2 курс / Нормальная физиология / XXIV_съезд_физиологического_общества_им_И_П_Павлова

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

культивировали в среде с 10 % сывороткой. Оценив деградацию РЭФР методом иммуноблоттинга, мы показали, что деградация РЭФР в клетках, которым не меняли среду, происходит быстрее, чем в клетках, которым меняли среду на среду с 10 % и 1 % сывороткой.

Таким образом, клетки энМСК показывают большую чувствительность к депривации сыворотки, чем опухолевые клетки HeLa. Смена среды также стимулирует в энМСК процесс аутофагии. В клетках энМСК депривация сыворотки и смена среды, стимулирующие процесс аутофагии, приводят к замедлению деградации РЭФР. Мы предполагаем, что скопление в клетках эМСК большого числа аутофагосом, требующих лизосомальной деградации, препятствует ЭФР-опосредованной деградации РЭФР в лизосомах, то есть аутофагосомы и эндосомы могут конкурировать за связывание с лизосомами. В дальнейшем мы будем учитывать эти особенности энМСК для исследования эндоцитоза и деградации РЭФР, а также постараемся выявить причины, по которым смена среды приводит к стимуляции аутофагии в этих клетках.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 14 00335.

УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МСК ЧЕЛОВЕКА В 2D И 3D КУЛЬТУРАХ

Кошелева Н. В.1,2*, Комякова М. Е.3, Ревокатова Д. П.1, Липина Т. В.4, Тимашев П. С.1,4

1 Научно-технологический парк биомедицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, г. Москва 2 ФГБНУ “НИИ общей патологии и патофизиологии”, г. Москва

3ФГБУ «НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» МЗ РФ, г. Москва 4 ФГБУ ВО МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: kosheleva_n_v@staff.sechenov.ru

Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) играют важную роль в формировании и регенерации тканей. МСК из различных источников и активно применяют в клеточной терапии, тканевой инженерии, регенеративной медицине. Ультраструктурные изменения клеток коррелируют с модуляцией их метаболической и физиологической активности. Целью данной работы стал анализ ультраструктуры МСК из различных источников при различных условиях культивирования.

МСК получали из слизистой оболочки ротовой полости и основного вещества пупочного канатика, культивировали в стандартных условиях – 37​ °C, 5 % СО2 в полной ростовой среде DMEM/F12 с глутамином (1:1), 50 мкг/мл гентамицина, инсулина-трансферрина-селенита (1:100), 20 нг/мл bFGF и 10 % FBS. В 2D условиях монослой 4 го пассажа получали на покровных стеклах. 3D культуры – ​сфероиды получали из 150 мкл суспензии с концентрацией 3×106 кл/мл за 7 сут на неадгезивных агарозных планшетах, сформированных при помощи 3D Petri. Стекла с клетками и сфероиды фиксировали в 4 % растворе глутарового альдегида (+4˚С, 12 ч), дофиксировали 1 % раствором OsO4 (1 ч), обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, заключали в эпон, получали ультратонкие срезы, которые контрастировали растворами уранилацетата и ацетата свинца по Рейнольдсу и анализировали с помощью просвечивающих электронных микроскопов JEM 100B и JEM-JEOL.

В2Dусловияхклеткиимелихарактерныйфибробластоподобныйфенотип,множествовыростовцитоплазматическоймембраны,крупноеядросоднимилинесколькимиядрышкамисмещенокодномуизполюсов.Митохондрии чаще локализовались возле эндолизосом и ядер, их размер и форма варьировали от небольших овальных до длинных вытянутых. В цитоплазме развит везикулярный компартмент, гранулярный ЭПР, волокна цитоскелета.

Клетки в сфероидах имели преимущественно округлую или овальную форму и меньший размер, ядра неправильной формы с выростами, лопастями и сегментацией, в околоядерной зоне встречалась первичная ресничка. Митохондрии в основном небольших размеров, круглой или овальной формы. В цитоплазме отсутствовали упорядоченныеволокнацитоскелета,субкомпартментплотныхэндолизосомбылпредставленбольше,чемв2Dусловиях, а мелкие субкортикальные везикулы встречались реже.

Таким образом, клетки 2D и 3D культур МСК человека имели ряд сходных с их общим происхождением черт ультраструктуры,ноприизмененииусловийкультивированияобладаливыраженнымиотличиями,обусловленными разной функциональной и метаболической и физиологической активностью.

Исследование поддержано Министерством науки и высшего образования Российской Федерации в рамках соглашения № 075 15 2021 596.

РОЛЬ ВОДНОГО КАНАЛА AQP4 В ПАТОГЕНЕЗЕ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА

Лапшина К. В.*, Екимова И. В.

Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, г. Санкт-Петербург

*e-mail: ksenia.lapshina@gmail.com

Нарушение фолдинга белка α-синуклеина и появление его посттрансляционных модификаций, способствующихагрегациииобразованиюнейротоксичныхолигомеров,играютключевуюрольвпатогенезеболезниПаркинсона

111

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

(БП) и других синуклеопатий. Заметным достижением последнего десятилетия стало формирование представлений о глимфатической системе (ГС), осуществляющей элиминацию из ткани головного мозга различных метаболитов, в том числе – амилоидогенных​ белков. Важным участником ГС является водный канал аквапорин 4 (AQP4), располагающийся на периваскулярных отростках астроцитов, и обеспечивающий двусторонний обмен жидкости между ликвором и паренхимой мозга (Iliff et al., 2012). Имеющиеся данные литературы позволяют полагать, что AQP4 вовлечен в патогенез БП: у пациентов с БП в ткани компактной части черной субстанции (кчЧС) обнаружено прогрессирующее накопление свободной воды, свидетельствующее о нарушении функционированияAQP4 (Ofori et al., 2015) и отмечена отрицательная корреляция между отложением α-синуклеина и экспрессией AQP4 в неокортексе (Hoshi et al., 2017). Введение фибрилл α-синуклеина в дорсальный стриатум и кчЧС нокаутированным по AQP4 мышамускорялонакоплениеα-синуклеинаинейродегенеративныйпроцессвкчЧС(Cuietal.,2021).Внашемиссле- довании было показано, что фармакологическое ингибирование AQP4 в лактацистиновой модели БП у крыс также приводиткпрогрессированиюнейродегенерациииα-синуклеиновойпатологиивнигростриатнойсистеме(Lapshina et al., 2022). Однако знания о конкретной роли AQP4 в механизмах накопления и элиминации α-синуклеина остаются недостаточными. Поскольку AQP4 является водоселективным каналом, то предполагается, что его дисфункция приведет к снижению эффективности водного обмена в головном мозге и нарушению работы ГС. Это может негативно сказаться на способности астроцитов и микроглиоцитов захватывать и разрушать α-синуклеин, привести к перегрузке внутриклеточных систем, удаляющих аберрантные белки, развитию нейровоспаления и других патологических процессов, усугубляющих α-синуклеиновую патологию и нейродегенеративный процесс. Изучение ролиAQP4 в обеспечении условий для качественной работы участников протеостаза и своевременной элиминации α-синуклеина представляется перспективным направлением, и может внести вклад в понимание функционирования защитных механизмов мозга при развитии синуклеопатий и других нейродегенеративных заболеваний.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 25 00607.

