2 курс / Нормальная физиология / XXIV_съезд_физиологического_общества_им_И_П_Павлова

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

АНАЛИЗ СТАБИЛЬНОСТИ НЕЙРОННОЙ СЕТИ ГИППОКАМПА НА IN VIVO УРОВНЕ МЕТОДОМ МИНИАТЮРНОЙ ФЛУОРЕСЕЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ

Герасимов Е. И.1,*, Митенев А. В.1, Пчицкая Е. И.1, Чуканов В. С.1, Безпрозванный И. Б.1,2

1Санкт-Петербургский Политехнический университет им. Петра Великого, г. Санкт-Петербург 2Департамент физиологии Даллаского медицинского центра, Даллас, Техас, США

*e-mail: evgeniigerasimov1997@gmail.com

Нейронная сеть гиппокампа поддерживает высшие функции центральной нервной системы, играя неотъемлемуюрольвпроцессахобучения,формированияпамятииеевспоминания.Дляоценкистабильностинейроннойсети гиппокампа в данной работе был использован метод регистрации нейронной активности in vivo – минископ​ . Метод миниатюрной флуоресцентной микроскопии дает исследователям возможность регистрировать активность сотен нейронов одновременно у мышей в свободном движении. Он обеспечивает возможность определять состояние различных отделов мозга в различных условиях без каких-либо ограничений в передвижении мышей благодаря своему небольшому весу около 3 граммов. Визуализация «активации» нейронов достигается путем экспрессии в нейронах индикаторов, чувствительных к кальцию, например, GCaMPs, изменение флуоресценции которых коррелирует с возбуждением нейрональной клетки. Путем регистрации сетевой активности гиппокампа мышей in vivo в одних и тех же условиях в этом исследовании было показано, как различные статистические метрики, описывающие состояние сети, меняются или остаются стабильными изо дня в день, а также общее состояние нейронных цепей гиппокампа после сильного внешнего сдвига. Для этого производилась инъекция вируса AAV-GCaMP6f в гиппокамп 5-месячным диким мышам линии B6SJL, и через 3 недели над областью гиппокампа имплантировалась градиентная линза с последующей фиксацией опорной площадки. Изменения уровня кальция регистрировали с помощью Miniscope v3 в тесте «открытое поле». В качестве внешнего стимула применялось моделирования острого стресса. Состояние нейронной сети гиппокампа регистрировалось сразу после внешнего воздействия, 3 часа и 10 дней после. Количественный анализ осуществлялся разработанным нами программным продуктом «MinianHandler», который находится в свободном доступе. Было установлено, что большинство статистик, описывающих нейронную сетьгиппокампа,значительноувеличиваютсясразупослемоделирования«острогостресса»,например,всплесковая активность (p <0.0001), продолжительность активности нейронной сети (p=0.003), когда коэффициент корреляции Пирсона не отличался в нормальных и стрессовых условиях (p=0.74). Таким образом, минископ с последующим количественным анализом данных представляет собой мощный метод для изучения состояния нейронной сети на in vivo уровне.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 15 00049 (ИБ).

ДИСФУНКЦИЯ АСТРОЦИТОВ ГИППОКАМПА У ГЕНЕТИЧЕСКИ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННЫХ К АУДИОГЕННОЙ ЭПИЛЕПСИИ КРЫС ЛИНИИ КРУШИНСКОГО-МОЛОДКИНОЙ

Григорьева Ю. С.*, Наумова А. А., Николаева С. Д., Глазова М. В.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: y. s.belyaeva@gmail.com

Эпилепсия – ​одно из наиболее частых неврологических расстройств, которое часто сопровождается склерозом гиппокампа, вызванным значительными изменениями морфологии и функций гиппокампальных астроцитов. При этом затрагиваются все ключевые функции астроцитов, имеющие решающее значение для регуляции возбудимости нейронов. Известно, что у пациентов с височной эпилепсией были обнаружены мутации в генах, регулирующих работу астроцитов. Таким образом, нарушение глиальных функций может быть не только следствием эпилептиформной активности, но и причиной наследственной эпилепсии.

В наших экспериментах в качестве объекта исследования были использованы крысы линии Крушиского-Мо- лодкиной (КМ), генетически предрасположенные к аудиогенной эпилепсии, которые являются адекватной моделью височной эпилепсии у человека (Kulikov et al., 2022). Для выявления наследственных аберраций мы провели сравнение наивных крыс КМ с крысами Вистар. Чтобы выяснить, обусловлена ли аномалия астроцитов генетически или вызвана эпилептиформной активностью, мы проанализировали астроциты гиппокампа наивных и эпилептизированных крыс КМ. Для выяснения эффектов эпилептогенеза был проведен анализ через 7, 14 и 23 дня аудиогенного киндлинга. Основные маркеры, относящиеся к активности астроцитов, такие как GFAP,ALDH1L1,AQP4, EAAT1/2 и GABAT3, анализировали с помощью вестерн-блоттинга и количественной ПЦР.

Полученные данные показали, что астроциты наивных крыс КМ характеризовались пониженной экспрессией AQP4. Мы предполагаем, что снижениеAQP4 в гиппокампе крыс КМ передается по наследству и может опосредовать его судорожную предрасположенность. Известно, что дисфункция AQP4 коррелирует с активацией нейронов, сопровождающей приступы. Анализ эпилептизированных крыс показал, что кратковременный аудиогенный киндлинг (7 дней) влияет только на EAAT1, тогда как длительный киндлинг (14 и 23 дневный) приводит к увеличению экспрессии GFAPи дальнейшему снижениюAQP4, что сопровождается резким снижением экспрессии астроцитар-

31

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ных переносчиков ГАМКа и глутамата. Наши данные показали, что развитие эпилепсии у крыс КМ сопровождается нарастанием дисфункции астроцитов.

Работа поддержана грантом Российского научного фонда № 23 24 00342.

СНИЖЕНИЕ ВОЗБУДИМОСТИ НЕЙРОНОВ ГИППОКАМПА КРЫС ПОСЛЕ ДЛИТЕЛЬНЫХ ФЕБРИЛЬНЫХ СУДОРОГ

Грифлюк А. В.*, Постникова Т. Ю., Амахин Д. В., Соболева Е. Б., Зайцев А. В.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: Griflyuk.Al@mail.ru

Фебрильные судороги (ФС) – распространенное​ неврологическое нарушение раннего возраста. Как и многие негативные факторы, действующие на ранних стадиях развития, ФС могут привести к различным неврологическим нарушениям. Однако механизмы, которые лежат в основе этих нарушений, изучены недостаточно.

Цельисследования – ​изучитьвлияниедлительныхФCнасвойствапирамидныхнейроновгиппокампакрысраз- ного возраста.

