2 курс / Нормальная физиология / XXIV_съезд_физиологического_общества_им_И_П_Павлова

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

сивного двигательного поведения («движение на месте»); у правшей понизилось количество актов «вертикальная стойка», характеризующих психоэмоциональное поведение. Остальные показатели поведения у подготовленных к стрессу крыс не отличались от поведения интактных животных. Для крыс из группы II характерно значительное изменение всех видов поведения: у левшей снижена исследовательская активность (акты «стойка с упором», «норка»,«обнюхивание»),ауправшейсниженоактивноедвигательноеповедение(«локомоция»)иповышенопассивное двигательное поведение («сидит»). Кроме того, у всех крыс из группы II наблюдалось повышение груминга, характеризующее изменение психоэмоционального состояния.

У левшей при переживании стресса без подготовки снижается исследовательская активность, а у правшей –​  двигательная.Втожевремя,уподготовленныхсамокприпереживанииреальногоВСповедениевтестеОПчастично соответствует показателям интактных животных: для левшей характерна нормализация психоэмоциональной, а для правшей – ​двигательной активности. Таким образом, при подготовке к переживанию ВС важно учитывать моторную преференцию исследуемой особи.

НЕЙРОВЕГЕТАТИВНЫЕ РЕАКЦИИ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ КРАТКОВРЕМЕННОЙ ИЗОЛЯЦИИ

Байгужин П. А.1,*, Кудряшов А. А.2

1Южно-Уральский государственный университет (национальный исследовательский университет), г. Челябинск

2Генеральный директор АНО «Научно-исследовательский центр психофизиологии коммуникации», г. Екатеринбург

*e-mail: baiguzhinpa@susu.ru

Цель: выявить особенности реагирования автономной нервной системы (АНС) лиц, находящихся в условиях изоляционной камеры.

Организация и методы. В обследовании приняли участие 30 добровольцев – девушек​ 19,8 ± 0,6 лет, практически здоровых. Из выборки обследованных исключались лица, имеющие клаустрофобию, заболевания ЦНС, перенесшие черепно-мозговые травмы.

РеактивностьАНСопределялинаосновеанализаданныхЭКГ-обследования(ООО«НейроСофт»).Кардиорит- мограммы (КГР) обрабатывали с использованием алгоритмов временного и математического анализов с последующей интерпретацией показателей. Регистрацию КРГ проводили стационарно с временным отвлечением от учебных занятий.Сенсомоторнаядепривацияреализованаспомощьюизоляционнойкамеры,отличающейсяполнымэкранированием электромагнитного поля радиочастотного диапазона и шумового воздействия, оборудованной системами автономной вентиляции и освещения, эргономичным рабочим местом.

Результаты. Сравнение показателей, характеризирующих функциональное состояние АНС проводили в двух сериях регистрации и анализа данных: «Фон – Начало​ изоляции» (эпоха 0 100 RR-циклов), «Начало – Конец​ изоляции» (эпоха 101 201 RR-циклов). Далее представлены только статистически значимые результаты (Z > –2,0 при p < 0,04). Первая серия: отмечается снижение активности симпатического отдела АНС, что проявляется в снижении АMо на 8,2 %; индексов: ИВР и ПАПР – на​ 16,6 %, ИН – на​ 23,1 %; приросте SDNN – на​ 6,4 % – до​ 50 мс, pNN50 – на​

20,6 %. Результаты второй серии регистрации: на пятой минуте изоляции отмечается умеренная тахикардия (снижение M на 4,1 % до 0,75 с); что выражено в относительно дестабилизирующем воздействии симпатического отдела нервной системы,коррелирующимсподключениемцентральных структур управленияритма – ​подкорковыхритмов (прирост АМо на 10,5 %). Соответственно ИВР увеличивается на 51,4 % – ​до 221 у. е.; ПАПР – ​на 14,4 %, ИН – ​на

42,6 %; снижаются SDNN – на​ 18,0 % – до​ 41 мс, RMSSD – на​ 5,7 %, pNN50 – на​ 23,2 %.

Заключение. Срочная реакция АНС на условия экспериментальной сенсомоторной депривации схожа по эффектам с таковыми у ориентировочной реакции. Первые две минуты пребывания в условиях экспериментальной изоляции запускают механизмы активности ретикулярной формации, что отражается в понятии «мобилизация» (функциональных резервов) и сопровождается кратковременным «угнетением» деятельности ЦНС и обусловлено вагусной активностью. На четвертой-пятой минуте кратковременной сенсомоторной депривации – ​развивается компенсаторный механизм, проявляющийся в симпатической активности АНС.

ИНДИВИДУАЛЬНЫЕ АДАПТАЦИОННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ УЧАЩЕЙСЯ МОЛОДЕЖИ К АКАДЕМИЧЕСКОЙ СРЕДЕ

Постнова М. В.*

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Волгоградский государственный медицинский университет», г. Волгоград

*e-mail: postnova@volsu.ru

В современной системе высшего образования отсутствует мониторинг состояния учащейся молодежи с учетом индивидуальных адаптационных возможностей человека.

Оценка эффективности мероприятий по повышению адаптации какадемической среде и академическим нагруз-

91

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

кам с позиций здоровьесберегающего сопровождения студентов была проведена за последние четыре учебных года. Комплекс для выявления индивидуального набора типологий, реактивности и функционального состояния человека, мониторинг уровня здоровья и адаптации к образовательной среде в течение 4 семестров осуществлялся в совокупности у 344 человек. Референтную группу составили 162 студента, пилотную группу – 182​ студента. В этой группе все мероприятия проводили с учетом набора индивидуальных типологий и прогноза адаптации. В работе со студентами был использован новый компьютерный комплекс УФПТ 1/30 «Психофизиолог». Итоговыми критериями адаптации к академической среде, стали показатели усвоения ООП, а также сохранения контингента

в учебных группах.

При этом, для разработки более адекватного сопровождения, был исследован ряд психофизиологических характеристик студентов из референтной группы. Значимое влияние на эмоциональную компоненту адаптивного поведения оказывали акцентуации характера, являющиеся своеобразным продолжением типологических свойств человека. Проведенные сопоставления показали, что в подгруппы риска попадет большинство студентов референтной группы, имеющих те ли иные акцентуации.