СТРЕПТОКОККОВАЯ АРГИНИНДЕИМИНАЗА НАРУШАЕТ МЕТАБОЛИЗМ И ПРИВОДИТ К АКТИВАЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК IN VITRO

Маммедова Д. Т.1,*, Соколов А. В.1, Бурова Л. А.1, Карасева А. Б.1, Горбунов Н. П.1, Малашичева А. Б.2, Семёнова Д. С.3, Старикова Э. А.1,4

1ФГБНУ «Институт Экспериментальной Медицины», г. Санкт-Петербург 2Институт Цитологии РАН, г. Санкт-Петербург

3ФГБУ «НМИЦ им. В. А. Алмазова» Минздрава России, г. Санкт-Петербург 4Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова, г. Санкт-Петербург

*e-mail: jennet_m@mail.ru

Эндотелиальные клетки являются активными участниками процесса воспаления. Изменение свойств эндотелия во время инфекции обеспечивает формирование лейкоцитарного инфильтрата и сдерживает распространение патогенов за счет регуляции коагуляции. Патогенные микробы способны воздействовать на эти функции эндотелия для выживания и диссеминации в организме хозяина. Бактериальная аргининдеиминаза (АДИ) гидролизирует аргинин, который играет ключевую роль в биологии эндотелия. Данное исследование было направлено на изучение влияния стрептококковой АДИ на эндотелиальные клетки вены пупочного канатика (HUVEC).

HUVEC выделяли по стандартной адаптированной методике (Baudin et al, 2007). Действие АДИ изучали путем сравнения эффекта исходного штамма Streptococcus pyogenes M49 16, экспрессирующего АДИ, и его изогенного мутанта M49 16delArcA с инактивированным геном ArcA. С использованием модифицированного метода Сакагучи оценивали концентрацию аргинина в надосадках HUVEC. С помощью иммуноферментного анализа исследовали продукцию IL 6. Путем окрашивания клеток флуоресцентным красителем Lysotracker DND 26А изучали активность аутофагии. Экспрессию фосфо-S6rp, фосфо-NF-κB p65, адгезионных молекул (CD62P, CD106, CD54, CD142), адгезивностьмонослояHUVECдлялейкоцитов,оценивалиспомощьюмоноклональныхантителипроточнойцитометрии. Нормальность распределения данных анализировали тестом Шапиро-Уилка. Оценку достоверности различий между выборками проводили методом однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), попарное сравнение средних значений производили post hoc тестом Тьюки.

Было установлено, что истощение аргинина в культуральной среде, вызванное активностью АДИ, приводило кподавлениюметаболическогокаскадаmTOR/S6Kиусиливалоаутофагию.Метаболическиеизменения,вызванные голоданием клеток, сопровождались развитием воспаления, повышением экспрессии фосфо-NF-κB p65, адгезионных молекул CD62P, CD106, CD54, CD142, продукции IL 6 и адгезивности эндотелия для лейкоцитов.

В работе были получены дополнительные доказательства важной роли аргинина в биологии эндотелия. Результаты исследования позволяют рассматривать бактериальную АДИ как фактор патогенности, который потенциально может изменять функции эндотелия при инфекции.

Финансоваяподдержка:грантРоссийскогоНаучногоФонда№ 22 25 20020иРегиональныйгрант(Санкт-Пе- тербургский Научный Фонд), соглашение № 46/2022 от 14.04.2022.

112

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЗВЕЗДЧАТЫХ КЛЕТОК ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ГИПЕРГЛИКЕМИИ

Мухлынина Е. А.1,*, Камаева В. Е.2, Семячкова У. Д.2, Султанова Т. Р.1

1Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург 2Уральский федеральный университет, г. Екатеринбург

*e-mail: elena.mukhlynina@yandex.ru

Топография и спектр продуцируемых веществ звездчатых клеток поджелудочной железы (PSC) предполагает их участие в обеспечении биомеханической и трофической функции, транскапиллярном обмене, регуляции тонуса сосудов и протоков. Они обнаруживаются в островках Лангерганса, отвечают на гипергликемию и гиперинсулинемию, способны влиять на процессы пролиферации, миграции и дифференцировки. Кроме того, PSC экспрессируют маркеры стволовых клеток, что позволяет рассматривать их в качестве источника восстановления эндокриноцитов. Все это обуславливает интерес к изучению PSC как компонента микроокружения, перспективного для разработки новых методов терапии панкреатических патологий.

ВнастоящемисследованиибылпроведенанализреакцииPSCнахроническуюгипергликемиюукрыс.Через30

и60 суток проводилась оценка тяжести течения диабета, содержания липидных включений (Oil Red O), экспрессии GFAP in vitro и in vivo, корреляции наблюдаемых изменений. При статистическом анализе данных использовали критерий Манна-Уитни, коэффициент Спирмена.

Моделирование сахарного диабета (СД) вызывает стойкую гипергликемию, снижение площади островков

исодержания β-клеток, экспрессии инсулина. Анализ популяции PSC указывает на значительное их преобладание в островковой части. При этом в ответ на длительную гипергликемию количество GFAP+ клеток и его экспрессия в ткани значимо снижается только в ацинарной части. Установлена высокая обратная зависимость количества GFAP+ звездчатых клеток и его экспрессии в ацинарной части от уровня глюкозы, в островках связь выражена слабее. Содержание липидных включений в PSC находится на высоком уровне и у здоровых животных, и в группе СД60, но не у животных группы СД30, и исключительно на ранних сроках культивирования. Причем звездчатые клетки группы СД60 теряют ретиноиды при культивировании гораздо активнее, чем клетки здоровых животных. Культивирование PSC вне зависимости от источника их получения изменяет их морфофункциональное состояние (увеличивается площадь ядра, снижается содержание липидных включений), что можно трактовать как признак их активации in vitro.

