2 курс / Нормальная физиология / XXIV_съезд_физиологического_общества_им_И_П_Павлова

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

верность различий между группами определялась с использованием критерия Манна-Уитни при p<0,05. Результаты. Применение пробиотика на фоне хронического дисбактериоза в течение 4 недель восстанавли-

вало нарушенную ассоциативную память, положительно влияло на пространственную память, процессы угасания рефлекса страха и не оказывало влияния на формирование условного рефлекса пассивного избегания, приводило к снижению воспалительных процессов, что отражалось в снижении уровня провоспалительных цитокинов ихемокинов(TNFa,IL 6,MIP1a).Такжеснижаласьконцентрацииответственногозадифференцировкуисозревание макрофагов GM CSF в сыворотке крови.

Заключение. Хронический дисбиоз вызывает нарушение когнитивных процессов, а применение пробиотика нивелируетотрицательноедействиедисбиозанаповедение.Однимизмеханизмовнейротропногодействияпробиотика может быть его положительное действие на иммунный статус.

Финансовая поддержка: государственное задание Министерства здравоохранения Российской федерации № АААА-А20 120022590145 1.

НАРУШЕНИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ И ЭКСПРЕССИИ НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ В СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ КРОВЕТВОРНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ БОЛЬНЫХ

АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ

Шипунова И. Н., Дорофеева А. И.*, Лучкин А. В., Фидарова З. Т., Михайлова Е. А. ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, г. Москва

*e-mail: dorofeyeva.alyona@gmail.com

Апластическая анемия (АА) характеризуется панцитопенией и аплазией костного мозга (КМ). По степени выраженности цитопении выделяют три формы АА: нетяжелая АА (НАА), тяжелая АА (ТАА) и сверхтяжелая АА. Аплазия КМ при АА имеет аутоиммунную природу. Но патогенез АА может включать нарушение функций кроветворного микроокружения. В присутствии сыворотки больных АА стромальные предшественники – мультипотент​ - ные мезенхимные клетки (ММСК) здоровых доноров – пролиферируют​ достоверно хуже, чем в среде с сывороткой доноров. Возможно, присутствие ингибиторов или нехватка ростовых факторов в сыворотке крови больных АА влияет на физиологию ММСК.

Целью данной работы был функциональный анализ ММСК больных АА. Изучали время удвоения популяции (ВУП), суммарную клеточную продукцию (СКП) иуровень экспрессии некоторых генов вММСК больных НАА иТАА.

Исследование включало 22 больных НАА, 16 больных ТАА в дебюте заболевания и 19 здоровых доноров. После подписания информированного согласия из образцов КМ больных и доноров выделяли ММСК и культивировали по стандартной методике. Определяли ВУП, СКП за 3 пассажа и относительный уровень экспрессии генов (ОУЭ) методом ОТ-ПЦР в реальном времени. Значимость различий определяли с помощью t-критерия Стьюдента или критерия Манна-Уитни. Достоверными считали различия при p <0,05.

СКП ММСК больных НАА и ТАА не отличается от донорской, значит, пролиферативный потенциал стромальных предшественников при АА сохранен. Но ВУП ММСК из КМ больных НАА выше, чем у доноров (5,9±0,8

и3,8±0,5, соответственно), что отражает нарушение пролиферации ММСК у больных НАА. Хотя различий в ОУЭ генов ростовых факторов (FGF2, TGFB1, TGFB2, VEGFA) в ММСК больных не обнаружено, выявлено повышение экспрессии генов рецепторов к ростовым факторам в ММСК больных НАА (FGFR1, FGFR2, PDGFRA, PDGRFB)

иТАА (FGFR1, PDGRFB) по сравнению с ММСК доноров.

Активация экспрессии генов рецепторов к ростовым факторам в ММСК больных НАА и ТАА может быть связана с нехваткой ростовых факторов в сыворотке больных. Ростовые факторы выделяются кроветворными клетками, количество которых у больных АА резко снижено. Угнетение пролиферации ММСК больных указывает на физиологические нарушения в стромальном микроокружении при АА.

Изменения ММСК больных НАА более выражены в сравнении с клетками больных ТАА, что указывает на различия в патогенезе этих форм.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22 15 00018.

ЭКСПРЕССИЯ НЕЙРОСПЕЦИФИЧЕСКИХ БЕЛКОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ У МЫШЕЙ

Щелчкова Н. А.1,2*, Кузьмина Д. М.1,2, Архипова Е. В.1, Мухина И. В.1,2

1Приволжский исследовательский медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Нижний Новгород

2Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

*e-mail: shchelchkova@mail.ru

Микробиом толстого кишечника, как продуцент малых активных молекул, играет большую роль в патогенезе различных заболеваний, в том числе и ЦНС. Особый интерес направлен на изучение модуляции сигнальных путей

121

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

оси микробиота-кишечник-мозг в норме и при нарушении функционального состояния микробиома.

Цель исследования: изучить экспрессию нейроспецифических белков в ткани головного мозга у мышей с экспериментальным дисбактериозом.

Материалы и методы. Самцы половозрелых мышей линии С57Bl/6, n=20 были разделены на интактную группу (n=10) и группу животных с дисбактериозом, индуцированным приемом антибиотиков (n=10). Моделирование кишечного дисбактериоза осуществлялось заменой питьевой воды на водный коктейль антибиотиков (Chu и др., 2019) в течение 2 недель. Эвтаназия проводилась методом декапитации. В исследовании использовали левое полушарие головного мозга мыши. Ткань гомогенизировали в PBS при 4 в соотношении 1:1 и центрифугировали. Cодержания нейроcпецифических белков в супернатантах проводили методом иммуноферментного анализа наборами Cloud-Clone, Китай. Определяли BDNF, NSE, GDNF, S100. Нормирование результатов проводили по содержанию белка в супернатантах. Достоверность различий между группами определялась с использованием критерия Ман- на-Уитни при p<0,05.