Из акцентуаций темперамента в подгруппах риска, значительно чаще встречались индивиды, демонстрирующиепризнакигипертимности(склонностикповышенномунастроению),циклотимичности(перепадамнастроения) и экзальтированности (в аффективной манере выражать свои эмоции). В совокупности они составили почти 40 % студентов подгрупп риска. Из акцентуаций свойств характера обращает на себя внимание присутствие большого процента лиц с признаками возбудимости.

Такимобразом,былобоснованиразработаналгоритмобследованияивыборстратегииитактикиадаптации студентов, достаточный для индивидуального прогноза к воздействию средовых нагрузок в условиях массового обследования организованных контингентов.

ВЛИЯНИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА В ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОМ ТРАКТЕ, ИНДУЦИРОВАННОГО УЛЬЦЕРОГЕННЫМ ДЕЙСТВИЕМ ИНДОМЕТАЦИНА, НА ПОВЕДЕНИЕ КРЫС В ПРИПОДНЯТОМ КРЕСТООБРАЗНОМ ЛАБИРИНТЕ

Пунин Ю. М.*, Комкова О. П., Ярушкина Н. И.

Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: puniny@infran.ru

Нестероидные противовоспалительные препараты, включающие индометацин (ИМ), широко применяются

вклинике, однако они оказывают побочное действие на желудочно-кишечный тракт (ЖКТ). Ранее нами показано, что через 4 ч после введения ИМ у крыс наблюдается образование эрозий в желудке, которые заживают в течение последующих 48 ч, но при этом возникают повреждения в тонком кишечнике (Filaretova et al., 2011). Поражение ЖКТ, вызванное ИМ, сопровождается изменением сердечно-сосудистых показателей, температуры тела, локомоции и болевой чувствительности (Filaretova et al., 2011; Yarushkina, Filaretova, 2019). Цель исследования заключалась

визучении влияния патологического процесса в ЖКТ, индуцированного действием ИМ, на поведение крыс в приподнятом крестообразном лабиринте (ПКЛ). Тестирование поведения осуществлялось через 4 и 48 ч после введения ИМ (35 мг/кг, подкожно) или его растворителя голодавшим в течение 24 ч крысам. Для оценки поведения крыс

вПКЛ использовали программно-аппаратный комплекс «Минотавр» с помощью, которого регистрировали время нахождения крысы в центре, в открытых и закрытых рукавах; время двигательной активности или неподвижности животного, а также расстояние, пройдённое крысой за время нахождения в ПКЛ. После завершения тестирования крыс декапитировали, извлекали желудок и тонкий кишечник для оценки состояния слизистой оболочки, брали кровь для оценки содержания кортикостерона. Площадь повреждений слизистой оболочки оценивали с помощью программы ImageJ. Как и в предыдущих наших исследованиях, ИМ через 4 ч вызывал образование эрозий в желудке,средняяплощадькоторыхуменьшаласьчерез48ч,чтосвидетельствовалоопроцессеихзаживления.Заживление ИМ-вызванных эрозий в желудке через 48 ч сопровождалось появлением повреждений в тонком кишечнике. Как контрольные животные, так и крысы, которым вводили ИМ, большее количество времени находились в закрытых рукавах ПКЛ. Образование эрозий в желудке через 4 ч после введения ИМ не влияло ни на время пребывания крыс

вцентре, открытых или закрытых рукавах, ни на время движения животных и пройденное ими расстояние. Однако через48чпослевведенияИМ,когданаблюдалисьповреждениятонкогокишечника,времядвигательнойактивности крыс и пройденное ими расстояние уменьшалось, при этом время «замирания» (неподвижности), наоборот, увеличивалось. Полученные данные свидетельствуют об изменении поведения крыс в условиях индуцированного ИМ поражения ЖКТ, проявляющемся в снижении их активности в ПКЛ.

Финансовая поддержка: Госпрограмма 47 ГП «Научно-технологическое развитие Российской Федерации» (2019 2030), тема № 0134 2019 0001.

92

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Симпозиум Физиология межклеточного взаимодействия

ФИЗИОЛОГИЯ КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ: ИНСТРУКТИВНАЯ РОЛЬ СОЕДИНИТЕЛЬНОТКАННОГО МАТРИКСА

Андреева Е. Р.*, Матвеева Д. К., Буравкова Л. Б.

Институт медико-биологических проблем РАН, г. Москва

*e-mail: andreeva1564@gmail.com

Внеклеточный матрикс (ВКM) представляет собой динамическую трехмерную сеть макромолекул, обеспечивая структурную поддержку клеток и тканей. Он также играет ключевую регуляторную роль, управляя функциями клеток по механизму обратной связи, позволяя системе в целом эффективно адаптироваться к внешним воздействиям. Структурные компоненты ВКМ (белки, гликопротеины, протеогликаны, гликозаминогликаны), комплекс ремоделирующих молекул (протеаз/антипротеаз), депонируемые/высвобождаемые биологически активные медиаторы образуют единую функциональную систему – ​матрисом, обеспечивающий физиологический гомеостаз в клеточном микроокружении. СпецифическиефенотипыВКM конфигурируют различныетканивсоответствии стребованиями к их функциям. При этом, ВКM может постоянно адаптироваться под действием механических, биохимических, физических сигналов, что обеспечивает точную настройку ремоделирования матрикса.

ВКМ наиболее представлен в соединительных тканях, определяя их функциональность. В нашей лаборатории проводятсяисследования,направленныенавыяснениевлияниятканевогоуровняО2 – «​физиологической»гипоксиина особенности продукции и регуляции ВКМ стромальными предшественниками – мультипотентными​ мезенхимальными стромальными клетками (МСК).Сравнительный анализ показал, что МСК, постоянно культивируемые вусловиях «физиологической» гипоксии (5 %О2) и при нормоксии (20 %О2), продуцировали хорошо развитый ВКМ, практически не различающийся по содержанию коллагеновых и неколлагеновых компонентов. В результате полногеномного скрининга дифференциальной экспрессии матрисом-ассоциированных генов вМСК при 5 и20 %О2 обнаружен сдвиг профиля транскрипции ВКМ-ассоциированных молекул: снижение активности генов, ответственных за продукцию матрикса,иповышениеактивностигеновферментов,егодеградирующих;снижениеэкспрессиигеновинтегринов,которые «заякоривают» клетки кматриксу. Это дает основание предположить, что вслучае повреждения МСК окажутся более «подготовленными» к реализации репаративных свойств, таких как миграция и пролиферация.