Самцы крыс Вистар ввозрасте 10 дней подвергались воздействию высокой температуры окружающего воздуха, что приводило к повышению температуры тела и развитию ФС, которые длились не менее 15 минут. Контрольная группа – животные​ , которые на аналогичное время были отлучены от самки. На переживающих срезах мозга (400 мкм) животных трех возрастных групп (12, 21 и55 дней) были изучены биофизические свойства пирамидных нейронов поля CA1 гиппокампа методом патч-кламп в конфигурации «целая клетка». Для оценки базовой синаптической передачи регистрировали пресинаптический популяционный спайк (прПС) и полевой возбуждающий постсинаптический потенциал (пВПСП) в лучистом слое поля CA1 при увеличивающейся силе стимуляции. Методом парной стимуляции исследовали кратковременную синаптическую пластичность. Предрасположенность к судорогам у животных через 2 месяца после ФС оценивали спомощью метода максимальных электрошоковых судорог (МЭШ).

У крыс после ФС не было обнаружено изменений подпороговых мембранных свойств. Уживотных в возрасте 12 дней после ФС максимальная частота генерации потенциалов действия (ПД) была снижена, аадаптация частоты ПД была менее выражена. Уживотных ввозрастетрех недель наблюдается увеличение амплитуды прПСиуменьшение соотношениявход/выходмеждуамплитудамипВПСПипрПС.УкрысчерездвамесяцапослеФСтестМЭШпоказалзначительное увеличение порога для развития экстензии задних конечностей по сравнению сконтрольными животными.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об изменениях возбудимости нейронов после длительных ФС. Через два дня после ФС наблюдается снижение собственной возбудимости нейронов, а увеличение отношения амплитуд при парной стимуляции указывает на снижение вероятности пресинаптического выброса глутамата. У трехнедельных животных после ФС эффективность синаптической передачи в синапсах СА3-СА1 снижена. Увеличение порога для развития экстензии задних конечностей в тесте МЭШ говорит о сниженной предрасположенности к судорогам у животных через два месяца после ФС.

Финансовая поддержка: грант № 21 15 00430.

ВЛИЯНИЕ ДВИГАТЕЛЬНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ НА ЭКСПРЕССИЮ NG2 ПРОТЕОГЛИКАНА ПРИ ТРАВМЕ СПИННОГО МОЗГА КРЫСЫ

Давлетшин Э. Ф.1, Шигапова Р. Р.1,*, Сабиров Д. Х.1, Тимофеева А. В.1, Агеева Т. В.1, Мухамедшина Я. О.1,2

1Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, г. Казань 2Казанский государственный медицинский университет, г. Казань

*e-mail: Shigapova.r.r.7@gmail.com

Несмотря на большое количество исследований патогенеза нейротравм, молекулярные и клеточные механизмы, лежащие в основе изменчивости фенотипа NG2 глии при травме спинного мозга (ТСМ) на фоне двигательных нагрузок остаются полностью невыясненными. Для оценки влияния двигательной реабилитации на экспрессию NG2 протеогликана был проведен иммуногистохимический анализ спинного мозга в удаленных от эпицентра повреждения участках спинного мозга Th9, Th10, Th11. Для этого крысам опытной группы наносили контузионную ТСМ 1,5 м/с при помощи импактора и проводили двигательную реабилитацию. В качестве маркеров к NG2 экспрессирующим клеткам были использованы антитела к белкам NG2, S100A10, lba1 и GFAP. Колокализацию NG2 протеогликана и S100A10+, lba1+ и GFAP+ клеток оценивали количественным подсчетом популяций клетоки при помощикоэффициентаПирсона. Анализ уровняэкспрессиимРНКгенов NG2, GFAP,C3, Chat проводили при помощи ПЦР-РВ. Регистрация показателей М- и Н-волн, моторно-вызванных потенциалов коры головного мозга, а также соматосенсорных вызванных потенциалов проводилась с использованием электронейромиографа «Нейрософт». Средняя интенсивность флуоресценции NG2 протеогликана и GFAP в передних рогах спинного мозга была снижена в постреабилитационной группе в области Th9 на 28 сутки. Отсутствие статистически значимых различий при анализе коэффициента Пирсона NG2 продуцирующих GFAP+ клеток в каждой из экспериментальной группе на всех удалениях говорит о преимущественной роли NG2+ микроглии

32

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

в ремоделировании приближенной к очагу поражения участке спинного мозга у постреабилитационной группы. Данный факт коррелирует с увеличением концентрации Iba1+ и NG2+/Iba1+ клеток вблизи области повреждения Th9 у крыс на 28 сутки. На расстояниях Th10, Th11 у крыс с реабилитацией количество NG2+/Iba1+ клеток уменьшалось. Увеличение провоспалительных S100A10+ астроцитов на удалении от области травмы прослеживалось как в группе с травмой, так и реабилитацией 28 суток. Экспрессия мРНК генов не претерпевает значимых изменений в сером и белом веществе на всех указанных расстояниях. Анализ амплитуды М-волны в межгрупповых сравнениях показал достоверное повышение значений амплитуды М-ответа на 56 сутки, по сравнению с 28, вне зависимости от проведения реабилитации. Увеличивалась амплитуда Н-ответа на 56 сутки, однако полное восстановление до уровня интактных крыс не наблюдалось. Изменение латентности М- и Н-волн между группами не наблюдалось.

Исследование выполнено в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского федеральногоуниверситета(ПРИОРИТЕТ 2030)изасчетсредствгрантаРоссийскогонаучногофонда№ 22 75 00035.

ВЛИЯНИЕ ОВЕРЭКСПРЕССИИ ЛИГАНДА СИГНАЛЬНОГО ПУТИ WNT НА ПОВЕДЕНИЕ И ДОЛГОВРЕМЕННУЮ ПОТЕНЦИАЦИЮ В СИНАПСАХ CA3-CA1 ГИППОКАМПА НА ФОНЕ ХОЛИНЕРГИЧЕКОГО ДЕФИЦИТА У КРЫС

Добрякова Ю. В.*, Герасимов К. А., Корягина А. А., Короткова Т. А., Волобуева Ю. Е., Большаков А. П., Маркевич В. А.