Результаты. Показано, что хронический дисбактериоз в толстом кишечнике не влияет на содержание нейротрофического фактора BDNF в ткани головного мозга. Аналогичная динамика обнаружена и для фермента нейронспецифической энолазы (NSE). У интактных животных его концентрация составила 1551,62±77,21 pg/ml, а при дисбактериозе – 1601,17±98,27​ pg/ml. Однако стойкий дисбактериоз приводил к статистически значимому уменьшению количества глиального нейротрофического фактора (GDNF), отвечающего за жизнеспособность нейронов (203,26±12,35 pg/ml относительно его концентрации в интактной группе 303,73±24,93 pg/ml). Анализ содержания белка S100 также выявил достоверно низкие значения в гомогенате мозга мышей с экспериментальным дисбактериозом по сравнению с группой интактных мышей (468,73±9,09 pg/ml и 417,88±4,99 pg/ml, соответственно).

Заключение. Хроническое нарушение нормальной микрофлоры толстого кишечника не влияло на экспрессию BDNFиNSE,новызывалодостоверноеснижениеконцентрацииGDNFиS100,чтосвидетельствовалооподавлении функциональной активности глиоцитов головного мозга у мышей на фоне стойкого кишечного дисбактериоза.

Финансовая поддержка: государственное задание № АААА-А20 120022590145 1.

МЕТОД МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ДЛЯ ИЗМЕРЕНИЯ УРОВНЕЙ НЕЙРОМЕДИАТОРОВ В ОТВЕТ НА КОРОТКИЙ ЗРИТЕЛЬНЫЙ СТИМУЛ

Яковлев А. Н. 1,2,3*, Грицкова А. В.4, Ублинский М. В.1,2, Манжурцев А. В.1,2,4, Меньщиков П. Е.3, Ахадов Т. А. 1,4

1Научно-исследовательский институт неотложной детской хирургии и травматологии, г. Москва 2Федеральный исследовательский центр химической физики им. Н. Н. Семенова РАН, г. Москва 3Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, г. Москва

4Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: yakovlevalekcej@bk.ru

Настоящая работа посвящена поиску быстрых изменений уровня основных нейромедиаторов головного моз- га – γ​-аминомасляная кислота (ГАМК) и глутамат (Glu), в ответ на зрительную стимуляцию. Для этого использовали методы магнитно-резонансной спектроскопии и томографии на 3 T МР сканнере Philips Achieva dStream (НДХиТ, г. Москва). Мы получили фМРТ данные и МР спектры в активированной области зрительной коры у 61 испытуемых. Стимуляция производилась путем трехсекундного предъявления изображения мерцающей (с частотой 8 Гц) шахматной доски, повторяющегося с периодом 13.5/21 с (для ГАМК и глутамата, соответственно). По данным МРС была получена динамика концентраций метаболитов, ширина и высота резонансных линий с временным разрешением до 2 с. По изменениям ширины линии и высоты сигналов NAA и Cr определяли BOLD-эффект, и в рамках одного измерения исследовали соответствие с динамикой ГАМК и глутамата. В ответ на стимуляцию обнаружили статистически значимое увеличение глутамата на 1с (+12 %) и ГАМК на 3.1 4.6с (+4 5 %) после начала предъявления стимула. Динамики ширины и высот резонансных линий Cr и NAAкоррелируют со стандартной гемодинамическойкривой.Максимальныеизмененияширинивысотрезонансныхлинийнаходитсявдиапазоне1.2 1.5 %(q<0.05) в абсолютном выражении и достигаются к 6 й секунде после предъявления стимула. Корреляции между уровнями ГАМК, глутамата и показателями BOLD-ответа (как по данным МРС, так и по фМРТ) не наблюдается. Изменение уровней нейромедиаторов под влиянием короткого стимула скорее всего обусловлено их выбросом из везикул, а последующее снижение к исходному уровню характеризуется обратной упаковкой в везикулы. Таким образом, в настоящей работе впервые оценены локальные уровни возбуждения и торможения в зрительной коре головного мозга пристимуляциимерцающейшахматнойдоскойпутемоценкинепосредственновыпущенногоизвезикулколичества нейромедиаторов.

122

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Симпозиум Физиология иммунной системы (памяти Р. Б. Цынкаловского. 100 лет со дня рождения)

МИКРОБИОМ ПОЛОСТИ РТА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРОДОНТА И ИХ СИСТЕМНЫХ ЭФФЕКТАХ

Балмасова И. П.*, Царев В. Н., Арутюнов С. Д.

Московский государственный медико-стоматологический университет им. А. И. Евдокимова, г. Москва

*e-mail: iri.balm@mail.ru

Введение. В настоящее время не вызывает сомнения факт взаимосвязи заболеваний пародонта с рядом заболеваний системного характера, в частности, с сахарным диабетом типа 2. Имеются также данные о том, что в основе взаимосвязи между этими заболеваниями лежат особенности микробиома полости рта, в частности наличие в его составе пародонтопатогенных бактерий. В связи с этим целью данного исследования служило определение представительства разных таксономических категорий пародонтопатогенных и комменсальных бактерий с выявлением метаболических и других особенностей микробиома зубодесневой борозды.

Методы исследования. Исследованию подвергался микробиом поддесневой зубодесневой бляшки 46 человек, среди которых было 15 пациентов с хроническим пародонтитом средней тяжести (группа ХП), 15 пациентов с ассоциацией хронического пародонтита средней тяжести и компенсированного сахарного диабета типа 2 (группа ХП+СД2), 16 клинически здоровых лиц (группа ЗЛ). Исследование проводилось методом секвенирования гена 16S рРНКисеквенированияметодомдробовикапулированныхобразцовизкаждойгруппыисследования.Соотношение мужчин и женщин в группах исследования не имело статистических различий; средний возраст испытуемых колебался от 53,9±7,3 лет до 54,3 ± 7,2 лет соответственно.

Результаты. Анализ метагеномных данных показал, что альфа-разнообразие микробиома в группе ХП+СД2 было увеличено по сравнению с таковым в других группах. Были установлены биомаркеры микробиомов в каждой группе. В обеих группах пациентов с хроническим пародонтитом было отмечено преобладание представителей семейства Porphyromonadaceae в отличие от группы ЗЛ, в то же время между группами ХП и ХП+СД2 отмечено различие по содержанию бактерий семейств Veillonellaceae (выше в группе ХП) и Neisseriaceae (ниже в группе ХП). Кроме того, особенность группы пациентов ХП+СД2 характеризовалась более низкой частотой регистрации бакте- рийсемействStreptococceae /Pasteurellaceaeиболеевысокой – семейства​ Leptotrichiaceae.Былиотмеченыдостоверные различия по родовому и видовому составу бактериального микробиома в группах исследования.