ПоданнымСЭМдецеллюляризированныеВКМ(дцВКМ)сохранялиструктурныеособенностиВКMкультивируемых МСК, но отличались по индуктивному потенциалу. На 5 %О2-дцВКM после рецеллюляризации была выше эффективность адгезии МСК. Обнаружено снижение спонтанного остеокоммитирования, что указывает на сохранение дцВКМ «гипоксических» компетенций.

Приведенныерезультатыдемонстрируютрольфакторовмикроокружения,такихкак«физиологическая»гипоксия, в формировании потенциала ВКМ, что важно для понимания физиологических механизмов регуляции клеточного микроокружения.

Финансовая поддержка: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23 15 00062.

ВЛИЯНИЕ RHO-СИГНАЛЬНОГО ПУТИ НА ВНУТРИКЛЕТОЧНУЮ ЛОКАЛИЗАЦИЮ

YAP/TAZ В КЛЕТКАХ ЛЕГКИХ МЫШИ

Говорова И. А.1*, Сутягина О. И.1, Никиточкина С. Ю.1, Новикова Ю. А.1,2, Воротеляк Е. А.1

1 ФГБУН Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва 2 ФГБОУ ВО Российский химико-технологический университет им. Д. И. Менделеева, г. Москва

*e-mail: ischenko.i.a@gmail.com

Активация канонического Hippo сигналинга приводит к накоплению YAP/TAZ в цитоплазме, а следствием деактивации пути Hippo является ядерное аккумулирование YAP/TAZ, запускающее, в том числе пролиферацию и дифференциацию клеток. При этом внутриклеточная локализация YAP/TAZ может регулироваться неканоническим способом при участии цитоскелета и внеклеточного матрикса, что требует активности Rho GTPase и может являться независимым от Hippo пути. В то же время,YAPможет индуцировать напряжение цитоскелета, что приводит к растяжению клеток. Для исследования влияния Rho пути на внутриклеточную локализациюYAP/TAZ в работе использованы разные условия культивирования клеток легких мышей: на пластике (2D) и в составе органоидов (3D).

Клетки были выделены из легких мышей Р7 линии С57Вl/6. Для культивирования в 3D живые клетки были ресуспендированы с GFR Matrigel (1:1). Культивирование органоидов в течение 14 сут – контрольная​ среда, в присутствии ингибитора YAP – вертепорфина​ (ВТП, 1 мкМ) – 10​ сут. Для культивирования в 2D использована мезенхима, полученная путём магнитного сортинга (EpCam–CD31–CD45–).

ИЦХ и анализ в FiJi выявили преобладание ядерной локализации YAP в клетках, культивируемых в присутствии ВТП в 2D. ПЦР анализ клеток показал выраженное снижение экспрессии YAP/TAZ при добавлении ВТП.

93

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Однако ПЦР анализ органоидов не показал существенного снижения экспрессии YAP/TAZ при ингибировании YAP-сигналинга. Уровень экспрессии генов мишеней Cсn1, Ccn2 значимо уменьшается при добавлении ВТП как для 2D, так и для 3D. Экспрессия Acta2 при культивировании в составе органоидов уменьшается при добавлении ВТП, при 2D культивировании наоборот – возрастает​ . Ген Ahrgef17, являющийся эффектором YAP в Rho–ROCK- pMLC каскаде, экспрессируется в контроле как в 2D, так и в 3D, но при добавлении ВТП уровень его экспрессии значительно снижается в 2D. В органоидах ген Ahrgef17 экспрессируется практически на том же уровне, что ивконтроле.Прикультивированиив2Dнапряжениецитоскелетавозрастает,засчетэтогоYAPлокализованвядрах, однако, при добавлении ВТП не происходит снижения напряженности цитоскелета. В органоидах ВТП ингибирует мишени Cсn1, Ccn2, что влияет на пролиферацию, но уровень YAP остается прежним. Динамика экспрессии генов позволяет предположить, что механизмы, контролирующие внутриклеточную локализацию YAP/TAZ, для 2D и 3D культивирования различны и для органоидов внутриклеточная локализация YAP/TAZ обусловлена сложным взаимодействием Rho и Hippo сигнальных путей.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 21 74 30015.

ИММУНОМОДУЛЯЦИЯ ПРО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ И МАКРОФАГОВ ВНЕКЛЕТОЧНЫМИ ВЕЗИКУЛАМИ

Ключерев T. O.1,*, Сулейманов Ш. К.1,2, Юрканова М. Д.1, Теплова А. А.1,, Власова И. И.1, Тимашев П. С.1,2,3,4

1Институт Регенеративной Медицины Сеченовского Университета, г. Москва 2 Центр мирового уровня “Цифровой биодизайн и персонализированное здравоохранение” Сеченовского

Университета, г. Москва 3 Научно-технологический парк биомедицины Сеченовского Университета, г. Москва

4Химический факультет МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: timofeyklyucherev@gmail.com

Введение. Возможность контролировать иммунный ответ во время заживления ран является важной задачей регенеративной медицины. Несколько исследований показали, что внеклеточные везикулы (ВВ), такие как ма- трикс-связанные везикулы (МСВ) и ВВ из секретома клеток способны модулировать воспаление, влияя на поляризацию макрофагов и на активацию нейтрофилов, которые играют ведущую роль в воспалительной стадии регенерации ран. Целью данного исследования была оценка иммуномодулирующего действия ВВ на поляризацию макрофагов M1 человека и радикал-продуцирующую активность нейтрофилов.

Методы исследования. Нейтрофилы и макрофаги выделяли из крови здоровых доноров на градиенте Histopaque. Везикулы были выделены методом ультрацентрифугирования – МСВ​ после протеолиза внеклеточного матрикса и ВВ из секретома фибробластов 3Т3. Полученные ВВ добавляли к макрофагам вместе с индукторами поляризации в фенотип M1 (IFN-γ+LPS). Влияние ВВ на фенотип М1 макрофагов оценивалось с помощью ИФА. Продукция АФК у макрофагов и нейтрофилов оценивалась методом люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ). ВВ были добавлены к цельной крови с последующей оценкой активации в течение часа Нейтрофилы, изолированные из крови, культивировались в течение суток с ВВ перед измерением ХЛ.