Институт Высшей Нервной Деятельности и Нейрофизиологии РАН, г. Москва

*e-mail: julkadobr@gmail.com

Холинергическая дисфункция, возникающая в результате дегенерации холинергических нейронов, является одним из компонентов патогенеза ряда нейродегенеративных заболеваний. Сигнальный каскад wnt, являющийся одним из критических в онтогенезе для формирования организма, сохраняет свою роль и в зрелом мозге, выступая

вкачестве регулятора внутриклеточных процессов и синаптической пластичности. Каскад wnt регулирует активность киназы гликоген синтазы 3-бета, гиперактивация которой приводит к гиперфосфорилированию тау. В работе проанализировали влияние активатора wnt каскада wnt3a в условиях холинергического дефицита, вызванного иммуннотоксином 192IgG-сапорин (192-SAP) на долговременную потенциацию в синапсах CA3-CA1 гиппокампа и поведенческие показатели у крыс линии Wistar. Для индукции холинергического дефицита животным в медиаль- нуюсептальнуюобластьвводили192-SAP.Вируснуюконструкцию,оверэкспрессирующуюwnt3aиликонтрольную конструкцию инъецировали билатерально в область CA1 гиппокампа. На фоне введения 192-SAP отметили статистически значимую гибель холинергических нейронов по сравнению с животными из контрольной группы. Эффективность синаптической передачи оценивали по изменению амплитудно-временных характеристик фокальных потенциалов поля CA1 в ответ на стимуляцию вентральной гиппокампальной комиссуры. На фоне введения 192-SAP наблюдали снижение амплитуды долговременной потенциации (ДП) по сравнению с показателями у животных, которым вводили конструкцию, несущую wnt3a. В тесте «открытое поле» у крыс с оверэкспрессией wnt3a наблюдали более высокую частоту выходов в центральную зону арены и увеличение времени пребывания в центре арены по сравнению с животными из других групп. Сенсомоторная координация в тесте “сужающаяся дорожка” у животных, на фоне введения 192-SAP была нарушена. У крыс, которым вводили вирусы для оверэкспрессии wnt3а, значения поведенческих показателей были сопоставимы со значениями показателей у контрольных животных. ВY-образном лабиринте показали, что у животных, которым вводили 192-SAP наблюдали снижение процента чередований по сравнению с животными из контрольной группы и крыс, которым инъецировали конструкцию, оверэкспрессирующую wnt3a. Наши данные свидетельствуют о том, что оверхэкспрессия wnt3a у крыс, которым вводили 192-SAP, может привести к улучшению поведенческих характеристик и частично восстановить синаптическую пластичность

внейронах области CA1 гиппокампа.

ЭЛЕКТРИЧЕСКИЕ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СОМАТОСЕНСОРНОЙ КОРЕ КРЫС С ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИЕЙ ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ФОКАЛЬНОЙ ИШЕМИИ

Еникеев Д. Р.1,*, Богатенков Г. Е.2, Ситдикова Г. Ф.2

1Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, г. Санкт-Петербург 2Казанский (Приволжский) федеральный университет, г. Казань

*e-mail: danielveenik@gmil.com

Гомоцистеин (ГЦ) представляет собой эндогенную серосодержащую аминокислоту, которая образуется в метаболическом цикле метионина в результате реакции трансметилирования. В высоких концентрациях гомоцистеин обладаетнейротоксическимиэффектами,атакжевызываетразвитиеэндотелиальнойдисфункции,снижениесинтез эндогенного оксида азота (II) и повышает риск инсульта. Целью работы было оценить особенности электрической активности и морфологические изменения в соматосенсорной коре крыс с пренатальной гипергомоцистеинемией

33

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

(гГЦ) в модели транзиентной фокальной ишемия аппликации эндотелина 1.

Эксперименты выполнены на крысах-самцах линии Wistar (Р27 35). Крысы контрольной группы были рождены от самок на стандартном рационе питания. Крысы с пренатальной гГЦ (группа ГГц) были рождены от самок, получавшихежедневнометионин(7,7г/кгкорма),начинаястрехнедельдоивовремябеременности.Концентрация гомоцистеина в плазме крови потомства составила (16,1±0,9 мкМ.). Электрическую активность регистрировали

впервичной соматосенсорной коре с использованием линейных 16 канальных электродов (Neuronexus, MI) in vivo. Эндотелин 1 (ЭТ 1) (4 5 мкл апплицировался на твердую мозговую оболочку в область с электродом. Затем срезы головного мозга толщиной 400 мкм окрашивались 2,3,5-трифенилтетразолия хлоридом (ТТХ), который использовали в качестве красителя для идентификации нормальной и поврежденной ткани.

При аппликации ЭТ 1 мы наблюдали ишемический очаг – ​неокрашенную зону в месте регистрации. У контрольной группы очаг наблюдался лишь в 30 % случаев, в то время как у ГГЦ группы – ​в 50 %. Площадь очага поражения у ГГЦ группы была больше, чем у контрольной группы (1,8 мм2 против 0,76 мм2). При аппликации ЭТ 1

вкоре возникала РКД в 30 % случаев у животных в контрольной группе и во всех экспериментах у группы ГГЦ с более коротким латентным периодом. Кроме того, наблюдали угнетение сенсорно-вызванного потенциала (СВП)

вслое L4 быстрее у ГГЦ группы. В обеих группах к концу отмывки СВП не вернулись начальному уровню. Частота МПД в слое С4 у контрольных животных снижалась в течение первых пяти минут аппликации и восстанавливалась через 30 минут до фоновых значений. В гГЦ группе МПД снижалась в течение 61,6±18,5 сек, восстановление происходило только к концу 2 часа отмывки.

Таким образом, животные с гГЦ демонстрировали большую чувствительность соматосенсорной коры к аппликации ЭТ 1. Полученные данные доказывают, что повышенные уровни гомоцистеина усугубляют нейрональные повреждения при развитии ишемии.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 20 15 00100.

ИНГИБИТОРЫ СЕРИНОВЫХ ПРОТЕАЗ КАК АНТАГОНИСТЫ ИОНОТРОПНЫХ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ NMDA ТИПА

Жигулин А. С.*, Барыгин О. И.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: arseniy.zhigulin@yandex.ru

Многие фармакологические агенты ингибируют NMDA рецепторы как дополнительную мишень. Пример такого соединения – ​нафамостат – ​ингибитор сериновых протеаз, который помимо своего основного действия является ингибитором NMDAрецепторов и проявляет нейропротекторные эффекты. При этом механизмы действия нафамостата на NMDAрецепторы ранее не исследовались. Также до этого не было установлено, проявляют ли активность поотношениюкNMDAрецепторамдругиеингибиторысериновыхпротеаз,схожиепоструктуреснафамостатомпо наличию амидиновых и/или гуанидиновых группировок, такие как сепимостат, габексат и камостат.

Эксперименты проводились на изолированных пирамидных нейронах зоны CA1 гиппокампа крыс линии Вистар (13 18 дней). Изоляция нейронов из срезов осуществлялась методом вибродиссоциации. Регистрация трансмембранных токов, вызванных аппликацией агонистов, проводилась методом локальной фиксации потенциала в конфигурации «целая клетка» при потенциале –80 мВ.

