Ch. majus L. в разведениях Ал 10^-1, Ал 10^-2 эффективность антимутагенного действия достигла 64,3% и 42,4%. При последующем разведении алкалоидов Ch. majus L. Ал 10^-3 составило 36 %, что свидетельствует о среднем ингибировании мутагенного эффекта (рисунок 7).

Максимальный антимутагенный эффект был установлен для водного экстракта Ch. majus L. неразбавленного (ВЭЧ) составило 44,8 %.

При последующем разведении водного экстракта Ch. majus L.

ВЭЧ 10^-1 ВЭЧ 10^-2 составило 29 %, 18,4, что свидетельствует о среднем и слабом ингибировании мутагенного эффекта (рисунок 8).

Имеется ряд исследований, свидетельствующих об антиканцерогенном действии экстрактов растений чистотела большого. Ким и Ли [Kim, Lee, 1997] показали, что экстракт растений чистотела оказывает ингибирующее действие на развитие опухоли желудка. Даже очень низкие дозы гомеопатического препарата Chelidonium 30 и Chelidonium 200 оказывали терапевтический эффект при индуцированном гепатоканцерогенезе у мышей [Карамова, 2010].

Установлено, что экстракт из Ch. majus L. обладает сильным антиоксидантным действием и ингибирует пролиферацию опухолевых клеток [Nadova, 2008]. Бисвас с соавт. [Biswasetal., 2008] показали, что экстракт чистотела большого обладает антикластогенным эффектом, снижая частоту хромосомных аберраций и микроядер в клетках костного мозга мышей. Известно, что чистотел большой содержит значительное количество биологически активных веществ: дубильные вещества, флавоноиды, сапонины, витамины А и С, органические кислоты (1,4–4,32 %),представленные хелидоновой, лимонной, яблочной, аскорбиновой и янтарной.

Данное растение характеризуется наличием алкалоидов (около 28 видов), оказывающих селективное цитостатическое действие на опухолевые

клетки человека в условиях in vitro. Экстракт корней, листьев растения содержит бензофенантридиновые алкалоиды, такие как хелидонин, хелеритрин, берберин идр., с которыми связывают антиканцерогенные эффекты экстрактов данного растения [Карамова, 2010].

Из результатов, представленных на рисунке 9, видно, что предварительная инкубация клеток тестерных штаммов с водным экстрактом Cichorium intybus L. как неразбавленного, так и в разведениях ВЭЦ 10^-1, ВЭЦ 10^-2 ингибирование мутагенного эффекта составил 63,3 %, 59,4 % и 45,5 %, что свидетельствует о сильном антимутагеном эффекте.

Актуальным на сегодняшний день является использование диетических пищевых волокон в продуктах питания, поскольку они обладают широким спектром действия на организм человека. Инулин и олигофруктоза - растворимые диетические волокна являются избирательными стимуляторами роста и энергетическими субстратами для бифидобактерий, что, в свою очередь, подавляет рост ряда вредных штаммов микроорганизмов. Инулин влияет на биологическую усвояемость кальция и магния, на снижение уровня холестерина и липидов в сыворотке крови. Инулин и олигофруктоза не повышают уровень глюкозы в крови, поскольку их гликемический индекс практически равен нулю. Наилучшим источником инулина и олигофруктозы является цикорий корнеплодный [Резникова, 2009].

Рисунок 6. Антимутагенное действие водного экстракта мать-и-мачехи обыкновенной в тесте Эймса. ВЭМ, ВЭМ 10^-1, ВЭМ 10^-2– водный экстракт мать-и-мачехи обыкновенной в соответствующих разведениях. НК – негативный контроль, ПК – Азид натрия (позитивный контроль), 4 мкг/чаш. % - Антимутагенный эффект

Рисунок 7. Антимутагенное действие алкалоидов чистотела большого в тесте Эймса. Ал 10^-1, Ал 10^-2, Ал 10^-3– алкалоиды чистотела в соответствующих разведениях. НК – негативный контроль, ПК – Азид натрия (позитивный контроль), 4 мкг/чаш. % - Антимутагенный эффект