Результаты. ИФА показал, что МСВ и экзосомы снижали выработку воспалительного цитокина TNF-α в M1-макрофагах по сравнению с контрольными клетками, получавшими только IFN-γ+LPS. Инкубация макрофагов с ВВ вызывала снижение продукции АФК макрофагами М1 по сравнению с контрольными клетками, что было подтверждено методом ХЛ. Культивация ВВ с цельной крови привело к усилению продукции АФК нейтрофилами, при этом эффект достигал максимума после часа инкубации. Однако при культивации нейтрофилов с ВВ в течение 24 часов, наблюдалось уменьшение продукции АФК.

Заключение. Наше исследование показало, что ВВ, полученные из фибробластов 3T3, способны поляризовать макрофаги M1 в сторону фенотипа макрофагов, обладающего меньшей провоспалительной активностью, что сопровождалось уменьшением образования АФК и провоспалительных цитокинов. Влияние ВВ на активацию нейтрофилов имело двоякий эффект: при инкубации с кровью в течение часа мы наблюдали активацию нейтрофилов и усиление продукции АФК, при этом более длительное воздействие ВВ на изолированные нейтрофилы привело к ингибированию продукции АФК.

Финансовая поддержка: исследование поддержано Министерством науки и высшего образования Российской Федерации в рамках соглашения № 075 15 2021 596.

МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ ПРЕДПОСЫЛКИ УСКОРЕННОГО СТАРЕНИЯ МОЗГА

Колосова Н. Г.*

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

*e-mail: kolosova@bionet.nsc.ru

Предполагается, что предпосылки к ускоренному старению мозга – ​основному фактору риска болезни Альцгеймера (БА) – ​самой распространенной сенильной деменции – ​могут формироваться уже в ранний постнатальный

94

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

период, когда завершается развитие мозга. На преждевременно стареющих крысах OXYS, уникальной модели спорадической формы БА (>95 % случаев), мы подтвердили справедливость этой гипотезы. Выявлены особенности созревания мозга крыс OXYS в ранний постнатальный период (в возрасте Р0-Р20, Р – ​дни после рождения), способные быть предпосылками развития нейродегенеративных изменений в дальнейшем. Одна из них – ​недостаточная глиальнаяподдержка – ключевой​ регуляторформированияифункционированиянейронныхсетей(Rudnitskayaetal., 2019 2022). Это подтвердило исследование транскриптомов (данных RNA-seq) префронтальной коры и гиппокампа крыс OXYS (контроль – крысы​ Вистар). В критический период созревания мозга (Р3 и Р10) у крыс OXYS выявлены изменения экспрессии >1000 генов, указывающие на недостаточность астроцитарной и микроглиальной поддержки, митохондриальных функций, задержку ангиогенеза. Впервые сопоставлены транскриптомы коры и гиппокампа с раннего постнатального до возраста прогрессии признаков БА (в Р3, Р10, Р20, в 5 и 18 мес.), определены метаболические пути и процессы, изменения в которых предшествуют и сопутствуют их развитию у крыс OXYS. Важно, что самые значительные и сопоставимые различия в экспрессии генов и связанных с ними процессов наблюдаются в ранний постнатальный период и на стадии ярко выраженных нейродегенеративных изменений, когда они сопоставимы у крыс OXYS и пациентов с БА (Stefanova et al., 2015 2023). Таким образом, снижение эффективности формирования нейронных сетей и задержка созревания мозга, очевидно, способствует развитию БА-подобной патологии у крыс OXYS. Этому, можно полагать, могут способствовать также сокращение сроков беременности и снижение массы тела при рождении, выявленные у крыс OXYS. Наши результаты поднимают вопрос о том, что уменьшение продолжительностибеременностиизадержкаразвитиямозгавмладенчествемогутбытьфакторамивысокогориска развития БА в будущем.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда №№ 19 15 00044.

СНИЖЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА РЕЗИДЕНТНЫХ ПРОГЕНИТОРНЫХ КЛЕТОК ПОЧКИ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОМ СТАРЕНИИ

Плотников Е. Ю.1*, Буян М. И.2, Попков В. А.1, Зорова Л. Д.1, Певзнер И. Б.1, Силачев Д. Н.1, Зоров Д. Б.1, Андрианова Н. В.1

1НИИ ФХБ им. А. Н. Белозерского МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва 2Факультет биоинженерии и биоинформатики МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: plotnikov@belozersky.msu.ru

Старение негативно влияет на многие функции организма, что, в итоге, приводит к необратимым последствиям для здоровья и снижению качества жизни пожилых людей. Почки, как и многие другие органы, с возрастом подвергаются физиологическим изменениям, ухудшающим их ключевые функции и приводящим к развитию различных патологических состояний. Возможной причиной снижения устойчивости почечной ткани к повреждению с возрастом может быть уменьшение количества резидентных прогениторных клеток, что снижает регенеративный потенциал органа. Хотя подобные изменения при старении были ранее показаны для некоторых органов, исследования, оценивающие изменение с возрастом количества резидентных прогениторных клеток почки, до сих пор не проводились.

Целью данной работы было изучить изменение количества и пролиферативной способности резидентных прогениторных клеток почки с возрастом. В качестве одного из возможных маркеров резидентных прогениторных клеток почки рассматривается белок промежуточных филаментов нестин. В связи с этим в данной работе были проведены эксперименты на молодых и старых трансгенных мышах, несущих репортерный ген GFP под промотором гена нестина, проанализировано изменение в процессе старения количества нестин-положительных клеток в почке in vivo, скорость их пролиферации in vitro, а также устойчивость к нефротоксическому действию цисплатина и моделированию ишемии.

Былопоказано,чтоустарыхтрансгенныхмышейзначительносниженообщееколичествонестин-GFPположи- тельных клеток в интактной почке. Несмотря на уменьшение количества этих клеток, у старых мышей прогениторные клетки все равно выявлялись в основном в предполагаемых нишах прогениторных клеток почки, а именно в S3 сегменте и почечном сосочке. Эксперименты in vitro на первичных культурах эпителия почечных канальцев (ЭПК) выявили, что с возрастом происходит снижение пролиферативной активности клеток ЭПК, и вместе с этим значительно медленнее происходит накопление нестин-положительных клеток. Также были проведены исследования влияния повреждающих воздействий на пролиферацию и жизнеспособность культур ЭПК. Так, жизнеспособность культур ЭПК от молодых мышей была значительно выше после инкубации с цисплатином. Аналогичным образом, клетки ЭПК от молодых мышей значительно быстрее восстанавливались после кислородно-глюкозной депривации, моделирующей ишемию почки.