Заключение. Результаты показывали, что у пациентов с хроническим пародонтитом, ассоциированным с сахарным диабетом 2 типа, существуют специфические особенности поддесневого микробиома, которые могут в значительной степени влиять на способы его коррекции.

КЛАСТЕРИЗАЦИЯ КАК НЕОБХОДИМАЯ ЧАСТЬ АКТИВАЦИИ ТИРОЗИНКИНАЗНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

Болдова А. Е.1*, Хамитов Д. Р., Григорова И. Л.2, Нечипуренко Д. Ю.1,3, Свешникова А. Н.1,3

1ФГБУН Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, г. Москва 2Научно-исследовательский институт трансляционной медицины, г. Москва

3ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева, г. Москва

*e-mail: boldova.ae14@physics.msu.ru

Многие клетки иммунной системы, а также тромбоциты крови, переходят в активированное состояние при лигировании ассоциированых с тирозинкиназами рецепторов, для полноценной сигнализации от которых необходимо образование кластеров. Необходимая для кластеризации диффузия рецепторов зависит от многих параметров, таких как фосфолипидный состав мембраны, «заякоренных» мембранных белков, наличия актинового цитоскелета в примембранной области. Кластеризация может быть лиганд-индуцированной, что ярко выражено для адгезионных рецепторов, но также она может происходить в результате изменения локального окружения рецептора и облегчения его диффузии. Понимание механизмов начальных стадий активации позволит предсказывать и регулировать разнообразные клеточные процессы.

Целью настоящей работы является разработка достоверной компьютерной модели, предсказывающей движение и состояние отдельных рецепторов в процессе активации.

Была разработана стохастическая двумерная компьютерная модель, описывающая динамику диффузии, кластеризации и фосфорилирования рецепторов GPVI тромбоцитов на участке плазматической мембраны. Каждый рецептор моделировался как точечный объект, способный диффундировать в произвольном направлении в единицу времени.Расчётновогоположенияэлементовпроизводилсяитеративнонаоснованииданныхоихположениивпредыдущий момент времени. Параметры модели были подобраны на основе известных экспериментальных данных.

123

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

В основе модели лежит предположение, что каждый из рецепторов движется внутри отдельного липидного рафта и может находится активированном (фосфорилированном) и неактивированном (дефосфорилированном) состояниях. Фосфорилирование рецепторов происходит при их димеризации (в том числе за счет связывания с мультивалентным активатором). В рамках модели предполагается, что в стационарном состоянии диффузия рецепторов ограничена за счет прилежащего к мембране цитоскелета. При активации рецептора запускается каскад реакций, приводящий к локальной деполимеризации цитоскелета. В результате скорость диффузии рецепторов увеличивается, позволяя им чаще сталкиваться и активировать близлежащие рецепторы. Построенная модель согласуется сизвестнымиэкспериментальнымиданными,описывающимираспределениетромбоцитарныхрецептровGPVIпри активации коллагеном III типа.

Таким образом, впервые была построена стохастическая модель подобного типа, описывающая динамику отдельных рецепторов с учетом локальных изменений плотности прилежащего к мембране цитоскелета.

Финансовая поддержка: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23 44 00082.

НОВЫЕ МЕХАНИЗМЫ ХОЛИНЕРГИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ ТУЧНЫХ КЛЕТОК

Кутукова Н. А.*, Шамова О. В., Полевщиков А. В.

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», г. Санкт-Петербург

*e-mail: i_n_a_777@mail.ru

Тучные клетки (ТК) являются компонентом нейро-мастоцитарных единиц, участвующих как в нервной, так

игуморальной регуляции. Способность парасимпатической системы оказывать локальное действие на клетки иммунной системы, связываясь с α7-никотиновым рецептором ацетилхолина (нАХР), хорошо известна. Целью работы была оценка влияния ацетилхолина (АХ) и его аналогов на секреторную функцию ТК.

Источником ТК служили клетки перитонеального экссудата мышей (ПТК). Дегрануляцию ПТК индуцировали антителами против мышиного IgE (αIgE). Изучали реакции ПТК в ответ на действие АХ, ацетилтиохолина (АТХ)

икарбахола (КХ) через 2 30 мин после внесения холиномиметиков. Для ингибиции их связывания с нАХР использовали селективный блокатор α-бунгаротоксин. Воздействие холиномиметиков на уровень спонтанной и индуцированной αIgE дегрануляции оценивали по степени высвобождения гистамина (метод Шора) и β-гексозаминидазы (по расщеплению хромогенного субстрата).

АХ и КХ в диапазоне концентраций 105 1011М дозозависимо повышали выброс гистамина и β-гексозамини- дазы на 5 25 % (p<0,05). Эффект также зависел от времени экспозиции и был более выражен при коротких сроках. В случае индуцированной αIgE дегрануляции АХ, напротив, понижал секрецию на 20 30 % (p<0,05). Тормозящее влияние ослаблялось при снижении концентрации АХ и по мере продления инкубации. Максимальный ингибирующий эффект наблюдался спустя 5 мин инкубации при концентрации 104 М. Супрессивное действие аналогов АХ, устойчивых к эффектам АХ-эстеразы, было более длительным и отмечалось через 5 30 мин инкубации. АТХ и КХ также ингибировали индуцированную αIgE дегрануляцию ПТК, снижая выброс гистамина и β-гексозаминидазы на 20 35 %. При этом α-бунгаротоксин полностью отменял ингибирующий эффект холиномиметиков в случае индуцированной αIgE дегрануляции.

Полученные результаты указывают на двунаправленное действие АХ, который активируют нестимулированные ПТК, но тормозит вызванную αIgE дегрануляцию ПТК. Действие АХ и его миметиков реализуются через α7нАХР, на что указывает блокада их эффектов α-бунгаротоксином. Выраженные эффекты холиномиметиков при коротких сроках инкубации с ТК (2 5 мин) по сравнению с более длительными сроками (15 30мин) подтверждают, что эффекты в нейро-мастоцитарной единице уникальным образом объединяют краткосрочный характер нервной регуляции с длительным характером ответа клеток воспаления, что может иметь важное значение в ходе нервной регуляции острого и хронического воспаления и иммунного ответа.

РОЛЬ γδT ЛИМФОЦИТОВ В ОТВЕТЕ B 1 КЛЕТОК НА T-НЕЗАВИСИМЫЕ АНТИГЕНЫ

ВТОРОГО ТИПА

Свитич О. А.*, Снегирева Н. А., Дьяков И. Н.