Обнаруженная обратная корреляция уровня глюкозы и экспрессии GFAP в PSC позволяет рассматривать его в качестве маркера тяжести течения диабета. Изменение содержание ретиноидов в PSC при гипергликемии носит фазныйхарактер.АктивацияPSC,полученныхоткрысстяжелойдлительнойгипергликемией,происходитбыстрее, чем клеток, полученных от здоровых животных.

ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСА АПОЛИПОПРОТЕИНА А-I С ТЕТРАГИДРОКОРТИЗОЛОМ НА БИОСИНТЕЗ БЕЛКА И ДНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА

Непша Т. А.*, Городецкая А. Ю., Мирошниченко С. М., Дударев А. Н., Усынин И. Ф.

Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины, Научноисследовательский институт биохимии, г. Новосибирск

*e-mail: vadanyata@mail.ru

Введение. Липопротеины высокой плотности (ЛПВП), помимо участия в обратном транспорте холестерина, оказываютрегуляторноевлияниенафункцииклетокразличныхоргановитканейорганизма.Регуляторныеэффекты ЛПВП связывают с наличием на поверхности липопротеиновой частицы белкового компонента – аполипопротеина​

А-I (апоА-I) (Усынин, Панин, 2008). Ранее с помощью инфракрасной Фурье-спектроскопии нами было показано, что инкубация апоА-I в присутствии тетрагидрокортизола (ТГК) приводит к изменению вторичной структуры белка. Учитывая эти факты, целью настоящей работы является исследование влияния ТГК на регуляторные свойства апоА-I в культуре клеток костного мозга.

Методы. Клетки костного мозга выделяли из бедренных костей крыс линии Wistar и культивировали в 24-лу- ночныхпланшетахвсредеRPMI 1640вСО2-инкубаторевтечение24ч.БиосинтезбелкаиДНКвклеткахоценивали по скорости включения радиоактивных предшественников [14C]-лейцина и [3Н]-тимидина, соответственно.

Результаты. Установлено, что культивирование клеток костного мозга в бессывороточной питательной среде сопровождается в течение 24 ч значительным снижением скорости включения [14С]-лейцина в белок и [3Н]-тимиди- на в ДНК. Добавление в культуральную среду апоА-I приводит к дозозависимому повышению скорости биосинтеза белка и ДНК. Еще более выраженное повышение этих показателей наблюдается при добавлении в культуральную средукомплексаапоА-IсТГК,которыйявляетсяметаболитомкортизола.Самкортизол,вотличиеотТГК,повышает скорость синтеза ДНК в клетках, но в комплексе с апоА-I снижает стимулирующее действие апоА-I. Обнаруженное разнонаправленное влияние кортизола и ТГК на регуляторные свойства апоА-I, вероятно, связано с особенностями

113

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

конформационных изменений в структуре апоА-I в процессе образования комплексов с этими гормонами. Действительно, с помощью метода тушения флуоресценции триптофана показано, что спектральные характеристики комплексов апоА-I–ТГК и апоА-I–кортизол существенно различаются.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что апоА-I является многофункциональным белком, выполняющим не только транспортные, но и важные регуляторные функции, что открывает перспективы для создания на его основе новых лекарственных препаратов, направленных на стимуляцию кроветворения в красном костном мозге.

Работа выполнена врамках выполнения государственного задания Министерства науки ивысшего образования РФ (1021050400914 1 1.6.4) с использованием оборудования ЦКП ФИЦ ФТМ «Спектрометрические измерения».

РОЛЬ БЕЛКОВ СИНАПТОТАГМИНОВ В МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ЭКЗОЭНДОЦИТОЗА ВЕЗИКУЛ

Нуруллин Л. Ф.1,2*, Волков Е. М.1,2

1Казанский институт биохимии и биофизики – обособленное​ структурное подразделение ФИЦ КазНЦ РАН, г. Казань

2Казанский государственный медицинский университет, г. Казань

*e-mail: leniz2001@yandex.ru

Приток ионов Ca2+ в цитоплазму во время потенциала действия, запускает слияние синаптических везикул с плазматической мембраной. Стадия слияния катализируется комплексом белков SNARE. Синаптотагмин 1, трансмембранный белок синаптических везикул, который связывает ионы Ca2+ посредством тандемных C2-доменов и передает Ca2+ чувствительность в SNARE-опосредованном слиянии везикул с мембраной. В нейронах синаптотагмин 1связываетвходCa2+ ссинхроннымосвобождениемсинаптическихвезикул.ВотсутствииCa2+ цитоплазматический домен синаптотагмина 1 замедляет скорость SNARE-опосредованного слияния везикул с мембраной и увеличивает частотуспонтанногоосвобождениянейромедиатора.Синаптотагмин 1действуетнетолькокакключевойсенсордля ионов Ca2+ в процессе быстрого синхронного экзоцитоза синаптических везикул, но он также участвует в эндоцитозе синаптических везикул. Синаптотагмин 1 взаимодействует с адаптерным белком клатрина (AP 2), предполагая роль синаптотагмина 1 в клатрин-опосредованном эндоцитозе и связывая таким образом слияние синаптических везикул с их восстановлением. В нервно-мышечном соединении дрозофилы острая инактивация функции синаптотагмина 1 также вызывает нарушение эндоцитоза синаптических пузырьков. В хромаффинных клетках надпочечников эндоцитоз в отсутствие синаптотагмина 1, переключается с Ca2+-зависимого на Ca2+-независимый механизм. Синаптотагмины 1 и 2 оба связываются с белками SNARE и фосфолипидами Ca2+-зависимым образом. Эти данные предполагают, что синаптотагмины 1 и 2 выполняют сходные функции. Синаптотагмин 2 восстанавливает фенотип дефицита синаптотагмина 1 в нейронах и хромаффинных клетках. Синаптотагмин 2, но не синаптотагмин 1, избирательно связывается с инозитолполифосфатазой. Синаптотагмин 7 ключевой Ca2+-чувствительный синаптический белок, который поддерживает асинхронный выброс нейротрансмиттера независимо от синаптотагмина 1.

Анализ литературы показывает, что иcследования молекулярных механизмов регуляции экзо-эндоцитозного цикла при участии синаптотагминов, на объектах, имеющих эволюционно-первичную двигательную мускулатуру, представлены крайне незначительно, что вызывает необходимость проведения дополнительных исследований по данной теме.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 24 00239.