Нафамостат, сепимостат и габексат ингибировали NMDA рецепторы концентрационно-зависимым образом, значения ИК50 составили 0.20 ± 0.04, 3.5 ± 0.3 и 16 ± 3 мкМ, соответственно. Камостат оказался слабо активным (ИК50 > 100 мкМ). Нафамостат действовал потенциал-зависимо (zδ = 1.2 ± 0.3), у сепимостата наблюдалась как по- тенциал-независимая, так и потенциал-зависимая (zδ = 1.1 ± 0.3) компонента, а действие габексата от потенциала не зависело. Нафамостат и сепимостат демонстрировали хвостовые токи и не проявляли признаков «ловушки», что свидетельствует о «foot-in-the-door» механизме блокады, в то время как габексат не проявлял признаков блокады канала и не конкурировал с агонистом за сайт связывания, что говорит о его аллостерическом действии.

Таким образом, ингибиторы сериновых протеаз, содержащие две заряженные группы действовали как «foot- in-the-door» блокаторы NMDAрецепторов, в то время как соединения с одной заряженной группой оказались менее активными и действовали как аллостерические антагонисты. Полученные результаты расширяют представление о механизмах действия уже использующихся фармакологических агентов на NMDAрецепторы.

Исследование поддержано Минобрнауки РФ (Соглашение № 075 15 2022 296 от 15.04.2022 г. на создание и развитие НЦМУ «Павловский центр»).

34

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ДИНАМИКА ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ АСТРОГЛИАЛЬНЫХ И МИКРОГЛИАЛЬНЫХ БЕЛКОВ В МОЗГЕ КРЫС, ПЕРЕНЕСШИХ НЕОНАТАЛЬНЫЕ ФЕБРИЛЬНЫЕ СУДОРОГИ

Захарова М. В.*, Коваленко А. А., Зубарева О. Е., Зайцев А. В.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: zaharova-masha@yandex.ru

Фебрильные судороги (ФС) являются наиболее распространенной формой детских судорог. Длительные или повторяющиеся судороги могут привести к необратимым изменениям в развивающемся мозге, увеличивающим рискразвитияэпилепсиивовзросломвозрастеиформированиянервно-психическихнарушенийикогнитивногоде- фицита. В последние годы активно обсуждается роль глия-нейрональных взаимодействий в патогенезе эпилепсии. Предполагается, индукция ФС в период созревания глиальных клеток может существенно нарушить нормальное развитие мозга и способствовать развитию эпилепсии. Целью исследования был анализ динамики изменений экспрессии генов астро- и микроглиальных белков в височной коре, дорзальном и вентральном гиппокампе крыс в норме и после ФС.

В эксперименте были использованы крысы самцы Wistar в возрасте 10 11 дней жизни. ФС индуцировали потоком теплого воздуха температурой 45 46 оС до развития тонико-клонических судорог. Животных, у которых тони- ко-клонические судороги не наблюдались, из эксперимента исключали. В контрольные группы включали крысят из тех же пометов, которые на аналогичное время были отлучены от матери (но не нагревались) и интактных крысят. Исследование изменений экспрессии генов Gfap (маркер астроцитов), Aif1 (маркер микроглии), Nlrp3 (основной компонентинфламмасом),Il1bиIl1rn(про-ипротивовоспалительныйцитокины)выполненометодомОТ-ПЦРвре- альном времени на 14, 21 и 50 день жизни.

ФС не повлияли на продукцию мРНК глиальных белков, однако было обнаружено влияние фактора времени на экспрессию всех исследованных генов, кроме гена Il1b, в обеих областях гиппокампа и височной коре. В дорзальном гиппокампе выявлено увеличение экспрессии гена Gfap с 21 по 50 день жизни во всех экспериментальных группах, что соответствует нормальному развитию астроглии. Также в контрольной группе обнаружено снижение экспрессии гена Aif1 на 50 день в сравнении с его экспрессией на 14 день жизни крыс в дорзальном гиппокампе и снижение экспрессии гена Gfap с 21 по 50 день жизни в вентральном гиппокампе. Это может свидетельствовать о стрессовом воздействии, приведшем к нарушению развития микро- и астроглиальных клеток в соответствующих областях гиппокампа.

Таким образом, в работе показана нормальная возрастная динамика экспрессии исследованных генов, на которую не повлияли фебрильные судороги, но оказал воздействие стресс отлучения от матери.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 25 00242.

ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ФЕНОТИП ПЕРВИЧНОЙ СМЕШАННОЙ КУЛЬТУРЫ НЕЙРОНОВ ГИППОКАМПА В УСЛОВИЯХ АКТИВАЦИИ ПУРИНЕРГИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ

Зеленцова А. С.*, Кузубова Е. В., Борисова А. Ю., Шмигерова В. С., Скоркина М. Ю.

Белгородский государственный национальный исследовательский университет, г. Белгород

*e-mail: zelentsova@bsu.edu.ru

Пуринергическая сигнальная система выступает центральным пусковым звеном в развитии митохондриальной дисфункции, сопровождающей нейродегенеративные заболевания. Внеклеточный АТФ играет очень сложную роль не только в репарации, ремоделировании и выживании нейронов, но также и в их гибели. Цель работы – изучить​ энергетический фенотип первичной смешанной культуры нейронов гиппокампа в условиях активации пуринергических рецепторов экзогенной молекулой АТФ.

ДляприготовленияпервичнойсмешаннойкультурынейроновиспользовалигиппокампмышейлинииF1(СВА/ lac*C57BL/6)на18 йденьгестации.Первичнуюсмешаннуюкультурунейроновгиппокампакультивировалив8-ми луночных планшетах (Agilent, USA) в течение 14 дней. Энергетический фенотип анализировали, используя набор Cell Energy Phenotype (Kit 103325 100,Adgilent. USA). С целью активации пуринергических сигнальных путей

вэксперименте моделировали экзогенную нагрузку с АТФ in vitro, добавляя 10,0 μМ аденозин 5-трифосфат динатриевая соль тригидрат (АТФ-Na2x3H2O) (Sigma) в часть лунок за 24 ч до анализа (лунки D, E) и непосредственно

винъекционный порт картриджа (лунки B, C), лунки F, G – ​контрольные, без нагрузки. Концентрация стрессового раствора олигомицин/FCCP, которую вносили в порт картриджа, составила 2,0/1,0 μМ. Полученные экспериментальные данные обрабатывали, используя программуWave 2.6 (USA). Результаты экспериментальных данных обработаны с использованием программного продукта GraphPad Prism 8.

