2 курс / Нормальная физиология / ТКАНЕВАЯ ТЕРАПИЯ. ПЛАЦЕНТА

Рис.1. Влияние ПГАГ и гепарина на уровень МДА в гемопоэтических органах крыс

Изменение распределения эндогенного ГАГ в костном мозге и костных балках в норме и под влиянием ПГАГ или гепарина (в 10 полях зрения при увеличении х600)

– данные достоверно отличаются от контрольных значений.

Эксперименты по изучению скорости включения 3Н-тимидина в клетки и органы гемопоэтической системы показали ее значитель-

151

https://t.me/medicina_free

ное увеличение под воздействием ПГАГ, указывающее на интенсификацию синтеза ДНК, что подтверждает результаты морфологических исследований о повышении интенсивности пролиферативных процессов в этих органах. В этой ситуации представлялось необходимым оценить ответ на введение ПГАГ со стороны эндокринной системы

вее звеньях, взаимосвязанных как с пластическим обменом, так

ис гемопоэзом. Эти соображения обусловили выбор в качестве объектов такого исследования уровни кортизола, трийодтиронина и тироксина.

Инъекции ПГАГ увеличивали содержание кортизола в сыворотке крови, по видимому, за счет увеличения его синтеза надпочечниками (Михайлов Ю. М., 1966). Отмечено также стойкое повышение уровня ТЗ и снижение Т4, которое можно объяснить известным влиянием гормонов коры надпочечников на функционирование щитовидной железы, суть которого заключается в увеличении де-йодизации Т4 с образованием более активного ТЗ (Швец В. Н. и соавт., 1979). При исследовании влияния гепарина на содержание этих гормонов выявлена

152

https://t.me/medicina_free

однонаправленность его действия с ПГАГ, однако эффект гепарина был менее выражен по амплитуде и продолжительности. Влияние этого гликозаминогликана на содержание кортизола можно объяснить недавно открытой стимуляцией под его воздействием секреции АКТГ гипофизом (Ульянов А. М. и др., 1987; Шрейбер В., 1987). Вполне вероятно, что и другие препараты, содержащие ГАГ, способны аналогичным образом изменять гормональный статус организма.

В экспериментах по изучению распределения по органам и тканям меченого 125I кортизола у крыс максимальное содержание этого гормона выявлено в сыворотке, меньшее – в форменных элементах крови, тимусе, селезенке и минимальное – в костном мозге. Введение ПГАГ увеличивало долю кортизола, связанного с клетками крови икостногомозга,значительноуменьшалоегоуровеньв тимусеи практически не влияло на этот показатель в сыворотке крови и селезенке. Полученные данные свидетельствуют о существенном влиянии ПГАГ на характер и направленность процессов обмена и распределения кортикостероидов в центральных и периферических органах системы кроветворения, приводящих к активации процессов гемопоэза.

Рассмотрев влияние ПГАГ на систему гемопоэза в целом, можно констатировать, что этот препарат оказывает значительное стимулирующее влияние на костномозговое кроветворение, инициируя созревание клеток-предшественников при одновременной стимуляции стромы кроветворных органов. В пользу этого заключения свидетельствует вышеотмеченное нами улучшение состояния межклеточного матрикса. Усиление включения 3Н-тимидина в кроветворные органы указывает на активацию процессов синтеза в них нуклеиновых кислот. Гистологическое изучение селезенки крыс, получавших ПГАГ, показавшее увеличение ширины «светлых центров», в сочетании с результатами РБТЛ позволяет констатировать наличие у препарата ГАГ В-митогенного эффекта.

ПГАГ и входящие в него подклассы кислых гликозаминогликанов,

втом числе и гепарин, в модельной системе гомогената печени крыс дозозависимо уменьшали интенсивность одного из интегральных показателей тканево-клеточного гомеостаза – перекисного окисления липидов. При этом наибольший эффект в отношении этого показателя отмечался у ПГАГ в концентрации 10 мг / л, что подтверждает оптимальность выбранной дозы препарата (10 мг / кг) в экспериментах in vivo (рис. 3), показавших существенное снижение скорости ПОЛ в органах и тканях гемопоэза.