Таким образом, можно сделать вывод, что с возрастом происходит резкое уменьшение количестванестин-поло- жительных резидентных прогениторных клеток почки, что может объяснять возрастное снижение регенеративной способности почечной ткани и наблюдаемое падение устойчивости к повреждающим воздействиям.

Работа поддержана Российским научным фондом, грант № 21 75 30009.

95

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ В ПОВРЕЖДЕНИИ ЭПИТЕЛИЯ ЛЕГКИХ ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ШТОРМА IN VITRO

Силачев Д. Н.1,2*, Шевцова Ю. А.1, Горюнов К. В.1, Бабенко В. А.2, Певзнер И. Б.2, Вторушина В. В.1, Инвияева Е. В.1, Кречетова Л. В.1, Зорова Л. Д.2, Плотников Е. Ю.2, Зоров Д. Б.2, Сухих Г. Т.1.

1ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В. И. Кулакова», г. Москва

2ФГБОУ ВО НИИ физико-химической биологии имени А. Н. Белозерского МГУ им. М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: silachevdn@belozersky.msu.ru

Воспалительное повреждение легких является основной причиной проблем со здоровьем во многих странах

иявляетсячастнойпричинойсмертностивотделенияхинтенсивнойтерапии.ВовремятекущейпандемииCOVID 19 у большинства пациентов наблюдалась серьезная пневмония, вызванная системным воспалением – ​острым респираторным дистресс-синдром (ОРДС). Патогенные инфекции вызывают цитокиновый шторм путем гиперактивации иммунных клеток, которые, в свою очередь, выделяют избыточное количество цитокинов, вызывающих ОРДС. Изучение физиологии клеточного микроокружения при моделировании цитокинового шторма in vitro имеет решающее значение для точного воссоздания сложной патофизиологии заболевания. Целью работы являлось разработать in vitro модель повреждения легочной ткани при ОРДС, наблюдаемом у больных COVID 19, для изучения патологических процессов и новых терапевтических подходов к лечению последствий цитокинового шторма.

Была разработана in vitro тест-система для моделирования повреждения легочного эпителия в результате развития гипервоспалительной реакции, основанная на совместном культивировании клеток легочного эпителияA549

имононуклеарных клеток периферической крови человека (МКПК), активированных липополисахаридом (ЛПС). В данной модели после 24 часов сокультивирования резко снижалась скорость пролиферации клеток А549, что связано с развитием окислительного стресса и индукцией паноптотической смерти. В кондиционированной среде значительно повышалась концентрация цитокинов и хемокинов, включая TNF-α, IFN-α, IL 6 и IL 1a, что соответствовало профилю цитокинов у пациентов с тяжелой манифестацией COVID 19. Наряду с этим был проведен анализ противовоспалительных эффектов дексаметазона, ЛПС из Rhodobacter sphaeroides (ЛПС-RS), полимиксина В, а также мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и внеклеточных везикул МСК (ВВ). Дексаметазон и полимиксин В восстанавливали пролиферативную активность клеток A549 и снижали концентрацию провоспалительных цитокинов. МСК демонстрировали двойственный эффект, стимулируя выработку как провоспалительных цитокинов, так и факторов роста, которые регенерируют легочную ткань. ЛПС-RS и ВВ не проявляли выраженных эффектов.

Таким образом, разработанная тест-система может быть использована как для изучения молекулярных и клеточных патологических процессов, так и для оценки эффективности различных терапевтических подходов для коррекции гипервоспалительного ответа у пациентов с ОРДС.

Финансовая поддержка: грант Российского фонда фундаментальных исследований № 20 04 60270/20.

РЕЦЕПТОР-ЗАВИСИМАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНОМ МИКРООКРУЖЕНИИ

Суздальцева Ю. Г.*

Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН, г. Москва

*e-mail: yu_suzdaltseva@mail.ru

В очаге воспаления мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК) обладают способностью динамично менять свой экспрессионный и секреторный профиль в ответ на стимулы, поступающие от микроокружения, и модулировать процессы восстановления поврежденной ткани. Изучение молекулярных механизмов регуляции функциональной активности МСК в провоспалительном микроокружении позволит разработать новые принципы клеточной и лекарственной терапии при заболеваниях, связанных с нарушениями регенеративных процессов.

Для исследования функциональной активности МСК в провоспалительном микроокружении in vitro использовали систему смешанных культур, в которых МСК сокультивировали с мононуклеарными клетками периферической крови, активированными фитогемагглютинином (актМПК). Под действием сигналов, поступающих от актМПК в этих условиях, в МСК происходило изменение морфофункциональных свойств, которое выражалось в индукции экспрессии гена IDO, синтеза молекулы HLA-DR и костимуляторных молекул CD80/CD86, характерных для дендритных клеток, значительным повышением уровня экспонирования на мембране молекулы межклеточной адгезии ICAM 1, а также в приобретении способности угнетать пролиферацию актМПК. Исследование цитокинового профиля с помощью мультиплексных технологий выявило увеличение концентраций IL 1, IL 6, IFN-γ, G-CSF в супернатантах сокультур по сравнению с раздельными культурами клеток. Анализ полученных данных показал, что рецепторное взаимодействие молекул HLA-DR и костимуляторных молекул CD80/CD86 на МСК с их

96

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

контррецепторами на CD4+Т-лимфоцитах играет основную роль в индукции синтеза и функциональной активности IDO в МСК. А связывание молекул ICAM 1 на МСК с интегрином LFA 1 на поверхности T-лимфоцитов приводит к увеличению секреции IFN-γ клетками и играет опосредованную роль в индукции синтеза IDO в МСК через воздействие IFN-γ. Воздействие растворимого IFN-γ и прямые межклеточные взаимодействия МСК и Т-лим- фоцитов образуют регуляторную петлю с положительной обратной связью, способствующую затуханию острой воспалительной реакции.