АНТИМИКРОБНЫЙ ЭФФЕКТ ПРИМЕНЕНИЯ ПОСТОЯННОГО ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ТОКА В ОРТОПЕДИИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

Овчинников Е. Н.*, Дюрягина О. В., Стогов М. В.

ФГБУ «НМИЦ ТО имени академика Г. А. Илизарова» Минздрава России, г. Курган

*e-mail: omu00@list.ru

Применение, при лечениибольных сразличной ортопедической патологиейразличных имплантируемыхмеди- цинскихизделийповышаетрисквозникновенияимплант-ассоциированнойинфекции(Клюшинисоавт.,2020,2021. В связи с чем, растет число осложнений, возникающих на границе взаимодействия чужеродного для организма материала с тканями (аллергия, инфицирование, остеолиз, металлоз). Одним из практических направлений в исследованиях является получение антимикробных характеристик поверхностей имплантируемых изделий. Возможный вариант снижения числа инфицирований, связанных с имплантацией медицинских изделий в практике травматологии и ортопедии, по нашему мнению, это применение постоянного электрического тока. Можно полагать, что такое воздействие может обладать антимикробными свойствами (Venkata et al., 2020).

Цель исследования – р​азработка приемов профилактики и лечения хронической имплант-ассоциированной инфекции.

114

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Методы исследования – ​исследование было проведено по двум направлениям: in vitro и in vivо. прижизненные наблюдения, рентгенологический, морфологический, гематологический, биохимический методы исследования.

Результаты. Исследование in vitro показало, что использование имплантируемых металлических медицинских изделий в качестве электродов вызывает антимикробный эффект по отношению к различным патогенным микроорганизмам. При этом обнаружено, что величина такого эффекта зависит от времени экспозиции и вида микроорганизма. Определен оптимальный режим воздействия постоянного электрического тока на культуры патогенной микрофлоры равный 150 мкА в течение 2 3 минут. В экспериментах in vitro во всех группах животных при введении в костномозговой канал патогенной микрофлоры был получен хронический остеомиелит.

Применение постоянного электрического тока электровоздействия снижает развитие септического процесса в кости и оказывает стимулирующий эффект на остеогенез в ранние сроки проведения.

Финансовая поддержка: государственное задание Министерства здравоохранения Российской Федерации № АААА-А 18 118011190122 5.

ОЦЕНКА МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ГИДРОГЕЛЯ НА ОСНОВЕ ДЕЦЕЛЛЮЛИРОВАННОГО МАТРИКСА У МЫШЕЙ ЛИНИИ C57BL/6 ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ

Першин В. И.1,2*, Иванова В. О.1,2, Кирпичева А. С.1, Мухина И. В.1,2

1ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России, г. Нижний Новгород 2Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

*e-mail: bp1995@yandex.ru

Внеклеточный матрикс мозга (ВКМ) является важной структурой, обеспечивающей функционирование клеток мозга и синаптическую пластичность. Предполагается, что ВКМ головного мозга сможет обеспечить репарацию тканей и функциональное восстановление тканей мозга после черепно-мозговой травмы (ЧМТ).

Цель исследования: оценка влияния гидрогеля на основе децеллюлированного ВКМ минипига на изменение клеточного фенотипа ткани мозга мышей при моделировании ЧМТ.

Моделирование черепно-мозговой травмы осуществляли по методике (Ма и соавт., 2019) с использованием свободно падающего груза на оболочку мозга, освобожденную от костей черепа. Приготовление гидрогеля на основе децеллюлированного матрикса мозга выполняли по методике (Simsa et al., 2021) с использованием детер- гентно-энзиматического подхода. Анализ морфо-функциональных характеристик ткани мозга осуществляли на 7 и 30 сутки после введения гидрогеля. Анализ биосовместимости осуществлялся путем мультиплексного анализа с использованием набора Mouse Cyt Bio-Plex Pro Mouse Cytokine 23-plex (Bio-Rad) спустя 3 суток после введения гидрогеля. Оценка изменения неврологического статуса и поведенческого фенотипа выполнялась с применением тестов: УРПИ, открытое поле, ротарод. Оценка морфологических изменений выполнялась с применением иммуногистохимического окрашивания против белков нестина, даблекортина, МАР 2, Iba1, СD206, ТНФ-α. Достоверность различий между группами определялась с использованием критерия Краскелла-Уоллиса при p<0,05.

Показано, что инъекции гидрогеля на основе децеллюлированного матрикса не вызвала достоверных отличий в уровне провоспалительных цитокинов (ТНФ-α, ИЛ 6, ИЛ 1β) в сравнении с контрольной группой с инъекцией натрий-фосфатного буфера, восстанавливала показатели двигательной и исследовательской активности, обучения на 30 сутки посттравматического периода.

Таким образом, гидрогель на основе децеллюлированного матрикса мозга не обладает иммуногенными свойствами, но оказывает потенциального восстановительное действие на поведенческую активность мышей при внутрицеребральном введении в условиях модели ЧМТ.

Финансовая поддержка: государственное задание МЗ РФ № 121030100282 6.

ВЛИЯНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ВЕЗИКУЛ МСК НА АНГИОГЕНЕЗ И МИГРАЦИЮ КЛЕТОК

Пешкова М. А.1,2*, Ревокатова Д. П.2, Смирнова О. А.2, Кошелева Н. В.2,3, Шпичка А. И.2,4, Тимашев П.С1,2,4,5.

1Научный центр мирового уровня «Цифровой биодизайн и персонализированное здравоохранение», ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России, г. Москва

2 Институт регенеративной медицины, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, г. Москва 3 ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», г. Москва 4 Химический факультет, МГУ имени М. В. Ломоносова, г. Москва

5 Научно-технологический парк биомедицины, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, г. Москва

*e-mail: peshkova_m_a@staff.sechenov.ru

Внеклеточные везикулы играют важную роль в межклеточной коммуникации и привлекают все большее вниманиеисследователейблагодарясвоемутераностическомупотенциалу.Хотябольшинствоисследованийсосредото-

115

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

чено на изучении внеклеточных везикул из биологических жидкостей и кондиционированных сред, существует ряд работ, направленных на изучение везикул, прикрепленных к внеклеточному матриксу, таких как матриксные везикулы, обнаруженные в хрящевой и костной тканях, и матрикс-связанные везикулы (МСВ), связанные с матриксом в мягких тканях. Предыдущие исследования неоднократно демонстрировали благотворное влияние внеклеточных везикул из кондиционированных сред на миграцию клеток и ангиогенез, однако ранее не проводили сравнительного анализа свойств и физиологической активности внеклеточных везикул из кондиционированной среды и матрикса одной и той же культуры клеток, чему посвящено данное исследование.