ФГБНУ НИИВС им. И. И. Мечникова, г. Москва

*e-mail: svitichoa@yandex.ru

Введение.ИзучениеролиγδTклетоквпродукцииIgМиIgAВ 1лимфоцитамивслизистойоболочкекишечника является весьма актуальной задачей в области фундаментальной иммунологии. Известно, что B 1 и γδTлимфоциты являются клетками первой линии защиты. Имеется множество сведений об участии каждой из этих субпопуляций клеток в инфекционных и аутоиммунных воспалительных процессах, где они выступают и в качестве эффекторов (агонистов), и в качестве супрессоров/регуляторов. Но все же функциональная активность этих клеток во многом остается слабо изученной.

Целью настоящей работы является изучение экспрессии и продукции IgM и IgAB 1 клетками в ответ на ТН 2 антигены в присутствии γδТ-лимфоцитов.

124

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Методы исследования. Выделяли клетки из брюшной (перитонеальной) полости с помощью магнитных бус (Miltenyi, Германия). Для оценки экспрессии генов тяжелых цепей IgM и IgAв В 1 лимфоцитах, из клеток выделяли общую РНК, для получения кДНК исследуемых генов использовали «ОТ 1» (Синтол, Россия), далее метод ПЦР-РВ («Набор реактивов для проведения ПЦР-РВ в присутствии SYBR Green I»). Определяли уровень IL 10 в супернатантах из экспериментов по cовместному культивированию В 1 клеток брюшной полости с γδТ клетками в присутствии и в отсутствие Декстрана. Концентрацию цитокина определяли методом твердофазного ИФА с помощью диагностической тест-системы (BioSource, Бельгия).

Результаты. В результате было получено, что через 4 суток совместной инкубации γδТ лимфоциты угнетают способность B 1 клеток продуцировать образование IgM в ответ на ТН 2 антигены. Этот эффект исчезает на 7-е сутки. IgA-продуцирующие клетки не образуются при совместном культивировании γδТ лимфоцитов с B 1 клетками. Индукция мРНК тяжелой цепи IgM и IgAв В 1 лимфоцитах при ответе на ТН 2 антиген Декстран снижается в присутствии γδТ лимфоцитов. Совместное культивирование с γδТ клетками приводит к усилению выработки IL 10 В 1 клетками мыши, что может быть причиной угнетения иммунного ответа.

Заключение. Выявленная супрессорная активность γδТ лимфоцитов может быть обусловлена усилением под их действием продукции ИЛ 10 В 1 лимфоцитами. В связи с этим нельзя исключать, что результатом воздействия γδТ-лимфоцитов может быть дифференцировка B 1 лимфоцитов по пути образования B-регуляторных лимфоцитов, продуцентов ИЛ 10.

ГИСТАМИНЕРГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ЦИТОКИНОВ И ХЕМОКИНОВ МОНОНУКЛЕАРНЫМИ И ДЕНДРИТНЫМИ КЛЕТКАМИ: РОЛЬ РЕЦЕПТОРОВ ГИСТАМИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ H3/H4 ТИПА

Ханферьян Р. А.1*, Радыш И. В.1, Мильченко Н. О.2, Шадрина Ю. Е.1

1ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы», г. Москва 2ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет», г. Краснодар

*e-mail: khanfer1949@gmail.com

Введение. Гистамин-классический медиатор воспалительных процессов не только в периферических тканях, но и играет важную роль в качестве нейромедиатора, которому присущи многие физиологические функции. В течение последних трех десятилетий большое развитие получили исследования по гистаминергической регуляции иммунныхиметаболическихпроцессов,чтосталовозможнымвсвязисоткрытиемиидентификациейH3 иH4типов гистаминовыхрецепторов.Указанныетипырецепторовимеютзначительноесходство,иихгомологиясоставляетдо 58 %. Целью исследования было изучение роли H3 и H4 типов гистаминовых рецепторов в регуляции синтеза и секреции цитокинов и хемокинов мононуклерными и дендритными клетками здоровых лиц.

Методы исследования. Мононуклеары периферической крови (МПК) и дендритные клетки (ДК), индуцированные путем культивирования МПК 6 практически здоровых доноров, культивировали в присутствии гистамина и Ципроксифана (Ciproxifan) – ​специфический антагонист гистаминовых рецепторов H3/H4 в конечных концентрациях 105 108М. Концентрации цитокинов и хемокинов в супернатанте клеточных культур определяли с использованием мультиплексного анализа по технологии Luminex xMAP.

Результаты. Культивирование МПК с антагонистом H3/H4-рецепторов значительно повышало секрецию

IL 1, –4, –13, –18, –27, IL1а и IP 10 (р<0,05) и ингибировало секрецию многих хемо- и цитокинов, SCF, GM CSF, LIF, IL 2, –5, –6, –7, –9, –15, –31. В культуре ДК ципроксифан значительно повышал секрецию SCF, GM CSF, IL1-α и IL 5

иподавлял продукцию IL 2, –6, –15 и LIF (p<0,05). Исследованиями также установлено, что in vitro культивирование

МПК и ДК с антагонистом гистаминовых рецепторов H3/H4 типапо-разному влияет на синтез основных хемокинов

(Eotaxin, RANTES, MCP 1, MIP 1α, MIP 1β, GRO-α, IL 8). Так, в культуре ДК секреция RANTES, GRO-α снижалась на 20 и 40 % соответственно, в то время как секреция MIP 1β практически не изменялась, в то время как секреция MCP 1 в 4 раза увеличивалась. В культурах МПК же достоверно увеличился синтез и секреция Eotaxin, RANTES, MIP 1α, MIP 1β, GRO-α, IL 8 (p < 0,05).

Заключение.Гистамин – ​одинизиммунорегуляторныхфакторов,участвующихврегуляциисинтезацитокинов

ихемокинов, посредством влияния на гистаминовые рецепторы H3/H4 типа, которые играют важную роль в регуляции секреции иммунных медиаторов как МПК, так и ДК. Блокада H3/H4 рецепторов по-разному модулирует синтез цитокинов и хемокинов указанными иммунными клетками.