Полученныерезультатыпозволяютпо-новомувзглянутьнаподходыкпоискуиидентификациипотенциальных факторов прекондиционирования МСК для получения функционально специфицированных биомедицинских клеточных препаратов (БМКП) для более эффективного лечения воспалительных заболеваний.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 24 00026.

СИГНАЛЬНЫЕ МЕХАНИЗМЫ НАЧАЛЬНЫХ ЭТАПОВ ВЫБОРА НАПРАВЛЕНИЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК

Тюрин-Кузьмин П. А.*, Чечехин В. И., Кулебякин К. Ю., Калинина Н. И., Попов В. С., Ткачук В. А.

Кафедра биохимии и регенеративной биомедицины Факультета фундаментальной медицины МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: tyurinkuzmin.p@gmail.com

Введение. Метаболические болезни, связанные с нарушениями функционирования жировой ткани, приобрели характер пандемии. Такие болезни как сахарный диабет, метаболический синдром и сердечно-сосудистые заболевания являются одними из ведущих причин инвалидизации и потери трудоспособности людей. Ключевой причиной развития ожирения является нарушение процессов обновления жировой ткани, воснове которого лежит особый подтипстволовыхклетоквзрослогоорганизма,мультипотентныестромальныеклетки(МСК).МСКобеспечиваютпостоянноеобновлениежировойткани,превращаясьвразличныетипыклетокжировойткани,такиекакбелыеадипоциты, бежевые адипоциты, регуляторные клетки. МСК проявляют функциональную гетерогенность, которая проявляется в различной чувствительности отдельных клеток к гормонам-регуляторам функционирования жировой ткани.

Методы. В данной работе мы использовали методы анализа внутриклеточных сигнальных каскадов на уровне одиночных клеток для регистрации функциональной гетерогенности МСК и стандартные протоколы дифференцировки клеток. Кальциевую сигнализацию мы регистрировали при помощи кальциевого красителя Fluo8.

Результаты. Мы обнаружили, что большинство клеток в популяции МСК несут на своей поверхности рецепторы ко множеству гормонов. Несмотря на это, на конкретный индивидуальный гормон способна отвечать лишь небольшая доля клеток в популяции. При этом, группы клеток, воспринимающие определенный гормон, характеризуются определенной функцией, которую они выполняют в рамках функционирования целостной ткани. Мы показали функциональные субпопуляции МСК, в рамках которых клетки отвечают на действие гормона единообразно и обладают сходным дифференцировочным потенциалом. Мы показали уникальную способность серотонина и норадреналина к пермиссивному действию на альфа1А-адренорецепторы в МСК. Стимуляция HTR6 рецепторов и бе- та3-адренорецепторов, соответственно, через 6 9 часов повышает экспрессию альфа1А-адренорецепторов в МСК. Этот феномен связан с выбором направления дифференцировки МСК между контрактильным фенотипом и теплопродуцирующими бежевыми адипоцитами.

Заключение. Таким образом, МСК проявляют функциональную гетерогенность, которая связана с дифференцировочным потенциалом отдельных клеток популяции МСК.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 21 15 00311.

ДЕЦЕЛЛЮЛЯРИЗОВАННЫЙ ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ МАТРИКС УСИЛИВАЕТ СПОСОБНОСТЬ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ/СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК К ЗАЖИВЛЕНИЮ РАН

Ушаков Р. Е.1, Ратушный А. Ю.2, Буравкова Л. Б.3, Бурова Е. Б.4*

1,4 Институт цитологии РАН, г. Санкт-Петербург 2,3 Институт медико-биологических проблем РАН, г. Москва

*e-mail: lenbur87@mail.ru

Мезенхимные стромальные/стволовые клетки (МСК) считаются перспективным терапевтическим средством для применения в медицине, поскольку секретируют множество паракринных факторов, стимулирующих репаративные процессы. В настоящее время разрабатываются методы пре-кондиционирования МСК (культивирование в гипоксических условиях, обработка цитокинами или фармакологическими агентами и др.), направленные на повышение секреторной активности МСК.

Известно, что децеллюляризованный внеклеточный матрикс (дВКМ) – ​многокомпонентная, сложно устроенная сеть белков, оказывающих всестороннее влияние на клеточные функции, – ​имитирует естественное клеточное ми-

97

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

кроокружение и обеспечивает клеткам более физиологичный субстрат по сравнению с культуральным пластиком. Однако вопрос о влиянии дВКМ на секреторную активность МСК остаётся практически неизученным.

Результаты тестирования децеллюляризованного внеклеточного матрикса, депонированного МСК Вартонова студняпуповинычеловека,показалиналичиеосновныхбелковВКМивыявилиотсутствиеклеточныхкомпонентов; доказательством биологической активности полученного матрикса послужила существенная стимуляция пролиферации и миграции посеянных на него клеток, согласно данным проточной цитометрии и цейтраферной съёмки. Для проверки гипотезы о модулирующем эффекте дВКМ на секреторный профиль МСК, культивировали МСК различного происхождения (эндометрий, пульпа зуба, Вартонов студень пуповины человека и костный мозг) на полученном дВКМ. Изменение экспрессии компонентов секретома контролировали с помощью RT-qPCR и коллагеновой зимографии; применяя мультиплексный цитокиновый анализ, проверяли изменение секреторного профиля МСК. Собирали кондиционированную среду (CM) и использовали её в тесте заживления раны в культуре фибробластов 3T3 и кератиноцитов HaCaT, а также для лечения полнослойных кожных ран у мышей.

ВМСК, культивируемых на дВКМ, была обнаружена сильная апрегуляция MMP1, IL 8, GRO-α, CXCL5

иCXCL6. Коллагеновая зимография подтвердила повышенную регуляцию активной формы MMP1 в CM. Согласно результатам мультиплексного цитокинового анализа, в СМ также было сильно повышено содержание ряда компонентов секретома МСК (МСР 1, IL 6, IL 8, HGF, G-CSF, MIF и др.). CM от МСК, культивируемых на дВКМ, значительно улучшала заживление ран in vitro фибробластов 3T3 и кератиноцитов HaCaT, а также стимулировала заживление кожных ран у мышей по сравнению с CM от MСК, культивируемых на пластике.