Внеклеточные везикулы получали из кондиционированной среды и из матрикса культур МСК пупочного канатика человека, характеризовали методами динамического светорассеяния и просвечивающей электронной микроскопии. Оценку влияния везикул на клеточную миграцию проводили в культуре кератиноцитов HaCaT в тесте «царапина». Ангиогенный потенциал везикул оценивали по формированию тубул сфероидами из клеток эндотелия пупочной вены (HUVEC) и МСК (1:1), инкапсулированных в ПЭГилированном фибриновом гидрогеле.

Везикулы, полученные как из кондиционированной среды, так и из матрикса, значительно усиливали миграцию кератиноцитов в область раневого дефекта-царапины по сравнению с контрольной группой и способствовали его полному закрытию в течение 24 часов. Оба типа везикул способствовали образованию более разветвленной и длинной сети тубул сфероидами HUVEC МСК, инкапсулированными в гидрогеле, по сравнению с контрольной группой за 3 сут. На 7 сут. в экспериментальной группе с МСВ общая площадь тубул больше, чем в других группах, что свидетельствует о повышенном ангиогенном потенциале МСВ.

Внеклеточныевезикулы,полученныеизкондиционированнойсредыиматриксаоднойитойжекультурыМСК, способнывравнойстепениусиливатьмиграциюклеток.Приэтомангиогенныйпотенциалматрикс-связанныхвези- кул выше,чемувезикул,полученныхиз кондиционированнойсреды,чтоявляетсяперспективнымдля дальнейшего использования в решении проблемы васкуляризации тканеинженерных конструктов.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 22 75 10120.

ДЕЙСТВИЕ БЛОКАТОРОВ ТРАНСПОРТЕРОВ НА ЭПИЛЕПТИФОРМНУЮ АКТИВНОСТЬ И КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ ХЛОРА И ВОДОРОДА В НЕЙРОНАХ СРЕЗОВ ГИППОКАМПА

Пономарева Д. Н.1,3*, Полякова А. П.2, Петухова Е. О.1, Брежестовский П. Д.1,3

1Институт нейронаук, Казанский государственный медицинский университет, г. Казань 2Центр исследований молекулярных механизмов старения и возрастных заболеваний, Московский физико-

технический институт, г. Долгопрудный 3 Институт системных нейронаук, Университет Экс-Марсель, г. Марсель, Франция

*e-mail: Ponomareva_DN@mail.ru

Ионный гомеостаз является важным фактором, обеспечивающим жизнедеятельность организмов. Одним из первых признаков измененного ионного гомеостаза при патологиях является нарушение концентраций ионов хлора (Cl–) и водорода (Н+), которые приводят к нарушению баланса между возбуждением и торможением в нейронных сетях и возникновению эпилептиформной активности. Из-за важности градиентов Cl– и Н+ для функционирования клеток нервной системы, гомеостаз этих ионов строго контролируется. Ключевыми молекулами в регуляции внутриклеточной концентрации Cl– являются транспортеры NKCC1 и KCC2, обеспечивающие перекачку ионов Cl– в нейронах, а также семейства ферментов, карбоангидраз, регулирующие рН клеток.

Целью работы является анализ роли транспортёров KCC2 и NKCC1, а также карбоксиангидраз (КА) в регуляции ионов Cl– и Н+ в норме и модели эпилепсии in vitro. Эксперименты проводили на срезах гиппокампа трансгенных мышей экспрессирующих нейрональный биосенсор Cl– и Н+ (ClopHensor). Оценивали влияние блокаторов транспортеров KCC2 (VU0240551) и NKCC1 (буметанид), а также блокатора карбоксиангидраз (этоксзоламид) на базовые концентрации ионов Cl– и Н+, на их изменение при высокочастотной электрической стимуляции коллатера- лейШаффера,атакженаэпилептиформнуюактивностьв4-аминопиридиновой(4-АР)моделиэпилепсии.Регистра- цию изменений внутриклеточной концентрации ионов хлора проводили от популяции нейронов, обеспечивающих оценку средних значений, в дальнейшем обозначаемых как [Cl–]ср.

В контрольных условиях, [Cl–]ср в нейронах пирамидного слоя в разных срезах варьировала от 10 до 19 мМ, в среднем 12.6±0.7 mM (n=13). Блокатор KCC2 (VU0240551) в концентрациях 10 и 20 мкМ, соответственно, повы-

шал [Cl–]ср на 0.2±0.02 мМ (n=6) и на на 0.28±0.01 мM (n=4). Буметанид (10 мкM), блокатор транспортера NKCC1,

снижал [Cl–]ср на 0.48±0.05 мМ (n=10). При добавлении блокаторов, время восстановления [Cl–]ср после высокочастотной электрической стимуляции коллатералей Шаффера достоверно не менялось. Блокатор КА, этоксзоламид, в концентрациях 100 и 300 мкМ вызывал закисление, соответственно, на 0.04 и 0.07 единиц рН, при этом [Cl–]ср достовернонеизменялась.Впредварительныхэкспериментахбуметанид,блокатортранспортераNKCC1 (10,30и200 мкМ) достоверно не изменял эпилептиформную активность в 4-АР модели эпилепсии. Блокатор КА, этоксзоламид (300 мкМ) обратимо ингибировал спонтанную и вызванную эпилептиформную активность в срезах гиппокампа трансгенных мышей.

116

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С БИОГЕНЕЗОМ МИТОХОНДРИЙ, В МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА У БОЛЬНЫХ В ДЕБЮТЕ ОСТРОГО МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА И ПОСЛЕ ДОСТИЖЕНИЯ РЕМИССИИ

Садовская А. В.1,2*, Петинати Н. А.1, Дризе Н. И.1, Васильева А. Н.1, Алешина О. А.1, Паровичникова Е. Н.1

1Национальный медицинский исследовательский центр гематологии Минздрава России, г. Москва 2Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова, биологический факультет, г. Москва

*e-mail: sadovskaya.sasha@gmail.com

У больных острым лейкозом (ОЛ) изменены мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК), необходимые для поддержания нормального кроветворения. Митохондрии играют центральную роль в клеточной биоэнергетике, биосинтезе и апоптозе. Анализ их метаболизма в МСК пациентов важен для понимания функционирования стромальных клеток при ОЛ.