Введение животным преднизолона и циклофосфана вызывало у них снижение содержания ГАГ и повышение уровня уроновых кислот в органах и тканях гемопоэза, нарушение распределения ГАГ

вкроветворных, стромальных клетках и форменных элементах пери-

153

https://t.me/medicina_free

ферической крови. При применении циклофосфана отмечались более выраженные изменения содержания и обмена ГАГ, чем при введении преднизолона.

ПГАГ восстанавливал сниженный иммуносупрессорами уровень ГАГ в системе гемопоэза (рис. 4), сглаживал изменения концентрации УК и увеличивал содержание ГАГ в стромальных, молодых гемопоэтических клетках и межклеточном матриксе. Эффекты гепарина были менее выражены по интенсивности и продолжительности.

Рис. 4. Влияние ПГАГ на содержание ГАГ и УК в костном мозге на фоне циклофосфана или преднизолона

Изучение состояния костного мозга при воздействии преднизолона и циклофосфана показало изменение активности ростков кроветворения. Так, преднизолон в дозе 5 мг / кг вызывал стимуляцию эритроцитарного ростка кроветворения. Однако эти процессы происходили на фоне обеднения клеточного состава костного мозга и появления клеток – представителей патологического (макроцитарного) кроветворения, а также уменьшения количества полнокровных сосудов в костном мозге. Преднизолон в малой дозе вызывал некоторое увеличение количества клеток стромы костного мозга без нарушения лейко-эритробластического индекса.

Циклофосфан также значительно обеднял клеточное наполнение костного мозга, уменьшал количество полнокровных сосудов и содержание мегакариоцитов при снижении лейко-эритробластического индекса и появлении значительного количества гигантских клеток.

ПГАГ потенцировал усиление эритробластического кроветворения преднизолоном (5 мг / кг). Он стимулировал увеличение доли молодых (базофильных) форм нормобластов, стимулировал пролиферацию и стромальных механоцитов, уменьшал содержание гигантских

154

https://t.me/medicina_free

клеток. При этом нами также отмечалось увеличение более чем в 2 раза количества полнокровных сосудов в костном мозге. К окончанию эксперимента отмечалось выравнивание соотношений основных популяций клеток костного мозга с одновременной стимуляцией всех ростков кроветворения и стромальных клеточных элементов. ПГАГ на фоне преднизолона в малой дозе вызывал аналогичные изменения.

Вгруппе, получавшей ПГАГ на фоне циклофосфана, отмечалось восстановление содержания молодых форм клеток миелограммы, мегакариоцитов и клеток стромы костного мозга. ПГАГ увеличивал количество клеток, находящихся в стадии митоза, при этом усиливалась микроциркуляция в костном мозге. К завершению эксперимента ПГАГ восстанавливал нормальное соотношение эритроидного и грануломоноцитарного ростков костного мозга с одновременной нормализацией состава стромы и клеток костного мозга (увеличение доли их молодых форм и уменьшение содержания гигантских клеток). Препарат сравнения гепарин имел ту же направленность действия на костный мозг, поврежденный иммуносупрессорами, однако менее выраженную.

Гистологическое исследование селезенки показало, что преднизолон в дозе 5 мг / кг вызывал длительно сохранявшееся уменьшение размеров В-зоны, и в меньшей степени Т-зоны лимфоидных фолликулов селезенки, при одновременном уменьшении количества митозов.

Вмалой дозе преднизолон проявлял реверсию своих эффектов, стимулируя количество митозов и увеличивая размеры «светлых» центров лимфоидных фолликулов. Однако этот эффект был кратковременным.