Рисунок 8. Антимутагенное действие водного экстракта чистотела большого в тесте Эймса. ВЭЧ, ВЭЧ 10^-1, ВЭЧ 10^-2– водный экстракт чистотела в соответствующих разведениях. НК – негативный контроль, ПК – Азид натрия (позитивный контроль), 60 мкг/мл. % - Антимутагенный эффект

Рисунок 9. Антимутагенное действие водного экстракта цикория обыкновенного в тесте Эймса. ВЭЦ, ВЭЦ 10^-1, ВЭЦ 10^-2– водный экстракт цикория обыкновенного в соответствующих разведениях. НК – негативный контроль 4 мкг/чаш., ПК – Азид натрия (позитивный контроль), 60 мкг/мл. % - Антимутагенный эффект

Таблица 4

Результаты оценки антимутагенного эффекта водного экстракта (ВЭЧ, ВЭЧ-1, ВЭЧ-2) и раствора алкалоидов (Ал-1, Ал-2, Ал-3) Chelidonium majus L., водного экстракта (ВЭМ, ВЭМ-1, ВЭМ-2) Tussilago farfara L., водного экстракта (ВЭЦ, ВЭЦ-1, ВЭЦ-2) Cichorium intybus L.на штамме S. typhimurium TA 100 в тесте Эймса

Вариант	Число колоний His+ ревертантов/чашку	Антимутагенный эффект, %
ПК	368±13,1
ВЭЧ	232±10,2	44,8
ВЭЧ-1	280±11,3	29
ВЭЧ-2	312±12,0	18,4
ВЭМ	140±7,7	75,2
ВЭМ-1	192±9,2	58
ВЭМ-2	318±12,1	16,4
ВЭЦ	176±8,7	63,3
ВЭЦ-1	188±9,1	59,4
ВЭЦ-2	230±10,2	45,5
НК	65±4,7
Ал-1	168±8,5	64,3
АЛ-2	236±10,3	42,4
Ал-3	256±10,8	36
НК ДМСО	57±4,3

Итак, нами показано, что водный экстракт мать-и-мачехи обыкновенной неразбавленный проявил максимальный антимутагенный эффект, при последующем разведении антимутагенный эффект снижался. Водные экстракты цикория обыкновенного как неразбавленный, так и в разведениях проявили сильный антимутагенный эффект. Водные экстракты чистотела большого проявили средний антимутагенный эффект, в то же время раствор алкалоидов показывал сильный антимутагенный эффект.

ВЫВОДЫ

1. Выявлено, что водные экстракты чистотела большого не оказывали существенного токсического действия на тестерный штамм Salmonella typhimurium TA 100, тогда как раствор алкалоидов Chelidonium majus L. снижал процент выживаемости данных бактерий 2,5 раза. Водные экстракты Tussilago farfara L. и Cichorium intybus L. проявили ростостимулирующее действие на штамм S. typhimurium TA 100.

2. Водные экстракты лекарственных растений и выделенные алкалоиды охарактеризованы как немутагенные в исследованном диапазоне концентраций.

3. Антимутагенный эффект неразбавленных водных экстрактов возрастал в ряду: чистотел большой (45%)→цикорий обыкновенный (63%)→мать-и-мачеха обыкновенная (75%). При разбавлении растворов (1:10, 1:100) выявленная закономерность сохранялась. Антимутагенность выделенных алкалоидов чистотела была выше, чем у водных экстрактов этого растения, а эффект разбавления – ниже.

Благодарности

Работа была выполнена на базах кафедр физиологии и биотехнологии растений и микробиологии Казанского (Приволжского) федерального университета и лаборатории алкалоидовТашкентского института химии растительных веществ им. С.Ю. Юнусова.

Автор выражает благодарность доценту кафедры физиологии и биотехнологии растений Абдрахимовой Й.Р. и доценту к.б.н., ст. преп.кафедры микробиологии Карамовой Н.С. за всестороннюю поддержку и внимательное отношение к работе.

Научному сотруднику, Ташкентского института химии растительных веществ им. С.Ю. Юнусова, Абдуллаеву Исроилю за помощь в выделении алкалоидов и в освоении метода хроматографии.