Цель работы – ​оценить относительноеколичество и функциональную активностьмитохондрий в МСК больных с ОЛ.

МСК выделяли из 3 5 мл костного мозга (КМ), полученного после подписания информированного согласия. КМпациентовполучаливмоментдиагностическихпункций.КМдоноровполучалиприэксфузиидлятрансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

Для исследования физиологического статуса МСК анализировали соотношение числа копий митохондриальной ДНК (мтДНК) и ядерной ДНК (яДНК) с помощью мультиплексной ПЦР в реальном времени в МСК 59 доноров

и34 больных ОЛ (12 острым лимфобластным лейкозом и 21 острым миелоидным лейкозом) в дебюте заболевания

ипри достижении ремиссии. Изучали относительный уровень экспрессии (ОУЭ) генов, участвующих в регуляции митохондриального метаболизма – PGC1A​и NFE2L2.

Соотношение мтДНК и яДНК в МСК доноров и пациентов не различалось.

Не было выявлено достоверных различий в экспрессии PGC1Aмежду МСК доноров и больных в дебюте заболевания и после достижения ремиссии. Ген PGC1A играет центральную роль в регуляторной сети митохондриального биогенеза и дыхательной функции. Это свидетельствует о сохранении физиологической функции поддержания биогенеза митохондрий в МСК больных без существенных изменений.

ОУЭ NFE2L2, кодирующего фактор транскрипции Nrf2, уменьшается в дебюте заболевания и достоверно по сравнениюсдонорамиснижаетсяподостиженииремиссии.Nrf2напрямуюактивируетмитохондриальныефакторы транскрипции и участвует в системе контроля качества митохондрий. В том числе Nrf2 – ​один из основных активаторов системы антиоксидантного ответа клетки. Снижение ОУЭ NFE2L2 может приводить к изменениям в системе митохондриального дыхания и биоэнергетике МСК, пострадавших от химиотерапии. Хотя количество и основной биогенезмитохондрийМСКнеизменяютсяприОЛ,существуютфункциональныеизменения,которыемогутвлиять на способность стромы костного мозга поддерживать кроветворение. Антиоксиданты, вероятно, могут улучшить функцию МСК в период ремиссии.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22 15 00018.

ВРЕМЕННАЯ ЗАВИСИМОСТЬ ЭФФЕКТА КАРБАХОЛИНА НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЫ МИОЦИТОВ

Токмакова А. Р.1,*, Сибгатуллина Г. В.1, Маломуж А. И.1,2

1Казанский институт биофизики и биохимии федерального исследовательского центра «Казанский научный центр Российской академии наук», г. Казань

2Казанский национальный исследовательский технический университет им. А. Н. Туполева – КАИ​ , г. Казань

*e-mail: annna.tok.@gmail.com

Ацетилхолин – основной​ медиатор в периферической нервной системе, где он, в частности, опосредует нейротрансмиссию в нервно-мышечном контакте. Ацетилхолин не только передаёт возбуждение с нерва на мышцу, но и оказывает так называемое «трофическое» влияние, проявляющееся в поддержании ряда морфо-функциональных свойств мембраны, характерной для зрелого иннервированного мышечного волокна. Недавно было установлено, что ацетилхолин в наномолярных концентрациях способен оказывать трофотропный эффект на эксплантаты ткани скелетной мышцы куриных эмбрионов (Lopatina et al., 2023). Однако влияет ли ацетилхолин на развивающуюся мышечную ткань у млекопитающих на самой ранней стадии онтогенеза (на стадии пролиферации миоцитов) до сих пор оставалось не выясненным. В связи с этим, целью настоящего исследования стала оценка влияния холиномиметика карбахолина (КХ, негидролизуемого аналога ацетилхолина) на пролиферацию первичной культуры миоцитов крысы.

Пролиферацию оценивали по подсчету митотического индекса (МИ) культуры, зафиксированной через 3 и 6 ч после высаживания. Внесение КХ (106 М, 108 М и 1010 М) осуществляли сразу после посева культуры. Для оценки МИ клетки окрашивали 2 % орсеином и фотографировали на камеру Leica DIM ILLED.

117

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

Было установлено, что контрольное значение МИ культуры миоцитов через 3 ч культивирования составляет 13,8 %. В течение последующих 3 ч МИ падает на треть. В первые 3 часа культивирования присутствие в среде КХ

всамойнизкойконцентрации(1010М)оказывалостимулирующийэффектнапролиферацию,тогдакакхолиномиметик в более высоких концентрациях подобным эффектом не обладал. При шестичасовой инкубации культуры с КХ наблюдалось более выраженное увеличение МИ. При этом прослеживалась определенная дозо-зависимость – ​чем выше концентрация КХ, тем более ярко выражен эффект. В этой временной точке относительно контроля МИ повысился на 71,3 %, на 53,7 % и на 31,0 % при использовании КХ в концентрациях 106 М, 108 М и 1010 М, соответственно.

Таким образом, нами было установлено, что уровень пролиферации первичной культуры миоцитов млекопитающего значительно варьирует даже в пределах небольшого срока культивирования (до 6 часов). При этом холиномиметик способен оказывать стимулирующее влияние на процесс деления миоцитов, однако эффективность данного влияния может проявляться как в микромолярной концентрации, так и в концентрации ниже 1 нмоль/л,

взависимости от времени воздействия.

ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ ВЕЗИКУЛЫ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ОКАЗЫВАЮТ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЧЕРЕЗ МОДУЛЯЦИЮ PI3K/AKT СИГНАЛЬНОГО ПУТИ

Туровский Е. А.1, Варламова Е. Г.1, Буров А. А.2, Горюнов К. В.2, Шевцова Ю. А.2, Плотников Е. Ю.2, Силачев Д. Н.2*

1Институт биофизики клетки Российской академии наук «Федеральный исследовательский центр «Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук», г. Пущино

2Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства гинекологии и перинаталогии

имени В. А. Кулакова» Минздрава России, г. Москва

*e-mail: silachevdn@genebee.msu.ru

Изучение мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) и их потенциала для терапевтического применения представляет значительный интерес в области медицины. Относительно недавно поменялась парадигма терапевтического использования ММСК. Было показано, что секретируемые ММСК внеклеточные вези- кулы(ВВ)(экто-иэкзосомы)обладаюттерапевтическимиэффектамиММСКимогутиспользоватьсякакотдельный вид терапии. ВВ являются одним из основных элементов внеклеточной среды, влияющих на физиологию клеток микроокружения,посредствомпереносабиологическихактивныхмолекул,такихкакбелки,липидыинуклеиновые кислоты (ДНК, мРНК, микроРНК). Однако механизмы, лежащие в основе нейропротективного действия ВВ изучены недостаточно. В этом исследовании мы изучали нейропротекторные механизмы ММСК-ВВ.