Вусловиях активации пуринергических рецепторов первичной смешанной культуры нейронов гиппокампа скорость закисления среды протонами увеличилась на 104 % (р˂0,05; при инъекции АТФ через порт) и на 82 % (р˂0,05; при введении АТФ в культуру на 24 ч) по сравнению с контролем. При введении в культуру нейронов стрессоров: олигомицина, блокирующего работу АТФ-синтазы и FCCP, выступающего разобщителем митохондриального дыхания, установлено увеличение скорости потребления кислорода на 21 % (р˂0,05; при инъекции АТФ

35

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

через порт) по сравнению с контролем. Метаболический потенциал нейронов при кратковременной стимуляции пуринергических рецепторов молекулой АТФ составил 121,7±5,2 %, в то время как при стимуляции в течение 24

ч – 102,2±3,1​ %, а в контроле – 101,6±2,8​ %.

Таким образом, кратковременная стимуляция пуринорецепторов экзогенной молекулой АТФ приводит к усилению митохондриального дыхания, скорости потребления кислорода и увеличению метаболического потенциала нейронов.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 24 00600.

НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО АЛЛОСТЕРИЧЕСКОГО МОДУЛЯТОРА TRPC6 КАНАЛА

Зернов Н. И.1,*, Веселовский A. В.2, Поройков В. В.2, Мелентьева Д. М.1, Попугаева Е. А.1

1Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, г. Санкт-Петербург 2Институт биомедицинской химии, г. Москва

*e-mail: quakenbush97@gmail.com

Болезнь Альцгеймера (БА) в настоящее время является неизлечимым хроническим нейродегенеративным заболеванием, поражающим мозг человека. Отличительной чертой БА является медленно прогрессирующая потеря памяти у пациентов. Предполагается, что физиологическая основа нарушения памяти при БА заключается в нарушениистабильнойсинаптическойпередачи,необходимойдляформированияустойчивогоконтактамеждуклетками головного мозга. Препараты, ограничивающие потерю синапсов, являются перспективными фармакологическими агентами.

Одной из привлекательных фармакологических мишеней является канал TRPC6 (Canonical transient receptor potential 6). Имеются генетические доказательства того, что TRPC6 участвует впатогенезе БА. Снижение экспрессии мРНК TRPC6 упациентов сБА наблюдалось вкрови, влейкоцитах, атакже виндуцированных плюрипотентных стволовых клетках, полученных от пациентов с БА. Мыши со сверхэкспрессией TRPC6 в мозге показывают улучшение когнитивной функции мозга иувеличение образования возбуждающих синапсов. Таким образом, положительное модулирование TRPC6 – потенциальное​ фармакологическое решение синаптической дисфункции, развивающейся при БА.

Ранее мы обнаружили, что различные активаторы TRPC6 канала вызывают положительный эффект на мышиных моделях БА (Zhang et al., 2016; Popugaeva et al., 2019). Однако большинство из них проявляют либо кросспецифичность, либо токсичность. Недавно был обнаружен новый положительный аллостерический модулятор TRPC6, 3-(3-,4-дигидро 6,7-диметокси 3,3-диметил 1-изохинолинил)-2H 1-бензопиран 2-он (TRPC6-PAM C20) (Hafner et al., 2019). Было показано in silico, что TRPC6-PAM C20 связывает TRPC6 в его внеклеточной части в сайте связывания агониста. C20 проявляет синаптопротекторные свойства in vitro. TRPC6-PAM C20 эффективно проникал через ГЭБ. Не вызывает острую и хроническую токсичность в диапазоне доз 10 100 мг/кг. Внутрибрюшинные инъекции 10 мг/кг TRPC6-PAM C20 в течение четырнадцати дней восстанавливают синаптическую пластичность в срезах мозга старых мышей 5xFAD и усиливают контекстную и условную виды памяти у мышей 5xFAD в тесте на услов- но-рефлекторное замирание (Zernov et al., 2022). Таким образом,TRPC6-PAM C20 может быть признан перспективным соединением, специфичным для TRPC6, которое может уменьшить снижение когнитивных функций.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 20 75 10026.

РЕЦЕПТОРЫ, АКТИВИРУЕМЫЕ ПЕРОКСИСОМНЫМИ ПРОЛИФЕРАТОРАМИ, КАК ПЕРСПЕКТИВНАЯ МИШЕНЬ В ЛЕЧЕНИИ ЭПИЛЕПСИИ

Зубарева О. Е.*

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: zubarevaoe@mail.ru

Эпилепсия – одно​ из наиболее тяжелых и трудно поддающихся лечению неврологических заболеваний. Несмотря на активно проводимые исследования, до 30 % больных эпилепсией оказываются нечувствительны к существующим методам лечения. Разработка новых методов терапии является актуальной проблемой. В настоящее время активно обсуждается терапевтический потенциал в лечении ряда нервно-психических заболеваний агонистов рецепторов, активируемых пролифераторами пероксисом (PPARs). PPARs (α, β/δ, γ) – это​ ядерные транскрипционные факторы, основной функцией которых является регуляция липидного и энергетического обменов. Агонисты PPARs обладают выраженными противовоспалительными и нейропротекторными свойствами, что позволяет рассматривать их как потенциальные терапевтические агенты для лечения эпилепсии, однако роль различных типов PPARs при эпилептогенезе остается малоизученной.

Нами проведен ряд исследований для выявления особенности экспрессии генов различных типов PPARs в мозге в процессе эпилептогенеза, возможности ее фармакологической регуляции, а также исследованию защитных эффектов агонистов различных типов PPARs в литий-пилокарпиновой (Li-Pilo) модели височной эпилепсии у крыс самцов Вистар.

36

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Показано, что экспрессия генов PPARs в структурах мозга снижается в процессе эпилептогенеза. Введение экспериментальным животным пробиотика Bifidobacterium longum (BL) усиливает экспрессию гена Pparg и противовспалительного цитокина Il1rn в мозге Li-Pilo крыс. Кроме того, BL положительно влияет на динамику веса экспериментальных животных, и частично корректирует пилокарпин-индуцированные изменения их уровня тревожности.

Также в Li-Pilo модели исследованы нейропротекторные свойства агонистов рецепторов PРARα фенофибрата, PРARγ пиоглитазона и PРAR β/δ GW 501516. Все препараты частично нивелируют характерные для Li-Pilo модели нарушения поведения, наибольшую эффективность показывает пиоглитазон, он не только блокирует поведенческие нарушения, но и ограничивает развитие характерных для эпилепсии нейровоспалительных процессов в гиппокампе. Полученные данные могут быть использованы при разработке новых методов терапии эпилепсии.

Поддержано грантом Российского научного фонда № 23 25 00480.

ПРИМЕНЕНИЕ НОВЫХ ТРИАЗОЛ-ГИДРОКСАМОВЫХ КИСЛОТ ДЛЯ ТЕРАПИИ ОТСРОЧЕННЫХ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ КРЫС, ВЫЗВАННЫХ ПАРАОКСОНОМ

Зуева И. В.*, Семенов В. Э., Петров К. А.