Циклофосфан уменьшал размеры лимфоидных фолликулов за счет уменьшения ширины Т-зоны. Одновременно происходило снижение количества митозов в селезенке в целом.

ПГАГ на фоне преднизолона (в дозе 5 мг / кг) восстанавливал количество митозов в селезенке, значительно увеличивал В-зону при уменьшении Т-зоны, что позволяет констатировать длительное В-митогенное действие ПГАГ.

При введении ПГАГ на фоне циклофосфана на все сроки опыта восстанавливалась ширина лимфоидных фолликулов, измененная цитостатиком. Количество митозов ПГАГ достоверно приводил к норме. Параллельно с этим, по сравнению с группой, получавшей цитостатик, увеличивалась ширина «светлых» центров и уменьшалась – Т-зоны, атакжезначительноувеличивалоськоличествоклеток,находившихся на стадии митоза. Гепарин на фоне этих иммуносупрессоров несколько увеличивал количество митозов, не оказывая влияния на остальные показатели.

155

https://t.me/medicina_free

Изучение состояния периферической крови при воздействии ПГАГ на фоне иммуносупрессоров выявило, что при введении преднизолона в дозе 5 мг / кг достоверно увеличивался уровень ретикулоцитов, эритроцитови гемоглобинас одновременнымснижениемсодержания лейкоцитов. Изменялось и соотношение клеток лейкоформулы: к 6-м суткам отмечено увеличение доли сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов с уменьшением палочкоядерных нейтрофилов, а к окончанию эксперимента происходили обратные изменения. Преднизолон

вменьшей дозировке повышал уровень ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов (за счет палочкоядерных нейтрофилов с одновременным снижением эозинофилов), не изменял уровень гемоглобина в периферической крови. Циклофосфан, наоборот, вызывал стойкую ретикуло-, эритро-, лейко- и тромбоцитопению, а также в 2 раза снижал уровень гемоглобина в периферической крови. Одновременно с этим были отмечены изменения в лейкоформуле периферической крови (исчезновение молодых форм нейтрофилов с возрастанием старых). При сочетанииПГАГс преднизолономво всехдозахПГАГнаблюдалосьстойкое повышение количества ретикулоцитов, эритроцитов, нормализация уровня лейкоцитов и лейкоформулы периферической крови. Вместе с тем эффекты препарата ГАГ не затрагивали уровень гемоглобина

вкрови.

Вкомбинации с циклофосфаном ПГАГ проявлял антагонизм в отношении воздействия этого цитостатика на количество клеток в периферической крови: отмечалась нормализация уровня ретикулоцитов, эритроцитов, лейкоцитов. Положительное влияние ПГАГ на содержание тромбоцитов и гемоглобина, сниженное циклофосфаном, было менее выраженным. Гепарин на фоне введения иммуносупрессоров не оказывал существенного воздействия на содержание ретикулоцитов и лейкоцитов в периферической крови. Он лишь несколько восстанавливал уровни тромбоцитов, эритроцитов и гемоглобина, сниженные циклофосфаном.

Анализ изменений в системе эритрона (рис. 5) под воздействием циклофосфана показал, что в ней происходило длительное и значительное увеличение доли низко-стойких фракций эритроцитов с одновременным снижением более стабильных популяций эритроцитов. Эти сдвиги начинали уменьшаться лишь к окончанию эксперимента – 21-м суткам опыта.

Кислотные эритрограммы животных, получавших преднизолон в высокой дозе, в сравнении с группой, которой вводили циклофосфан, меньше отклонялись от нормы. При применении преднизолона в дозировке 0,1 мг / кг нами отмечались две волны повышения доли низкостойких популяций к 6-м и 17-м суткам эксперимента. В остальные сроки опыта резистентность эритроцитов к гемолитическому действию

156

https://t.me/medicina_free

соляной кислоты находилась в пределах контрольных значений. Характерная для преднизолона общая тенденция к увеличению количества неустойчивыхформэритроцитовнафонеповышенногосодержанияретикулоцитов, гигантских клеток и обеднения клеточного состава стромы костного мозга свидетельствует о неполноценности костномозгового кроветворения, приводящей к выходу в периферическую кровь незрелых, функционально неполноценных эритроцитов.