Полученные результаты позволяют предположить, что культивирование МСК на дВКМ приводит к обогащению кондиционированной среды некоторыми биологически активными компонентами. Отметим, что улучшение заживления ран коррелировало со степенью активации хемокинов в ответ на дВКМ среди различных МСК. Апрегулированные паракринные факторы, обнаруженные в ходе исследования, известны своей мощной про-воспалитель- ной, хемотаксической, ангиогенной и ремоделирующей ткани активностью. Таким образом, культивирование МСК на дВКМ можно рассматривать как новый подход к пре-кондиционированию.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 22 74 10126 и внутреннего гранта Института цитологии 2023 г.

ВЛИЯНИЕ КЛАССИЧЕСКОГО РАЗОБЩИТЕЛЯ FCCP НА АНТИГЕН-ЗАВИСИМУЮ

АКТИВАЦИЮ КЛЕТОК ЛИНИИ RBL 2H3

Челомбитько М. А.1, Павлюченкова А. Н.1,2, Смирнов М. С.1,2

1Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского МГУ, г. Москва

2Факультет биоинженерии и биоинформатики МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: chelombitko@mail.bio.msu.ru

Тучные клетки (ТК) представляют собой важную популяцию клеток соединительной ткани, которая поддерживает ее гомеостаз. Широко известна роль ТК в развитии аллергических и воспалительных заболеваний. Одним из наиболееизученныхтиповактивацииТКявляетсяантиген-зависимаяактивация,осуществляемаяFcεRI-зависимым сигналингом. Известно, что применение классических разобщителей окислительного фосфорилирования и дыхания снижает уровень дегрануляции ТК. Однако их влияние на продукцию цитокинов ТК не изучено. В данной работе было исследовано воздействие классического разобщителя карбонилцианид 4-(трифторметокси)фенилгидразона (FCCP) на продукцию цитокинов ТК.

Исследование проводили на клетках базофильной лейкемии крыс RBL 2H3, являющихся общепринятой моделью ТК. Антиген-зависимую активацию клеток осуществляли путем их инкубации с мышиными моноклональными антителами изотипа IgE против динитрофенола с последующим добавлением антигена. Обработку клеток FCCP проводили в течение 2 часов перед стимуляцией антигеном. Уровень продукции цитокинов IL 4 и TNFα оценивали с помощью методов ПЦР в реальном времени и иммуноферментного анализа, уровень активации ключевых компонентов антиген-зависимого сигналинга исследовали методом вестерн-блот.

В ходе исследования было продемонстрировано, что обработка клеток RBL 2H3 разобщителем FCCP в концентрации 10 мкМ приводит к уменьшению не только уровня антиген-зависимой дегрануляции, но и продукции цитокинов TNFα и IL 4. Также было показано, что FCCP препятствует фосфорилированию адаптерной молекулы LAT и киназы Erk1/2, что может лежать в основе ингибирующего влияния разобщителя на антиген-зависимую активацию клеток.

Полученные данные свидетельствуют о том, что разобщение окислительного фосфорилирования и дыхания митохондрий с помощью разобщителей может использоваться для ингибирования не только антиген-зависимой дегрануляции ТК, но и продукции ими цитокинов, что может потенциально использоваться для лечения аллергических и воспалительных заболеваний.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 74 00081.

98

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ КЛОНОВ СТРОМАЛЬНЫХ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ

Шипунова И. Н.1,*, Савватеева Т. Ф.2, Дорофеева А. И.1

1ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, г. Москва 2 Московская школа на Юго-Западе № 1543, г. Москва

*e-mail: iranifontova@yandex.ru

Нормальное функционирование стволовых кроветворных клеток (СКК) в костном мозге (КМ) обеспечивается кроветворным микроокружением, состоящим из стромальных клеток, внеклеточного матрикса и растворимых факторов. Функционально in vitro выделяют следующие стромальные предшественники: мультипотентные мезенхимные стромальные клетки и их потомки, колониеобразующие единицы фибробластов (КОЕф). Оба типа способны дифференцироваться в костном, жировом и хрящевом направлениях и обладают достаточно высокой способностью к пролиферации.

Цель работы – функциональный​ анализ индивидуальных клонов КОЕф. Оценивали относительный уровень экспрессии (ОУЭ) некоторых генов в клонах с различным дифференцировочным потенциалом.

Было получено и проанализировано 292 индивидуальных клона КОЕф из образцов КМ 19 доноров, подписавших информированное согласие. Клетки каждого клона рассаживали на 3 ячейки: контроль, костная и жировая дифференцировки. Способность к дифференцировкам определяли по изменению ОУЭ генов FABP4 (жировая) и ALPL (костная дифференцировка) в клетках, подвергшихся индукции. Также в контрольных клетках клонов оценивали ОУЭ генов NES, IL10, ANGP1, KITLG, VCAM1, TGFB1, FGFR1, IL1b. Значимость различий определяли t-критерием Стьюдента или U-критерием Манна-Уитни. Достоверными считали различия при p <0,05.

Оказалось, что 19 % клонов бипотентны, 27 % – способны​ только к костной, 15 % – только​ к жировой дифференцировке. Треть (35 %) ответили на индукцию повышением экспрессии генов PPARG и/или PTHR1, но не FABP4

иALPL, а 4 % вовсе не отреагировали на индукторы дифференцировок. Все проанализированные клоны активно пролиферировали. Показано, что ОУЭ генов KITLG и FGFR1 повышен во всех клонах, способных к дифференцировкам, генов IL10 и VCAM1 – ​в клонах, способных дифференцироваться только в жировом направлении, что указывает на раннюю активацию регуляции васкуляризации жировой ткани. Достоверных отличий в ОУЭ генов ANGP1

иTGFB1 между субпопуляциями отмечено не было. ОУЭ генов NES иIL1b был наивысшим в клонах, которые отвечалинаиндукциюдифференцировки,нонеповышениемОУЭгеновFABP4 иALPL.Возможно,этопопуляцияболее ранних стромальных предшественников, которые представляют физиологический резерв.

Все клоны, способные к жировой и/или костной дифференцировкам, экспрессируют гены KITLG, FGFR1, ANGP1 и TGFB1, необходимые для поддержания СКК в состоянии покоя.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22 15 00018.