Институт органической и физической химии им. А. Е. Арбузова ФИЦ Казанский научный центр РАН, г. Казань

*e-mail: zueva.irina.vladimirovna@gmail.com

Введение.Отравлениефосфорорганическимисоединениями(ФОС)приводиткингибированиюацетилхолинэстеразы(АХЭ)центральнойипериферическойнервнойсистемы,приводяккомплексупоследствий,включаяотсроченные нейродегенеративные изменения. Нами исследовались способность новых синтезированных в ИОФХ им. А. Е. Арбузова ФИЦ КазНЦ РАН производных триазол-гидроксамовых кислот выступать в качестве реактиваторов ингибированной ФОС АХЭ in vitro, а соединение-лидер было испытано на модели вызванной ФОС нейродегенера-

ции in vivo.

Методы. В работе использовались модельное ФОС параоксон, в качестве стандартного реактиватора использовался пралидоксим (2-ПАМ). Реактивации ингибированной параоксоном АХЭ оценивалась по методу Элмана (Ellman et al., 1961). Динамика гибели клеток головного мозга крыс после отравления параоксоном оценивалась по- средствомокрашиванияFluoro-Jade B (FJB). Для оценки пространственной памяти крысприменялось тестирование в водном лабиринте Морриса.

Результаты. После введения параоксона (1 мг/кг; в/б) гибель нейронов головного мозга носила отсроченный характер, постепенно развиваясь в течение трех дней. В экспериментах in vitro триазол-гидроксамовые кислоты реактивировалидо100 %АХЭ,обладаяприэтомконстантамиреактивации,сравнимымис2-ПАМ.Приэтомвотли- чиеот2-ПАМ,траизол-гидроксамовыекислотыпоказалиспособностьреактивироватьАХЭголовногомозгакрысin vivo. Так, триазол-гидроксамовая кислота с лабораторным шифром 935 в дозе 200 мг/кг реактивировала 36,6±12,9 % (р=0,037) при двукратной схеме введения через 1 и 3 часа после отравления параоксоном. На животной модели отсроченной нейротоксичности триазол-гидроксамовая кислота 935 показала выраженный нейропротекторый эффект при двойном отсроченном введении через 1 и 3 часа после отравления, снижая количество меченных FJB нейронов в головном мозге и предотвращая нарушение памяти крыс в водном лабиринте Морриса.

Заключение. Двукратное введение триазол-гидроксамовой кислоты 935 способно значимо снизить последствия отсроченной нейротоксичности, вызванной параоксоном.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 19 15 00344-П.

АКТИВНОСТЬ НЕЙРОНОВ ПОЛЯ CA1 ГИППОКАМПА ВО ВРЕМЯ ФОРМИРОВАНИЯ

И РЕАКТИВАЦИИ АВЕРСИВНОЙ ПАМЯТИ У МЫШЕЙ IN VIVO

Зюзина А. Б.*, Рощина М. А., Рощин М. В., Бородинова А. А., Асеев Н. А., Балабан П. М.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, г. Москва

*e-mail: lucky-a89@mail.ru

На сегодняшний день существует большое количество работ, доказывающих, что дорсальный гиппокамп в целом и поле CA1 в частности, играют критическую роль в формировании и реактивации памяти об опасной обстановке в задаче условно-рефлекторного замирания. При этом вопрос о том, каким образом нейроны дорсального гиппокампа вовлекаются в процедуры обучения или реактивации памяти об опасном контексте в задаче услов- но-рефлекторного замирания в настоящее время остается очень малоизученным. Поэтому целью данной работы было исследовать in vivo активность нейронов поля CA1 гиппокампа у мышей во время обучения и тестирования памяти в задаче условно-рефлекторного замирания на обстановку. Эксперимент проводили на самцах мышей линии C57Bl/6 (N=4). Для регистрации активности нейронов поля CA1 мы использовали миниатюрные флуоресцентные микроскопы – ​минископы. Мы вводили вирусный вектор, несущий кальциевый сенсор GCaMP6s в поле CA1 гип-

37

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

покампа, затем в ту же область имплантировали GRIN-линзу, как объектив для минископа. Мышей обучали задаче условно-рефлекторного замирания на обстановку и рассчитывали длительность замирания. После обучения мыши демонстрировали достоверно большую длительность замирания, что свидетельствовало о сформировавшейся аверсивной памяти об обстановке. При обучении суммарно был зарегистрирован 591 активный нейрон (147,8±74,9 ней- роновнамышь).Притестированиимызарегистрировалинесколькоменьшенейронов – 512​(128,0±40,6нейроновна мышь).Средняячастотакальциевыхсобытийзавсевремясессииобучениясоставила0,037±0,003событий/секунду, вовремятестирования0,042±0,015событий/секунду.Около46 %отвсехзарегистрированныхнейроновбылаактивна на протяжении всей процедуры обучения. Интересно, что средняя частота кальциевых событий таких нейронов достоверно увеличивалась после нанесения мыши электро-кожного раздражения, с 0,035±0,007 событий/секунду до 0,086±0,013 событий/секунду. При извлечении памяти при тестировании мы наблюдали реактивацию в среднем 30 40 % нейронов: при этом во время эпизодов замирания число активных нейронов заметно снижалось, а во время эпизодов движения активировались почти все зарегистрированные нейроны. Кроме того, средняя частота кальциевых событий реактивирующихся нейронов не менялась от обучения к тестированию. Таким образом, мы получили новые данныеотом, какнейроны поля СА1 гиппокампаактивируются вовремя формированияи извлечения памяти при обучении в задаче условно-рефлекторного замирания на обстановку.

АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ ГАМК-ЕРГИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ В ГИППОКАМПЕ КРЫС ЛИНИИ КРУШИНСКОГО-МОЛОДКИНОЙ ПРИ СТАРЕНИИ

Ивлев А. П.*, Черниговская Е. В., Наумова А. А.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: andrewivlev1410@gmail.com

Аудиогенная рефлекторная эпилепсия – ​это тяжелое неврологическое и системное заболевание, характеризующееся повторяющимися судорожными припадками, вызываемыми звуковыми сигналами. В предыдущем исследовании мы проанализировали состояние ГАМК-ергической нейротрансмиссии в гиппокампе крыс линии Крушин- ского-Молодкиной (КМ) на ранних этапах постнатального развития. Целью данной работы была оценка анализа состояния ГАМК-ергической системы в гиппокампе крыс линии КМ на поздних этапах постнатального онтогенеза.

В данной работе, используя методы ИГХ, ВБ и ПЦР, проводился анализ функциональных и структурных изменений в гиппокампе крыс линии КМ в возрасте 18 месяцев по сравнению с крысами родительской линии Вистар того же возраста, а также по сравнению с молодыми крысами линии КМ.