Рис. 5. Влияние ПГАГ на соотношение субпопуляций эритроцитов в норме и на фоне иммуносупрессии

По данным литературы (Гительзон И. И. и др., 1967), кислотная эритрограмма при воздействии экзогенных и эндогенных факторов, к которым можно отнести иммуносупрессивные воздействия циклофосфана и преднизолона, отражает не только изменения физиологического состояния эритроцитов, но и потенциальные возможности костномозгового кроветворения. При этом ее показатели часто значительно расходятся с показателями осмотической и механической эритрограмм, которые характеризуют только прочность эритроцитарной мембраны на разрыв (Гольдберг Д. И. и др., 1968). По-види- мому, механизм снижения химической резистентности эритроцитов на фоне высоких доз преднизолона заключается в описанных ранее в литературе нарушениях им водно-электролитного баланса клеток крови, нарушением микровязкости эритроцитарной мембраны, ее проницаемости; изменением содержания в ней холестерина, уровня и конформации фосфолипидов и протеогликанов (Калинина Т. Т., 1979.;

157

https://t.me/medicina_free

Ланкин В. З., 1986; Козинец Г. И. и др., 1997). Также известно, что такими мембранными эффектами обусловлены тимолитическое и дегенеративное действия кортикостероидов на соединительную ткань, составляющую строму кроветворных органов (Сергеев П. В. и др., 1971; Постриганева Т. Н. и др., 1980; Соловьев Г. М. и др., 1987).

ПГАГ на все сроки опыта проявлял антагонизм в отношении эффектов циклофосфана: нормализовал изменения в низкостойкой популяции эритроцитов, вызывал увеличение числа среднестойких эритроцитов и восстанавливал высокостойкую популяцию в эритроне.

Сочетание преднизолона (5 мг / кг) с ПГАГ приводило у крыс к достоверному повышению содержания на все сроки эксперимента среднестойких форм эритроцитов, что согласуется с вышеприведенными данными литературы. Несмотря на общее корригирующее действие ПГАГ на систему эритрона, измененного высокими дозами преднизолона, нами выявлено достоверное снижение высокостойкой популяции эритроцитов периферической крови крыс. ПГАГ, примененный на фоне воздействия малой дозы преднизолона, вызывал повышение низкостойкой фракции эритроцитов при одновременном сокращении популяции высокостойких клеток. Необходимо отметить, что на все сроки эксперимента ПГАГ потенцировал увеличение стабильной фракции эритроцитов.

Препарат сравнения гепарин, введенный в дозе 50 ЕД / кг на фоне циклофосфана, несколько удлинял протяженность эритрограммы. Применение гепарина в комплексе с преднизолоном незначительно увеличивало долю стабильных эритроцитов.

Изучение интенсивности включения меченого тимидина клетками гематопоэтических органов показало, что преднизолон в малой дозе стимулировал включение меченого тимидина в клетки гемопоэтических органов. ПГАГ (но не гепарин) усиливал это действие. Пр и Цф в иммуносупрессивных дозах снижали скорость включения изучаемой метки в органах и тканях, которая восстанавливалась при введении ПГАГ. Гепарин в аналогичном эксперименте был в два раза менее эффективен.

Таким образом, применение изученных иммуносупрессоров приводит к нарушению содержания и обмена ГАГ в гемопоэтических органах и тканях, а также обеднению стромальных элементов костного мозга при умеренной стимуляции патологического кроветворения. Применение ПГАГ приводило к нормализации содержания и обмена этих гетерополисахаридов в гемопоэтических органах и тканях, а также к восстановлению стромальных элементов костного мозга и нормального кроветворения в целом. Гепарин как препарат сравнения значительно уступал ПГАГ по своей терапевтической эффективности.