Симпозиум Тканевые барьеры и механизмы регуляции клеточного метаболизма

КЛЕТОЧНАЯ ВИЗУАЛИЗАЦИЯ В ОЦЕНКЕ ДЕЙСТВИЯ НИЛИ НА ФОНЕ СТРЕССА

Дерюгина А. В.*, Иващенко М. Н., Таламанова М. Н.

Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

* e-mail: derugina69@yandex.ru

Фотобиомодулирующее влияние низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на сегодняшний день базируется на большом клиническом материале, не всегда подкрепленном четко разработанным механизмом действия. При этом электромагнитная природа НИЛИ предполагает возможность его взаимодействия с множеством регуляторных механизмов в живых системах, роль которых изучена недостаточно. Для оценки действия НИЛИ в работе проведена интегральная оценка клеток крови методом интерференционной лазерной, электронно-сканирующей

исветовой микроскопий, позволяющих анализировать структуры клеток и их функциональную активность. Исследование проведено на высокопродуктивных коровах чёрно-пёстрой породы при действии НИЛИ (длина волны 830 нм) на фоне технологического стресса, который вызывает снижение адаптационных резервов организма, продуктивности и повышает восприимчивость животных к патогенам. Объектом исследования были нейтрофилы

иэритроциты как в экспериментах in vivo (действие НИЛИ на фоне стресса), так и in vitro (воздействие НИЛИ на фоне адреналина и кортизола – ​основных стресс-реализующих гормонов и факторов, влияющих на белок-липид- ные структуры мембраны и клеточную сигнализацию: глутаровый альдегид, блокаторы α- и β-адренорецепторов). Проведение интерференционной микроскопии нейтрофилов и эритроцитов показало изменение фазовых портретов

иморфологическиххарактеристикспоявлениемдегенеративно-изменённыхклетокпридействиитехнологического стресса с постепенным восстановлением структуры эритроцитов и перераспределением в пуле нейтрофилов с пре-

99

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

обладанием функционально-активных клеток при действии НИЛИ на животных в динамике исследования. Проведение электронной сканирующей микроскопии позволило выявить появление после технологического стресса НЕТозов и нейтрофилов с опустошенными гранулами и вакуолизацией цитоплазмы. Использование НИЛИ приводило к уменьшению НЕТозов. Результаты свидетельствуют о снижении клеточного звена неспецифической резистентности, ухудшении кислородтранспортной функции эритроцитов при технологическом стрессе и перестройке данных процессов при действии НИЛИ. Показано, что фотобиомодулирующее действие НИЛИ зависело от начального состояния биосистемы. Механизм действия НИЛИ на уровне клеток реализуется через различные регуляторные системы клеток, на уровне организма через отрицательную обратную связь, определяющую повышение устойчивости организма к факторам технологического стресса.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 26 00311.

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ СПЕРМАТОЗОИДОВ БЫКОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ МОЛЕКУЛЯРНОГО ВОДОРОДА

Иващенко М. Н.1,2*, Дерюгина А. В.2, Игнатьев П. С.2, Белов А. А.1,2, Ерзутов А. И.1

1 Нижегородский агротехнологический университет, г. Нижний Новгород 2 ННГУ имени Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

*e-mail: kafedra2577@mail.ru

В условиях широкого применения методик искусственного осеменения животных, поиск способов повышения устойчивости сперматозоидов к повреждающему действию низких температур становятся всё более значимым.

Молекулярный водород обладает мембраностабилизирующими, адаптогенными свойствами, является эффективным антиоксидантом, избирательно нейтрализующим высоко активный гидроксильный радикал. Химические и биологические характеристики молекулярного водорода позволили нам предположить его благоприятное влияние на качественные параметры спермы быков при замораживании/оттаивании.

Целью исследования явилось изучение влияния молекулярного водорода на функциональное состояние криоконсервированных сперматозоидов крупного рогатого скота.

Работупроводилинасперме,получаемойотбыковголштинскойпороды.Исследовалиобразцыспермы,разбавленные растворителем «BioXcell». Для криоконсервации опытных образцов использовали «BioXcell», разведенный на водородной воде. Для образцов спермы от этих же быков, выбранных в качестве контрольных, разбавитель готовили на обычной дистиллированной воде. После этого все образцы были законсервированы в жидком азоте.

Добавление молекулярного водорода в состав разбавителя для криоконсервации значительно улучшает подвижность сперматозоидов после оттаивания, жизнеспособность и целостность их мембран, снижает количество аномалий в морфологии сперматозоидов. Молекулярный водород изменяет интенсивность свободнорадикальных процессов, уменьшая уровень продуктов перекисного окисления липидов. Также наблюдалось увеличение антиоксидантных ресурсов путем увеличения активности каталазы.

Полученные данные свидетельствуют, о подавлении окислительного стресса и повышении фертильности спермы быков при использовании молекулярного водорода.

Финансовая поддержка: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23 26 00205.

ИЗМЕНЕНИЯ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ КОНТАКТОВ В ЛЕГКИХ КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ОБЛУЧЕНИЯ

Каретникова Е. С.*

Санкт-Петербургский государственный университет, г. Санкт-Петербург

*e-mail: e.karetnikova@spbu.ru

Рентгеновское облучение индуцирует профибротические процессы в легких. Основными структурными и функциональными компонентами легочной ткани являются альвеолярный, эндобронхиальный и эндотелиальный эпителии. Плотные и адгезионные контакты, как компоненты межклеточных соединений эпителиальных тканей, обеспечивают избирательную проницаемость и механическое соединение клеточных монослоев. Рентгеновское облучение индуцирует процессы эпителиально-мезенхимального перехода, проявляющиеся в снижении уровня основного белка адгезионных контактов Е-кадгерина (Almeida et al. 2013). На сегодняшний день данные о влиянии облучения на уровни белков плотных контактов эпителиев легких крайне ограничены. Целью исследования была оценка изменений уровней белков межклеточных контактов в легких в ранние сроки после рентгеновского облучения. Крысы Вистар были разделены на опытную и контрольную группы и облучены в дозах 10 и 0 Гр (ложное облученные), соответственно. Забор образцов легких для выполнения Вестерн блота и иммунофлюоресцентного окрашивания был выполнен через 72 часа после повреждающего воздействия.

Уровень Е-кадгерина был выше в легких крыс опытной группы, что свидетельствовало об отсутствии процессов эпителиально-мезенхимального перехода через трое суток после облучения. Сопоставление уровней белков

100

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/