Было выявлено, что у старых крыс линии КМ повышается как уровень экспрессии мРНК, так и уровень белка GAD67 в пирамидных клетках полей CA3 и СА4, stratum lucidum поля СА3, в хилусе и гранулярном слое гиппокампа по сравнению скрысами Вистар. ТакжепосравнениюсконтролемвпирамидныхнейронахполяCA4игранулярном слое показано увеличение количества клеток, содержащих как Fra1, так иGAD67, что свидетельствует об активации ГАМК-ергических нейронов. Другим маркером увеличения активности ГАМК-ергической системы является обнаруженное нами снижение уровней α и β-субъединиц ГАМКА рецептора по сравнению с крысами линии Вистар при нормальном уровне экспрессии мРНК, что свидетельствует об увеличении связывания ГАМК рецепторами. Напротив, наблюдается снижение уровня белка GAD67 вхилусе и stratum lucidum поля CA3 гиппокампа старых крыс линии КМ по сравнению смолодыми крысами линии КМ. При этом как вхилусе, так и в CA3 поле гиппокампа старых крыс линии КМ обнаружено снижение количества клеток, содержащих GAD67 иCREB, что свидетельствует оснижении активности ГАМК-ергической системы вгиппокампе старых крыс линии КМ по сравнению смолодыми крысами этой же линии.Помимоэтого,мы не обнаружили отличий в экспрессии и уровне белков транспортерахлора KCC2 иNKCC1, что свидетельствует о сохранении низкого уровня внутриклеточного хлора, и, как следствие, об ингибирующей активности ГАМК.

Таким образом, можно предположить, что у старых крыс линии КМ, не смотря на повышенную активность ГАМК-ергической системы в гиппокампе по сравнению с крысами Вистар, происходит снижение тормозной функции ГАМК по сравнению с молодыми крысами КМ вследствие возрастных изменений.

Работа поддержана грантом Российского научного фонда № 22 75 00060.

ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КРЫС ЛИНИИ WAG/RIJ С АБСАНСНОЙ И АУДИОГЕННОЙ ЭПИЛЕПСИЕЙ

Кужугет С. М.*, Аббасова К. Р.

Московский Государственный Университет имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: ksyldys@yandex.ru

Абсансная эпилепсия – ​генерализованная неконвульсивная форма эпилепсии, характеризующаяся билате- рально-симметричными пик-волновыми разрядами (ПВР) на ЭЭГ. Крысы линии WAG/Rij являются генетической моделью абсансной эпилепсии. Около 30 50 % крыс WAG/Rij помимо абсансной активности имеют предрасположенность к аудиогенной эпилепсии. Аудиогенная эпилепсия – ​генерализованная конвульсивная форма эпилепсии,

38

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

развивающаяся в ответ на звуковую стимуляцию. За годы исследований аудиогенной эпилепсии были описаны различные поведенческие отклонения, регистрируемые у предрасположенных к аудиогенности крыс после аудиогенного киндлинга. В условиях латентной эпилепсии, т. е. до проведения аудиогенного киндлинга, поведенческие особенности коморбидные эпилепсии, такие как тревожность и депрессия, ранее не изучались. Также не изучено социальное поведение у крыс линии WAG/Rij с аудиогенной эпилепсией.

Цель – исследовать​ поведение интактных аудиогенных крыс линии WAG/Rij. Исследование проводили на самцах крыс линии WAG/Rij (n=23, возраст 6 7 месяцев). Был проведен ряд поведенческих тестов («Приподнятый крестообразный лабиринт», «Социальное поведение», «Вынужденное плавание»). Чтобы исключить влияние аудиогенного киндлинга на результаты ипроанализировать только вклад генетического фактора предрасположенности каудигенности, тестирование на аудигенность было проведено только после окончания проведения всех поведенческих тестов. Для анализа абсансной активности проводили вживление электродов в кору больших полушарий и запись ЭЭГ.

Нами было показано, что уровень тревожности значимо выше у аудиогенных крыс линии WAG/Rij по сравнению с неаудиогенными крысами линии WAG/Rij. Анализ признака «депрессивность» в тесте «Вынужденное плавание» показал, что у всех крыс WAG/Rij наблюдается депрессивноподобное поведение, но оно не связано с предрасположенностью к аудиогенной эпилепсии. Показана отрицательная корреляция между индексом пик-волновых разрядов (ПВР) – т​. е. процентом времени, занятым разрядами, и временем клайминга, что предполагает связь между абсансной активностью и выраженностью депрессивно-подобного поведения.

Таким образом, результаты нашего исследования показывают, что у аудиогенных крыс линии WAG/Rij, т. е. укрыссосмешаннойэпилепсией,вусловияхлатентнойэпилепсииестьповеденческиеотклонения,такиекакповышенная тревожность и социальные нарушения, и они имеют генетические основы.

ВЛИЯНИЕ КОРТЕКСИНА НА ТРЕВОЖНОСТЬ У КРЫС ПОСЛЕ МОДЕЛИРОВАНИЯ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА МЕТОДОМ ФОТОХИМИЧЕСКОГО ТРОМБИРОВАНИЯ

Логинова Н. А.*, Панов Н. В.

ФГБУН Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, г. Москва

*e-mail: nadinvnd@yandex.ru

Кортексин – нейропептидный​ препарат, полученный из мозга крупного рогатого скота и проникающий через гемато-энцефалический барьер – уже​ используется в клинической практике для лечения постинсультных состояний. Его максимальный эффект проявляется в острый период.

В данной работе исследовали влияние трехкратной внутрибрюшинной инъекции раствора кортексина на поведение крыс в тестах открытое поле (ОП) и приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ) через 3 и 5 дней после моделирования ИИ методом фотохимического тромбирования.

Работу проводили на крысах самцах линии Вистар (n=25, m=250 г.), которые были поделены на 3 группы: 1) контроль (n=8) – у​ крыс моделировали ИИ, а через 30 мин, на 1-е и 2-е сутки после эксперимента им внутрибрюшинно вводили физиологический раствор; 2) «АК» (активный кортексин, n=8) – крысам​ по той же схеме внутрибрюшинно вводили раствор кортексина в дозе 1 мг/кг; 3) «ДК» (денатурированный кортексин, n=9) – крысам​ по той же схеме вводили раствор денатурированного кортексина в дозе 1 мг/кг.