158

https://t.me/medicina_free

Преднизолон резко снижал включение меченого кортизола в кроветворные органы, с одновременным перераспределением его содержания в сыворотке и форменных элементах крови. ПГАГ на фоне преднизолона проявлял противоположное действие на этот процесс

ворганах гемо- и иммунопоэза: в костном мозге усиливал включение кортизола, одновременно с этим, ПГАГ действовал однонаправленно с преднизолоном – уменьшал включение меченого гормона в селезенке и тимусе.

При исследовании распределения меченого кортизола на субклеточном уровне было выявлено, что преднизолон уменьшал его включение в клеточную и субклеточные фракции. При введении ПГАГ на фоне преднизолона наблюдалось увеличение включения меченого кортизола в клеточные структуры вплоть до ядра клетки. Гепарин и гиалуроновая кислота действовали однонаправленно с ПГАГ, однако отмечалась их меньшая эффективность влияния на эти процессы. Исследование включения меченого кортизола в клеточные структуры позволяет сделать вывод о том, что ПГАГ значительно улучшает доставку кортизола к поверхности клетки, облегчает перенос его

вклеточные структуры и транспорт кортизола к точке приложения его действия – ядру клетки. Полученные данные позволяют частично раскрыть механизм взаимодействия ГАГ со стероидными гормонами, а также прояснить причины потенцирования ими многих эффектов глюкокортикостероида. В связи с этим можно сделать вывод о потенциальной целесообразности одновременного назначения малых доз преднизолона с ПГАГ для усиления фармакологического эффекта этого гормонального препарата, что, вероятно, позволит значительно снизить его побочные эффекты.

При введении циклофосфана ПГАГ более эффективно, чем гепарин, корригировал изменения содержания гормонов, вызванные им

всыворотке крови (рис. 6).

Эксперименты по оценке влияния ПГАГ на интенсивность включения ³Н-тимидина выявили его антагонизм по этому показателю с преднизолоном и циклофосфаном, что согласуется с наличием у препарата гематостимулирующих свойств. Таким образом, можно заключить, что ПГАГ является перспективным препаратом для коррекции и модуляции фармакологических эффектов цитостатиков и иммуносупрессоров.

159

https://t.me/medicina_free

Рис. 6. Влияние ПГАГ на уровень ряда гормонов на фоне преднизолона

ициклофосфана

Врезультате проведенных исследований в динамике подтверждено, что циклофосфан и преднизолон в терапевтических дозах вызывают существенное нарушение гомеостаза, подтверждаемое значительным снижением уровня гликозаминогликанов в органах и тканях гемопоэза. Выполненные исследования показали, что параметры содержания

иобмена ГАГ в тканях достаточно четко и своевременно характеризуют их патологические изменения. На этом основании можно заключить, что показатели метаболизма ГАГ, определяемые в плазме крови и мембранах эритроцитов, вместе с другими дополнительными исследованиями могут использоваться в практической деятельности клинических лабораторий в качестве важного диагностического показателя для выявления различных вариантов патологии системы кроветворения. Не вызывает сомнений также перспективность дальнейшего изучения гликозаминогликанов в качестве средства профилактики и лечения нарушений гемопоэза.

Выводы

1.ПГАГ оказывает активирующее влияние на процессы обмена ГАГ и нуклеиновых кислот в органах гемопоэза, обеспечивает гормональную регуляцию этих процессов и стимулирует кроветворение, не вызывая при этом появления патологических форм клеток крови.

2.В модельных субклеточных системах, популяциях клеток иммунной системы и в условиях введения в интактный организм показано, что препарат кислых гликозаминогликанов плаценты человека снижает интенсивность процессов ПОЛ, обладает митогенным, коми-

160

https://t.me/medicina_free