ТУЧНЫЕ КЛЕТКИ КАК КОМПОНЕНТ ИММУННОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ ДЛЯ РЕГУЛЯЦИИ СПЕРМАТОГЕНЕЗА

Храмцова Ю. С.*, Арташян О. С.

Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург

*e-mail: hramtsova15@mail.ru

В области изучения иммунологического контроля за функционированием мужской репродуктивной системы остаётся множество вопросов. Тучные клетки (ТК) участвуют в регуляции ее функций в норме, но могут быть

125

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

причиной различных отклонений, приводящих к развитию патологий. Неоднозначность роли ТК в процессах сперматогенеза обуславливает необходимость их более детального изучения в органах половой системы при разных состояниях.

В работе на крысах-самцах линии Вистар проведена оценка сперматогенеза и морфофункциональных параметровТК(количество,дегрануляционнаяисинтетическаяактивности,степеньзрелостигранул)вразныхорганахполовойсистемывнорме(наразныхэтапахпостнатальногоонтогенеза)ипридействииразличныхфакторов(высокая температура (ВТ) и острая травма семенника (ТТ)).

Показано, что ТК в норме присутствуют во всех органах половой системы (семенники, придатки, семенные пузырьки) на всех этапах постнатального онтогенеза. Состояние ТК изменяется сопряжённо с возрастными изменениями параметров самих органов, что позволяет сделать вывод об их регуляторной роли. В старческом возрасте созреваниеТКвсеменникахпрактическипрекращаетсячто,вероятно,обуславливаетуменьшениеихрегулирующего влияния на сперматогенез, который угнетается. При изучении действия ВТ показано, что температура приводит

кактивации ТК в половых органах, даже если воздействие является однократным, а хроническое воздействие ВТ вызывает и их миграцию сюда извне. Увеличение количества ТК и их усиленная дегрануляция являются важными факторами, которые приводят к изменениям параметров микроокружения сперматогенеза, что в итоге может вызвать термоиндуцированное мужское бесплодие. При травме семенника на ранних сроках в нем увеличивается количество ТК и их функциональная активность, что сопряжено с угнетением сперматогенеза. В свою очередь, снижение активности ТК во время повреждения препаратом кетотифен через стабилизацию мембран, способствует репаративной регенерации семенника, на что указывают рост числа нормальных сперматогоний, являющихся пролиферативным пулом для всех последующих стадий сперматогенеза, и значительное увеличение числа функционирующих канальцев.

Таким образом, ТК являются необходимым звеном в регуляции сперматогенеза на всех этапах онтогенеза, однако увеличение их влияния на функциональные клетки семенника при действии различных факторов приводит

кугнетению процессов сперматогенеза.

Финансовая поддержка: ГЗ ИИФ УрО РАН, проект № 122020900136 4.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ МИКРООКРУЖЕНИЯ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ

Юшков Б. Г.*

ФГБУН Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук, г. Екатеринбург

*e-mail: b.yushkov@iip.uran.ru

Считается, что активность стволовых клеток (СК) подлежит неклеточно-автономной регуляции из локального микроокруженияили“ниши”.Онаобеспечиваетстабильноеокружениестволовойклетки,контролируетвступление стволовой клетки в дифференцировку, поддерживает СК в состоянии покоя, т. е. в недифференцированном состоянии, контролирует самообновление СК, молекулы внеклеточного матрикса и адгезии защищают СК и др. Физиологически ниша, в которой находятся СК, состоит из различных тканевых компонентов, клеточных популяций и растворимых факторов, которые жестко регулируют поведение МСК. В ее формировании существенную роль играет иммунная система. Иммунные клетки, такие как макрофаги, эозинофилы, нейтрофилы и тучные клетки, играют важную роль в нормальной дифференцировке стволовых клеток в специфические клетки органа.

Макрофаги. Показано, что эти клетки важны для функции стволовых клеток молочной железы, поскольку мыши Csf 1op/op имеют сниженную частоту и активность стволовых клеток, что указывает на их способность поддерживать пролиферацию стволовых клеток молочной железы в период полового созревания. Они необходимы для нормального развития и функционирования островкового аппарата поджелудочной железы. Они определяют направление дифференцировки гемопоэтических стволовых клеток в эритроидном, гранулоцитарном или лимфоидном направлении.

Функциональные исследования тучных клеток молочной железы показывают, что они способствуют развитию молочной железы, высвобождая факторы роста, такие как VEGF и дипептидилпептидаза I, которая способствует дегрануляции тучных клеток. Мыши с дефицитом тучных клеток имеют дефектное ветвление молочной железы в период полового созревания. Состояние тучных клеток влияет на сперматогенез, на посттравматическую регенерацию тканей.

Исследования на мышах с нокаутом эозинофилов показали роль инфильтрирующих эозинофилов в движении протоков удлинение и ветвление при развитии молочной железы.

Реципиентные провоспалительные Т-клетки подавляют регенеративный потенциал трансплантируемых МСК за счет синергетического действия IFN-γ и TNF-α.

Приспосабливаясь к различным физиологическим условиям и постоянно меняющейся внешней среде, ниша стволовых клеток развивается с многофункциональностью, которая позволяет стволовым клеткам обнаруживать эти изменения и связываться с удаленными клетками/тканями, чтобы приспособить их активность к потребностям организма. Это дает основание выделить понятие “мигрирующая ниша.”

126

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Постерная секция Физиология иммунной системы

МЕТОДИКА НАБЛЮДЕНИЯ ДНК-ЛОВУШЕК НЕЙТРОФИЛОВ В ОБРАЗЦАХ КРОВИ ПЕДИАТРИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ

Адаманская Е. А.1,*, Юшкова Е. В.1,3, Федорова Д. В.1, Соколов А. В.4, Подоплелова Н. А.1,3, Свешникова А. Н.1,2,3

1Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева МЗ РФ, г. Москва

2Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова, г. Москва 3Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, г. Москва 4ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», г. Санкт-Петербург

*e-mail: ka.09@mail.ru

Одним из проявлений защитной функции нейтрофилов в организме человека является образование во внекле- точномпространствеДНК-ловушек,которыеванглоязычнойлитературеназываются«сети» – NETs​(англ.Neutrophil Extracellular Traps), и в русскоязычной литературе иногда носят название «нетоз». ДНК-ловушки состоят из расплетенных отрицательно заряженных нитей ДНК с ассоциированными с ними белками респираторного взрыва – ​миело- пероксидазой, нейтрофильной эластазой и другими. ДНК-ловушки способны захватывать и уничтожать бактерии, вирусы и другие патогены. Однако, клетки крови, в том числе тромбоциты и эритроциты, также взаимодействуют с ДНК-ловушками. Кроме того, было показано, что ДНК-ловушки вызывают патологическое тромбообразование и их количество ассоциируется с провоспалительным и протромботическим статусом крови. Для предупреждения возникновения осложнений у пациента можно использовать количество ДНК-ловушек или нейтрофилов, готовых

кнетозу, в образце крови.