Мы использовали модели in vivo и in vitro для изучения нейропротекторных эффектов ММСК-ВВ. В моделях черепно-мозговой травмы головного мозга и неонатальной гипоксии/ишемии было показано, что курсовое интраназальное введение ВВ восстанавливает сенсомоторные функции головного мозга, а также замедляет последующее прогрессирование повреждения ткани головного мозга. Демонстрация нейропротекторных эффектов ВВ на животных моделях послужила веским основанием для дальнейшего изучения основных механизмов, исследования in vitro стали ценным инструментом для определения молекулярных и клеточных механизмов, ответственных за наблюдаемые эффекты. Мы использовали первичную нейроглиальную культуру и моделировали кислородно-глю- козную депривацию (ОГД). Было показано, что в модели ОГД, ММСК-ВВ предотвращали кальциевую перегрузку и последующую гибель клеток, как астроцитов, так и нейронов. Тогда как добавление ингибиторов PI3K/AKT сигнальногопутиотменялонейропртекторныеэффектыВВ.Такжемынаблюдалифеномен,чтовнейроглиальнойкультуре ММСК-ВВиндуцировали кальциевые осцилляции в астроцитах,связанныес рецептором инозитолтрифосфата (IP3).Наличиекальциевыхосцилляциймысвязываемспоследующимэффектомустойчивостикперегрузкекальцием не только в астроцитах, но и в совместно культивируемых нейронах. Наши результаты показывают, что передача сигналовчерезPI3K/AKTявляетсяоднимизосновныхпутейвММСК-ВВ-опосредованнойзащитенервныхклеток, подвергающихся ишемическому воздействию. Компоненты этого пути были идентифицированы среди наиболее обогащенных категорий в протеоме ММСК-ВВ.

В целом, данное исследование подчеркивает потенциал ММСК-ВВ в качестве многообещающей терапии острых патологических состояний головного мозга и дает представление о молекулярных механизмах, лежащих в основе их защитных эффектов в нервных клетках.

Работа выполнена при финансовой поддержке государственного задания № 121032500125 6.

118

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ ПАРАМЕТРАМИ ФИЗИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ СТУДЕНТОВ И ЧАСТОТОЙ ПОТРЕБЛЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

Ханферьян Р. А.*, Гейко Е. Г., Снегирева Т. Г., Скальный В. В., Косцова Н. Г., Колинько Н. Г., Радыш И. В.

ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы», г. Москва

*e-mail:khanfer1949@gmail.com

Введение. Молоко и молочные продукты являются важным компонентом сбалансированного рациона питания. Дефицит молока и молочных продуктов питания способствует нарушению основных показателей физического здоровья различных возрастных групп населения. Целью настоящего исследования являлся анализ частоты потребления различных групп молочных продуктов студентами

Методы исследования. В исследовании приняло участие 388 студентов медицинского института РУДН (185 мужского и 203 женского пола, средний возраст был 20,4+2,2 и 21,9+1,7 лет, соответственно). Частоту потребления различныхгруппмолочныхпродуктовизучалиспомощьюмодифицированнойанкетычастотногопотребленияпродуктов.

Результаты. Анкетированием установлено, что около 16 % опрошенных практические не употребляли молоко, примерно треть – ​творог, 22 % – ​натуральные кисломолочные продукты и 18 % – ​кисломолочные продукты с различными наполнителями; сыры твердых сортов и рассольные сыры не употребляет 9 % и 26 % респондентов, соответственно. Ежедневно пьют молоко 11 % анкетируемых, 5 % ежедневно употребляют творог, 4 % и 1 % – ​кисломолоч- ные продукты, натуральные и с наполнителями, твердый сыр –4 %. Выявлены гендерные различия в особенностях потребительских предпочтений. Студентки реже употребляют сливки, сметану, мягкий сыр, молоко. Исследование антропометрических параметров показало, что среди девушек распространенность лиц с избыточной массой тела была выше и составила 25 % (n=50), чем среди юношей – 19​ % (n=35). Выявлена обратная умеренная связь между ежедневным употреблением молока и массой тела и между употреблением молока и индексом массы тела (ИМТ), (r= –0,61 и r= –0,65, соответственно). Среди юношей не было отмечено студентов со сниженной массой тела, однако доля девушек с ИМТ менее 18 находилась на уровне 5 % (n=10)

Заключение. Среди студентов выявлено недостаточное потребление молока и молочных продуктов, отмечена взаимосвязь между частотой их потребления и некоторыми показателями физического развития.

ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ НА АКТИВАЦИЮ ФАКТОРА Х КОМПЛЕКСОМ ВНУТРЕННЕЙ ТЕНАЗЫ

Чабин И. А.1,*, Подоплелова Н. А.1,2, Пантелеев М. А.1,2,3

1ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, г. Москва 2ФГБУН Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, г. Москва

3Физический факультет МГУ им. М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: i. a.chabin@ya.ru

Эриптоз – запрограммированная​ гибель эритроцитов интенсивно изучается в течение последних десятилетий. Основными признаками эриптоза принято выделять нарушение асимметрии мембраны (выставление фосфатидилсерина (ФС)), сморщивание клетки и везикуляцию. Но его механизмы остаются до конца неизученными. Считается, чторядзаболеванийассоциировансусиленнымэриптозом,например,эритроцитопатии,почечнаянедостаточность, сахарный диабет, и они же сопряжены с риском тромбоза. В этой работе мы исследовали возможность эриптотических эритроцитов поддерживать активацию фактора Х комплексом факторов VIIIa и IXa (внутренней теназой) как пример мембранно-зависимой реакции свёртывания крови.