Ишемию моделировали методом фотохимического тромбирования. Тесты ОП и ПКЛ проводили до ишемии, а также на 3-и и 5-е сутки после ишемии. Анализировали двигательную, исследовательскую активность, груминг, замирание (в ОП и ПКЛ), посещение открытого и закрытого рукавов, свешивание из открытого рукава (ПКЛ). Анализ межгрупповых отличий проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим сравнением по критерию Манна-Уитни, а зависимых переменных – ​с помощью непараметрического анализа по критерию Вилкоксона с использованием программы STATISTICA. На 3-и сутки после ИИ в группе «АК» увеличивался латентныйпериодстойкиигрумингапосравнениюсгруппамиконтроляи«ДК»(p<0,05).ВтестеПКЛна5-есутки после ИИ увеличивалось число стоек в группе «АК» по сравнению с контролем и группой «ДК» (p < 0,05). Анализ по Вилкоксону показал, что в группе «АК» в тесте ПКЛ изменилось незначительное число показателей (число стоек, посещение проксимальной части рукава) по сравнению с тестом до ИИ. В группах контроля и «ДК» изменения затрагивали большее число параметров.

Таким образом, кортексин внезначительной степени изменял показатели тревожности после моделирования ИИ.

ИЗМЕНЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ DNMT1 У ПАЦИЕНТОВ С РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ КАК МАРКЕР НАРУШЕНИЯ ЭПИГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ

Людыно В. И.1,*, Цымбалова Е. А.1, Чернявская Е. А.1, Рыжкова Д. Е.1, Бисага Г. Н.2, Абдурасулова И. Н.1

1ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», г. Санкт-Петербург 2ФГБУ «НМИЦ им. В. А. Алмазова», г. Санкт-Петербург

*e-mail: vlioudyno@mail.ru

Нарушение эпигенетической регуляции является важным звеном патогенеза мультифакториальных заболеваний, опосредуя взаимодействие факторов внешней среды и факторов генетической предрасположенности. Наиболее из-

39

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ученным среди эпигенетических процессов является метилирование ДНК, осуществляемое ферментами семейства ДНК-метилтрансфераз. Снижение активности DNMT1 может способствовать формированию аберрантных паттернов метилирования и дизрегуляции экспрессии генов. Известно, что регуляция процессов метилирования тесно связана сфункционированиемфолатногоциклаиактивностьюферментов,контролирующихобразованиеметильныхдоноров.

Задачей исследования была оценка уровня экспрессии мРНК DNMT1 ивыявление взаимосвязи между наличием полиморфизмов генов фолатного цикла и нарушениями метилирования у пациентов с рассеянным склерозом (РС). РС – прогрессирующее​ демиелинизирующее заболевание аутоиммунной природы, для которого характерно хроническое течение снарастанием неврологического дефицита. Согласно опубликованным данным, при РС обнаруживаются значительные изменения профилей метилирования ДНК, в том числе гипометилирование промоторов генов, связанных с контролем миелинизации, дифференцировки Т-лимфоцитов, воспалительных реакций (PAD2, FOXP3, IL 17A).

УровеньэкспрессиимРНКDNMT1определялиметодомобратнойтранскрипцииспоследующейполимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР). Геномную ДНК выделяли из периферических мононуклеарных клеток крови пациентов с РС с различной длительностью заболевания. Генотипы по полиморфизмам генов MTHFR, MTRR, MTRR определяли методом ПЦР с аллель-специфическими флуоресцентными зондами. Выявлено достоверное снижение экспрессии мРНК DNMT1 у пациентов по сравнению с группой контроля, причем изменения отмечались уже в стадии дебюта РС. Анализ распределения генотипов показал, что у пациентов с РС достоверно выше доля сочетаний полиморфных вариантов, способствующих гипометилированию (комбинации генотипов MTR AAA2756G /MTHFR

CTC677T и MTRAAA2756G /MTHFR TTC677T). Наличие сочетанного влияния генотипов по полиморфизмамA2756G гена MTR и C677T гена MTHFR на уровень экспрессии DNMT1 подтверждается данными регрессионного анализа.

Выявленные закономерности согласуются с гипотезой о том, что изменения метаболизма одноуглеродных фрагментов, обусловленные наличием полиморфных вариантов генов фолатного цикла, вовлечены в патогенез РС и могут способствовать нарушению эпигенетической регуляции.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 25 00312.

НЕЙРОНЫ ПОЛЯ CA1 ГИППОКАМПА ДЕМОНСТРИРУЮТ ПОВЫШЕННУЮ ВОЗБУДИМОСТЬ В ПЕРИОД ЭПИЛЕПТОГЕНЕЗА В ЛИТИЙ-ПИЛОКАРПИНОВОЙ МОДЕЛИ ЭПИЛЕПСИИ НА КРЫСАХ

Малкин С. Л.*, Зайцев А. В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова Российской академии наук,

г. Санкт-Петербург

*e-mail: adresatt@gmail.com

В основе височной эпилепсии лежит дисбаланс возбуждения и торможения в нейрональных сетях мозга. Одним из возможных клеточных механизмов, которые могут вносить вклад в этот дисбаланс, является повышенная возбудимость нейронов. Однако, возможные изменения в собственной возбудимости нейронов в эпилептическом мозге до сих пор исследованы недостаточно. В данной работе мы изучали мембранные свойства нейронов поля CA1 гиппокампа в переживающих срезах, изготовленных из мозга крыс в литий-пилокарпиновой модели височной эпилепсии. Данная модель характеризуется первоначальным эпилептическим статусом (ЭС), который запускает начало латентной фазы модели, в течение которой в мозге протекает эпилептогенез, и которая завершается развитием спонтанных повторяющихся судорог. Мы обнаружили, что максимальная частота генерации потенциалов действия (ПД) исследованных нейронов была увеличена во всех группах крыс, перенёсших эпилептический статус, как в латентную, так и в хроническую фазу литий-пилокарпиновой модели. Среди изменений, которые наблюдались только в латентную фазу, было повышение минимального тока, вызывающего максимальную частоту генерации ПД, положительный сдвиг потенциала покоя мембраны, и ускоренная кинетика средней следовой гиперполяризации. Такие изменения указывают на повышение возбудимости нейронов поля CA1 гиппокампа в течение эпилептогенеза, что может вносить вклад в патологический процесс в литий-пилокарпиновой модели височной эпилепсии.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 20 75 00131.

СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНОГО ПИПЕРАЗИНОВ, ПЕРСПЕКТИВНЫЕ В НЕЙРОПРОТЕКЦИИ

Мелентьева Д. М.1,*, Зернов Н. И.1, Камарян В. С.2, Макичян А. Т.2, Унанян Л. С.1,2, Попугаева Е. А.1

1Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, г. Санкт-Петербург

2Российско-Армянский университет, г. Ереван, Армения

*e-mail: melenteva.dm.m@gmail.com

Болезнь Альцгеймера – ​это заболевание, характеризующееся сбоем в кальциевом сигналинге, что приводит к деструкции актинового цитоскелета дендритов нейронов и структурной деформации грибовидных шипиков. Ра-

40

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/