Внастоящем исследовании нами был разработан протокол количественной оценки доли активированных или готовых к нетозу нейтрофилов методом флуоресцентной микроскопии мазков крови. Для детекции ДНК-ловушек использовались красители целистиновый синий B, а также антитела к миелопероксидазе и эластазе нейтрофилов. Для валидации методики проводилосьсравнениедолиактивированныхи ушедшихвнетознейтрофиловуздоровых доноров и пациентов с синдромом Шимке, проявляющимся аутовоспалительным фенотипом. Мы проанализировали базовый уровень нетоза, и уровень нетоза, стимулированного каноническими индукторами форбол 12-миристат 13-ацетат (PMA) или липополисахаридами из E. coli.

Базовый уровень нетоза у здоровых доноров определялся в интервале от 5 % до 15 %. У педиатрических пациентов с иммунокостной дисплазией Шимке количество нетозных нейтрофилов было повышено до 49 % в покое, однако в некоторых случаях был отмечен пониженный ответ на активацию. Доля активированных нейтрофилов у пациентов в среднем составила 55 %, в то время как у здоровых добровольцев – ​до 47 %. Доля нетоза, вызванного каноническими индукторами варьировалась в диапазоне от 80 до 90 % для двух анализируемых групп.

Таким образом, нами была разработана методика количественной оценки процентной доли нейтрофилов, образующих внеклеточные ДНК-ловушки, позволяющая определять провоспалительный статус крови пациентов.

Финансовая поддержка: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23 45 10039.

АБЗИМЫ, КАТАЛИЗИРУЮЩИЕ РАЗЛОЖЕНИЕ ГИДРОПЕРЕКИСИ У ЗДОРОВЫХ ЛИЦ

Кротенко Н. М.1,2*, Казанцева Д. В.1, Воронина В. С.2, Смирнова Л. П.1

1НИИ психического здоровья ТНИМЦ, г. Томск

2Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

*e-mail: krovlad@yandex.ru

Абзимами называются иммуноглобулины, обладающие способностью катализировать химические реакции. Абзимы обнаружены как у здоровых людей, так и при ряде аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Первым примером абзимов у здоровых лиц стали IgAмолока человека, катализирующие фосфорилирование белков. У этих же иммуноглобулинов были обнаружены липидкиназная и полисахаридкиназная активности. Также у здоровых лиц обнаружена способность IgG дисмутировать супероксид и разлагать гидропероксид водорода. Существует предположение, что абзимы с оксидоредуктазными активностями дополняют функции внутриклеточных антиоксидантных ферментов в сыворотке крови и играют важную роль в защите организма от окислительного стресса. Впервые пероксидазная активность IgG была выявлена И. И. Генераловым в 1998 году. Но с тех пор пероксидазная активность антител не изучалась. В представленной работе изучалась НАДФН-зависимая пероксидазная активность IgG здоровых лиц в сравнении с аналогичной каталазной активностью.

ВыделениеIgGизсывороткикровипроводилиспомощьюаффиннойхроматографиинаколонкахпротеин-G-се- фарозы. Гомогенность выделенных препаратов IgG показывали в SDS PAGE. НАДФН-зависимую пероксидазную и каталазную активность Ig G определяли спектрофотометрически. Ингибиторный анализ проводили с использова-

127

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

нием ингибиторов 3-амино 1,2,4-триазола, азида натрия (NaN3) и этилендиаминтетраацетата (ЭДТА). Статистическая обработка данных проводилась в программе Statistica 12.0.

В результате работы показано, что IgG G здоровых лиц способны катализировать каталазную и пероксидазную реакции, и что данная активность является собственным свойством изучаемых антител. Выявлено, что 3-ами- но 1,2,4-триазол является более эффективным ингибитором каталазной активности IgG (IC50: 16,06 мкМ против 140 мкМ для азида натрия), поскольку требует меньших концентраций для достижения максимального эффекта. Также азид натрия и ЭДТА ингибировали НАДФН-зависимую пероксидазную активность IgG, подтверждая металлозависимость данной активности у иммуноглобулинов, но оказывали эффект в более высоких, миллимолярных концентрациях. Кроме того, показана обратная корреляция между данными активностями, выявлена сильная отрицательная корреляционная связь (r = –0,85; р=0,001).

Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что наибольший вклад в утилизацию гидроперекисей вносят именно антитела с НАДФН-зависимой пероксидазной активностью, а не с каталазной.

ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЙ ЯНТАРНОЙ И СРЕДНЕЦЕПОЧЕЧНЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ НА ЭКСПРЕССИЮ МРНК ЦИТОКИНОВ В МОЗГЕ КРЫС В ФАЗУ ВЫЗДОРОВЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АЛЛЕРГИЧЕСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА (ЭАЭ)

Никитина В. А.1,*, Ким Е. А.1,3, Мацулевич А. В.1, Широков Е. А.1,2, Мацулевич Н. Н.1, Грефнер Н. М.1, Трофимов А. Н.1,3, Абдурасулова И. Н.1

1ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», г. Санкт-Петербург 2ФГАОУ ВО Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, г. Санкт-Петербург

3ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет, г. Санкт-Петербург

*e-mail: v. a.n1kitina@yandex.ru

Экспериментальныйаллергическийэнцефаломиелит(ЭАЭ)являетсялабораторноймодельюрассеянногосклероза (РС) – аутоиммунного​ заболевания, характеризующегося хроническим воспалением в центральной нервной системе, приводящим к демиелинизации и неврологическим нарушениям. Дисбиоз кишечной микробиоты является фактором риска РС. Введение жирных кислот с короткой и средней длиной цепи способно модулировать состав микробиоты, обладает противовоспалительным действием и рассматривается в качестве терапевтического подхода при РС.

Цель: изучение влияния введения янтарной (ЯК) или среднецепочечных жирных кислот (СЦЖК) на экспрессию мРНК цитокинов в мозге при ЭАЭ.