Эритроциты были выделены из цельной крови посредством центрифугирования и последующим отмывание. Письменное информирование согласие было получено от всех здоровых доноров. Эриптоз эритроцитов стимулировался при помощи PMAили кальциевого ионофораA23187. Для детекции ФС на поверхности эритроцитов использовалась проточная цитометрия с аннексином V-AF647, и/или с C2-фрагментом лактадхерина. Для характеризации работы внутренней теназы смесь факторов (VIIIa, IXa и X) инкубировалась в течение 2 минут, после чего активация останавливалась добавлением ЭДТА. Количество наработанного Xa определялось по расщеплению S 2765.

При стимуляции эриптоза детектированы два типа эриптотических эритроцитов – те​ , которые связывали только лактадхерин (более чувствительный маркер ФС) (Лдх+Анн-), и те, которые связывали и лактадхерин, и аннексин V (Лдх+Анн+). Причём, процент первых уменьшался, а вторых рос со временем (суммарный процент обоих субпопуляций оставался стабильным). В тесте активации фактора X эти типы эритроцитов имели разную активность в пе- ресчётенаоднуклетку,активностьЛдх+Анн-былав10разменьше,чемактивностьЛдх+Анн+.Активностьвтаком же тесте одного аннексин-положительного тромбоцита была всего в 2 раза больше, чем активность Лдх+Аннэри- троцита.

Для оценки эриптотических эритроцитов и их описания необходимо совместное использование лактадхерина и аннексина в цитометрических тестах. Эритроциты способны поддерживать мембранно-зависимые реакции свёр-

119

XXIV съезд физиологического общества им. И. П. Павлова

тывания крови с активностью, как минимум, сравнимой с активностью прокоагулянтных тромбоцитов. Принимая во внимание большое количество эритроцитов в кровотоке, необходимо учитывать их вклад в общий потенциал поддержания мембранно-зависимых реакций свёртывания крови.

Финансовая поддержка: фонд «Наука – ​детям».

ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫЕ И СЕНОМОРФИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИТОХОНДРИАЛЬНО-НАПРАВЛЕННОГО АНТИОКСИДАНТА SKQBERB В МОДЕЛИ ХРОНОЛОГИЧЕСКОГО СТАРЕНИЯ МИОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА MB135

Челомбитько М. А.1*, Моргунова Г. В.2, Строчкова Н. Ю.2, Лямзаев К. Г.1

1Российский геронтологический научно-клинический центр, ФГАОУ ВО РНИМУ имени Н. И. Пирогова Минздрава России, г. Москва

2Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, г. Москва

*e-mail: chelombitko_ma@rgnkc.ru

Важную роль в старении организма играет старение клеток (cell senescence), одним из проявлений которого является развитие ассоциированного со старением секреторного фенотипа (SASP). Для продления жизни модельным животным в настоящее время предлагается использовать сенолитические и сеноморфические препараты, которые избирательно убивают клетки с SASP или уменьшают его проявление. Ранее было показано, что митохондриаль- но-направленные соединения проявляют геропротекторные свойства в моделях in vitro и in vivo. SkQBerb на основе берберина и пластохинона может обладать более высоким геропротекторным потенциалом по сравнению с ранее исследуемыми митохондриально-направленными соединениями. В данной работе мы изучили геропротекторные и сеноморфические свойства SkQBerb.

Исследование проводили на нормальных иммортализованных миобластах человека MB135. Клетки культивировали с добавлением SkQBerb в концентрациях 4 нM, 20 нM и 100 нM. Через 1 и 4 недели проводили выявление ассоциированной со старением β-галактозидазы (β-гал) и определение концентрации провоспалительных цитокинов ИЛ 6 и ИЛ 8, а также оценку содержания белков p21, pRb, LC3I и LC3II.

В4-недельнойкультурепроявиласьокраскаβ-гал(60 %клеток),увеличиласьпосравнениюс1-недельнойкуль- турой концентрация провоспалительных цитокинов ИЛ 6 и ИЛ 8 в среде культивирования, повысилось содержание p21, снизилось соотношение LC3II/LC3I и содержание pRb. Это свидетельствуют о появлении признаков старения клеток и SASP. Обработка клеток SkQBerb в концентрации 20 нM приводила к двукратному снижению процента β-гал-положительных клеток и снижению содержания цитокинов ИЛ 6 и ИЛ 8. Таким образом, результаты нашей работы указывают на потенциальные геропротекторный и сеноморфический эффекты SkQBerb.

Финансовая поддержка: грант Российского научного фонда № 23 14 00061.

ВЛИЯНИЕ ПРОБИОТИКА НА ПОВЕДЕНИЕ И ИММУННЫЙ СТАТУС МЫШЕЙ С АНТИБИОТИК-ИНДУЦИРОВАННЫМ ДИСБАКТЕРИОЗОМ

Чернова М. А.1*, Коломина Е. С.1, Васильева Е. А.1,2, Щелчкова Н. А.1,2, Кузьмина Д. М.1,2, Мухина И. В.1,2

1Приволжский исследовательский медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Нижний Новгород

2Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского, г. Нижний Новгород

*e-mail: masha 200013@bk.ru

Микробиомкишечникаоказываетбольшоевлияниенафункционированиеорганизма.Особыйинтересвызывает восходящее воздействие микробиома на центральную нервную систему, которое может проявляться изменением поведения. Кроме того, кишечные бактерии способны взаимодействовать с иммунной системой организма и модулировать защитные реакции.

Цель исследования: изучить влияние введения комплексного пробиотика на поведение и иммунный статус мышей на фоне антибиотик-индуцированного дисбактериоза.

Материалы и методы. Моделирование кишечного дисбактериоза (Xu и др., 2021) осуществлялось заменой питьевой воды на водный коктейль антибиотиков широкого спектра действия (Chu и др., 2019) в течение 2 недель. Поведенческое фенотипирование животных выполнялось после 4 недель лечения пробиотиком на фоне продолжающейся антибиотикотерапии (спустя 6 недель с начала эксперимента). Для изучения поведения и когнитивных функций животных использовались тесты: объектное распознавание, пространственное ориентирование в Т-образ- ном лабиринте, тест «Угасание страха», формирование условного рефлекса пассивного избегания. Определение в сыворотке крови показателей иммунного статуса проводилось методом мультиплексного анализа. В работе использовалсякоммерческийнабордляопределенияцитокиновмышейикрысBio-PlexProCytokine,Chemokine,and Growth Factor (Bio-Rad, USA). Полученные c помощью мультиплексного флуоресцентного анализатора MAGPIX Merсk (Millipore, США) результаты обрабатывались с помощью пакета прикладных программ Statistica 10. Досто-

120

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/