Методы. ЭАЭ у самок крыс Вистар индуцировали однократной подкожной инъекцией гомологичного гомогената спинного мозга (ГГСМ) в полном адъюванте Фрейнда. Янтарную кислоту (ЯК) или среднецепочечные жирные кислоты (СЦЖК) вводили орогастрально со 2-го по 15-й день после индукции ЭАЭ. Уровень мРНК про- и противовоспалительных цитокинов в медиальной префронтальной коре (мПФК), дорзальной и вентральной областях гиппокампа (ДГ, ВГ) определяли методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Стат. обработка: двухфакторный дисперсионный анализ и post hoc критерий Шидака, критерий Пирсона для оценки корреляции, p<0,05.

Результаты. Введение ГГСМ вызывало развитие ЭАЭ разной степени тяжести у 94 % крыс. Курсовое введение ЯКлибоСЦЖКнеуменьшалодолюзаболевшихживотныхитяжестьЭАЭ,носокращалодлительностьзаболевания на 25 %. При анализе уровня мРНК цитокинов отмечалось увеличение мРНК трансформирующего ростового фактора TGFβ в ДГ и ВГ при индукции ЭАЭ относительно контрольных животных, при этом введение ЯК и СЦЖК не оказываловлияниянаданныйпоказатель.ВмПФКневыявленостатистическизначимыхразличиймеждугруппами

вуровне экспрессии мРНК цитокинов интереса, отмечалась лишь тенденция к возрастанию уровня мРНК IL 1β,

вгруппе, получавшей СЦЖК. В вентральном гиппокампе наблюдалась положительная корреляция уровня мРНК TGFβ со средним клиническим индексом (КИ), а в дорзальном – ​с кумулятивным КИ. Уровень экспрессии TGFβ и фактора роста фибробластов FGF2 положительно коррелировал с кумулятивным КИ. Таким образом, повышение уровня белка TGFβ в крови и ликворе пациентов с РС, отмечаемое во множестве исследований, может носить мозговое происхождение и увеличение его уровня является адаптивной реакцией в ответ на повреждение. Повышение FGF2 предположительно играет негативную роль, способствуя повреждению олигодендроцитов.

ОБРАБОТКА СЫВОРОТОЧНОГО IGA КИСЛЫМ PH НЕ ВЛИЯЕТ НА ВЫСВОБОЖДЕНИЕ НЕЙТРОФИЛАМИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК

Раззоренова Е. А.*, Чурина Т. С., Горшкова Е. Н.

Нижегородский государственный университет им Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

*e-mail: elizavetarazzorenova1966@yandex.ru

Нетоз – ​специфическая форма запрограммированной клеточной гибели нейтрофилов, в ходе которой происходит высвобождение крупных паутинообразных структур, содержащих деконденсированный хроматин и антимикробные факторы. Несмотря на то, что нетоз считается одним из механизмов сдерживания инфекции, все больше

128

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

данных свидетельствует о прямом цитотоксическом действии ловушек на ткани, в результате чего нетоз сопровождает широкий спектр патологий, в основе которых лежит воспалительный процесс. Обычный, или суицидальный, нетозхарактеризуетсяразрушениемплазматическоймембраныигибельюклеткиичастоинициируетсячерезFc-ре- цептор. Недавно было продемонстрировано, что IgAявляется лучшим индуктором образования ловушек по сравнению с IgG. Ранее мы показали, что обработка IgAкислым pH расширяет спектр распознаваемых им бактериальных антигенов, но не влияет на фагоцитоз нейтрофилами бактерий.

Цель работы: оценить высвобождение нейтрофилами внеклеточных ловушек в ответ на взаимодействие с клетками E. coli, опсонизированными модифицированным IgA.

В ходеработыIgA,выделенныйиз комплексногоиммуноглобулиновогопрепарата(Микроген,Россия),обрабатывали (10 мин) 0,2 М глициновым буфером (pH 2,6 и 4,0) и диализовали (48 ч) против PBS (pH 7,4). Инактивированные клетки E.coli (2·109 кл/мл) инкубировали с IgA (5 мг/мл) (30 мин, 37 ), а затем (2 ч, 37 ) с человеческими нейтрофилами (1·106 кл/мл), которые также стимулировали TNF-α (25 нг/мл) или LPS (100 нг/мл). К образцам добавляли Sytox Green (Thermo Fisher, США) и измеряли количество высвобождаемой ДНК с помощью флуоресцентногосчитывателяSynergyMx(BioTek,США).Визуализацию нетозапроводилинаконфокальноммикроскопеZEISS LSM 800 (Carl Zeiss, Германия) с помощью антител к нейтрофильной эластазе (ab68672, Abcam, Великобритания) и вторичных антител, меченных Alexa Fluor 546 (Invitrogen, США). Установлено, что обработка IgA кислым pH не влияет на высвобождение нейтрофилами внеклеточных ловушек.

Таким образом, модифицированный IgA не способствует нетозу, что с физиологической точки зрения может иметь важное гомеостатическое значение.

Симпозиум Эволюционная электрофизиология сердца позвоночных животных

ИОННЫЕ ТОКИ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ ЭЛЕКТРИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ В КАРДИОМИОЦИТАХ РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП ПОЗВОНОЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

Абрамочкин Д. В.1,2,*, Филатова Т. С.1,2, Кузьмин В. С.1,2, Vornanen M.3

1МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва 2НМИЦК им. академика Е. И. Чазова, г. Москва 3University of Eastern Finland, Joensuu, Finland

*e-mail: abram340@mail.ru

Регулярные сокращения сердца позвоночных обусловлены возникновением и распространением по миокарду потенциалов действия (ПД). ПД генерируются за счет слаженной работы потенциалуправляемых ионных каналов, переносящих входящие натриевые и кальциевые токи, а также выходящие калиевые токи. Эти токи имеют ярко выраженную зависимость от времени, обусловленную кинетическими параметрами их активации и инактивации, в свою очередь зависящими от функционирования внутримолекулярного воротного механизма потенциалуправляемых каналов. Также важнейший вклад в обеспечение электрической активности вносят токи, переносимые калиевыми каналами входящего выпрямления и отвечающие в основном за поддержание негативного потенциала покоя.

В данном обзорном докладе будут сопоставлены характеристики предсердных и желудочковых ПД, а также формирующих их ионных токов, в кардиомиоцитах различных таксонов позвоночных животных. На основе литературных и собственных экспериментальных данных мы выделили сходные черты и различия между конфигурацией электрической активности в кардиомиоцитах различных таксонов позвоночных, а также определили остающиеся пробелы в наших знаниях. Хотя возбудимость кардиомиоцитов различных позвоночных обусловлена работой каналов, относящихся к одному суперсемейству, существуют яркие различия в конфигурации ПД между предсердными

ижелудочковыми миоцитами, между различными видами в пределах одного класса позвоночных, а также между эндотермными и эктотермными животными. Широкая вариабельность конфигурации ПД связана с межвидовыми различиями в размере животного, ЧСС, стадии онтогенеза, особенностях электромеханического сопряжения, температуре тела и снабжении сердечной ткани кислородом. Некоторые различия между таксонами обусловлены эволюционными изменениями генома, проявляющимися, например, в экспрессии различных ортологов натриевых

икалиевых каналов в кардиомиоцитах позвоночных. Существует удивительная вариабельность конфигурации ПД

иопределяющих ее ионных токов, обеспечивающих возбудимость сердца позвоночных в зависимости от внутренних и внешних факторов. Такое множество ионных механизмов представляет собой прекрасный материал для изучения способов адаптации или акклимации сердца позвоночных к определяющим физиологическим и экологическим условиям.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 14 00075.

129

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ВОЗБУЖДЕНИЕ ЖЕЛУДОЧКА СЕРДЦА АМФИБИЙ: ЭЛЕКТРИЧЕСКОЕ ИЛИ МЕХАНИЧЕСКОЕ?

Груббэ М. Е.*, Витязев В. А., Азаров Я. Э.

Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар

*e-mail: grubbe.me@gmail.com

Введение. Механизмы проведения возбуждения в сердце холоднокровных животных не ясны, активация желудочка вариабельна и происходит медленнее, чем у млекопитающих. Известно, что с помощью механического растяжения можно активировать желудочек амфибий, однако роль механической стимуляции при нормальном синусном ритме изучена мало. Цель данной работы – ​исследовать пространственную корреляцию между распределением локальных растяжений и последовательностью активации в желудочке сердца амфибий.

Методы исследования. Работа проведена на 13 анестезированных жабах (Bufo bufo) и изолированных препаратах желудочка сердца 14 жаб и 13 лягушек. Последовательность активации миокарда определяли методом контактного картирования потенциала. Время прихода возбуждения устанавливали по моменту dV/dt min в течение QRS-комплекса. Степень локального растяжения определяли с помощью видеорегистрации. Для искусственной механической стимуляции желудочка in vivo применяли внутрисердечное болюсное введение физиологического раствора. Оценку механических и электрофизиологических характеристик изолированных поперечных срезов желудочка проводили в перфузируемой камере с одновременной видеорегистрацией сократительного цикла и многоэлектродной регистрацией потенциала.

Результаты. При синусном ритме in vivo первичные очаги активации желудочка возникали в левой части основания. В этой же области наблюдалось наибольшее пресистолическое линейное растяжение стенки камеры в результате диастолического кровенаполнения и последующего сокращения предсердий. При введении в желудочек болюса физиологического раствора возникало возбуждение, при котором последовательность и продолжительность активации были близки к последовательности и продолжительности активации желудочка при синусном ритме.

Визолированных поперечных срезах желудочка, сделанных на разных уровнях по оси основание-верхушка, удавалосьвызватьвозбуждениетольков«парабазальном»срезе(граничащемсоснованием)спервичнымочагомвсубэндокарде его левой части (то есть, в зоне, соответствующей области первичной активации целого желудочка in vivo).

Вобласти первичного очага механоиндуцированного возбуждения в парабазальном срезе показано наличие крупных трабекул, не характерных для остального эндокарда.

Заключение. В левой парабазальной области желудочка обнаружена зона, высокочувствительная к механиче-

ской стимуляции. Механоиндуцированная активация этой области может участвовать в передаче возбуждения от предсердий к желудочку в сердце амфибий.

Danio rerio как модельный объект для исследования кардиопротекторных фармакологических препаратов

Карпушев А. В.1,2*, Михайлова В. Б.2

1Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург 2Национальный медицинский исследовательский центр имени В. А. Алмазова Минздрава России, г. Санкт-Петербург

*e-mail: akarpushev@yandex.ru

Тропическая пресноводная рыбка Danio rerio широко используется в качестве модельного организма для электрофизиологических исследований сердца и скрининга фармакологических препаратов. Подобно ЭКГ человека, на ЭКГ D. rerio четко различимы P, QRS и T зубцы. Потенциал действия (ПД) желудочковых миоцитов D. rerio имеет сходный с ПД клеток сердца человека профиль с выраженной фазой плато и близкие значения длительности

ичастоты следования ПД. Основные деполяризующие (INa, ICaL) и реполяризующие (IK1, IKr и IKs) ионные токи, лежащие в основе генерации ПД, представлены в кардиомиоцитах D. rerio как и в клетках миокарда человека. Высокая степень схожести в параметрах биоэлектрической активности миокарда D. rerio и человека позволяет экстраполировать экспериментальные данные, полученные в исследованиях на рыбке на человеческий организм. Одним из перспективных классов кардиопротекторных препаратов являются глифлозины, ингибиторы натрий-глюкозного котранспортера 2-го типа SGLT2. Показано, что эмпаглифлозин, канаглифлозин и дапаглифлозин замедляют прогрессирование сердечной недостаточности, снижают риск развития аритмий и наступление внезапной сердечной смерти. Нами было выполнено исследование эффектов эмпаглифлозина на биофизические параметры ионных токов

иамплитудно-временные характеристики ПД кардиомиоцитов D. rerio.

Ионные токи регистрировали методом patch clamp в конфигурации whole cell в изолированных желудочковых кардиомиоцитах D. rerio, полученных методом энзиматической диссоциации. Регистрация ПД выполнялась на изолированном сердце при помощи стандартной микроэлектродной техники.

Предварительная инкубация клеток в течение 2 часов в присутствии эмпаглифлозина (5мкМ) увеличивала плотность быстрой и медленной компонент калиевого тока задержанного выпрямления IKr и IKs. Действие эмпаг-

130

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/