2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микробиология от Насти

1.Материал обрабатывают 15% раствором кислоты (H2SO4), центрифугируют, отмывают физиологическим раствором и засевают, втирая, на плотные питательные среды (Левенштейна – Йенсена, среда Финна II). Инкубируют при 37С при содержание СО2 5-10%. от 2 до 8 недель. Минимальный срок инкубации 8 недель.

2.Метод микрокультур Прайса. На предметных стеклах делают толстые мазки, высушивают обрабатывают несколько минут в 2- 6% Н2SO4 и нейтрализуют. Погружают в о флаконы с гемолизированной цитратной кровью, инкубируют 7-14 дней.

Изучение морфологии выросших колоний:

1.На среде Левенштейна – Йенсена – светлокремовые сухие, морщинистые, крошковатые, приподнятые над поверхностью среды колонии с приятным запахом. Бактериоскопия по Цилю – Нильсену выявляет красные кислотоустойчивые палочки или ганулы (зерна Муха).

2.По Прайсу: предметные стекла с выросшей культурой фиксируют, окрашивают по Цилю – Нильсена, микроскопируют.

3.Параллельно засевают выделенную культуру обработанную антибиотиками методом серийных разведений на плотные питательные среды с последующим подсчетом выросших колоний. Учет биохимических свойств, чувствительности к антибиотикам. Выдача результата.

Биологический метод. 2-3 мл материала, обработанного серной кислотой и нейтрализованного, вводят подкожно морской свинке и кролику с отрицательными туберкулиновыми реакциями. Через 4 мес, животное забивают проводят макро- и микроскопическое исследование органов. Делают посевы. M. tuberculosis высокопатогены для морских свинок, малопатогены для кроликов; M. bovis высокопатогены для кроликов.

Аллергический метод. Проба Манту ставят с 2 ТЕ для выявления больных и отбора контингента, подлежащего ревакцинации БЦЖ. Детям и подросткам проводится ежегодно независимо от предыдущих результатов. Вводят 0,1 мл в/к. Учет через 72 часа. - отрицательный результат: отсутствует инфильтрат и гиперемияребенок здоров, но отсутствует иммунитет. Нужна ревакцинация; -папула до 5 мм в диаметре - норма, человек здоров и имеет специфический надежный иммунитет. Вторичное поступление МБТ ведет к активации Т-клеток, цитотоксической реакции и образованию папулы. Это кладбище погибших клеток. Реакция строго специфична; - положительная – папула более 5 мм – тубинфицированность. Манту с 5 и 10 ТЕ – только в противотуберкулезном диспансере для клинической диагностики и лечении больных. Серологический метод. ИФА, РСК, РНГА. Антитела выявляются не только при активном процессе, но и при инфицировании и вакцинации.

ПЦР – диагностика. Обнаружение н.к. бактерий в клиническом образце после обогащения - ДНК

Mycobacterium tuberculosis; - комплекс М. avium и М. kansassii; - комплекс M. tuberculosi, M. bovis/ BCG, M. africanum.

4. Техника окраски по Циль-Нильсену. (95)

•Метод по Цилю-Нильсену:

1)Мазок покрывают бумагу, наносят карболовый фуксин Циля и несколько раз подогревают до появления паров, подливая краситель.

2)Бумагу снимают, обесцвечивают 5%-ным р-ром H2SO4.

3)Промывают водой.

4)Окрашивают р-ром метиленового синего 3-5 мин.

5)Промывают водой, высушивают.

Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий содержит много липидов. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем.

Кислотоустойчивые - рубиново-красные, некислотоустойчивые - сине-голубые.

Билет 21 1. Питательные среды, классификация по происхождению, плотности и целевому

назначению. Требования к питательным средам. (22)

Требования к питательным средам.

а) среды должны быть питательными - содержать все необходимые для жизнедеятельности вещества;

81

б) иметь определенное значение рН; для большинства рН 7,2-7,4; в) обладать буферностью – содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена микроорганизмов, для того чтобы не изменялось значение рН среды;

г) быть изотоничными - осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки; д) быть стерильными для получения чистой культуры; е) содержать достаточное количество Н2О;

ж) обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, для аэробов rH2– не ниже 10; для анаэробов – не выше 5; з) быть прозрачными;

Классификация питательных сред.

а) жидкие: пептонная вода (ПВ), мясопептонный бульон (МПБ); б) полужидкие: полужидкий мясопептонный агар (МПА) и др.;

в) плотные или твердые: МПА, мясопептонный желатин, свернутая сыворотка; г) сыпучие: разваренное пшено, кварцевый песок; д) сухие – гигроскопические порошки, выпускаемые промышленностью;

Для уплотнения сред используют агар, желатин или селикагель. Агар – полисахарид, выделенный из морских водорослей. К полужидким средам агар добавляют в количестве 0,5% (0,3-0,7%), к плотным

– 1,5-2%.

По составу среды делят на:

а) естественные – натуральные продукты, животные ткани, желчь, сыворотка крови; б) искусственные – среды, приготовленные из различных настоев или отваров с добавлением неорганических солей, углеводов, азотистых веществ;

в) синтетические – среды, приготовленные из определенных химических соединений в точно указанных концентрациях.

По назначению среды делят на:

а) основные (простые) –простые среды служат основой для приготовления ряда сложных питательных сред; растут многие м/о.

б) специальные (сложные) - используют для тех микроорганизмов, которые не растут на простых средах: сахарный МПБ, сахарный МПА,сывороточный МПБ и МПА, кровяной МПА, асцитический МПБ; в) элективные (избирательные) – используют для определенных видов; создаются оптимальные

условия: щелочная ПВ (для холерного вибриона), среда Сабуро (для грибов), желточно-солевой агар (для стафилококка), сывороточные среды – среда Ру и среда Леффлера (для дифтерийных коринебактерий), среда Китта-Тароцци (для анаэробов), среды с желчью (для тифо-паратифозных бактерий), среды с глицерином (для микобактерий туберкулеза); г) дифференциально-диагностические среды используют для изучения биохимических свойств и

дифференцировки (отличия): среды Эндо, Левина, Плоскирева, среды Гисса.

Среда Эндо состоит из МПА, 1 % лактозы, фуксина и сульфита натрия, исходная среда имеет светлорозовый цвет.

Среда Левина состоит из МПА, лактозы, эозина, метиленовой сини и фосфорнокислого натрия, исходная среда имеет красно-фиолетовый цвет.

Среда Плоскирева состоит из МПА, лактозы, бриллиантового зеленого, йода, нейтрального красного, солей желчных кислот, минеральных солей.

Среды Гисса служат для изучения сахаролитических свойствах микробов.

2. Антитела. Определение, строение и свойства. Классификация по происхождению и локализации. (62)

Антитела – это g-глобулины, способные специфически связываться с антигеном.

К иммуноглобулинам относят белки животного происхождения, обладающие активностью антител, а также иммуноглобулиновые рецепторы лимфоцитов и белки, сходные с антителами по химической структуре и антигенной специфичности - миеломные белки, белки Бенс-Джонса и субъединицы Ig.

Биологические функции антител:

● Распознают и связывают антиген

82

●Представляют его макрофагам и лимфоцитам

●Обуславливают повреждение тканевых базофилов

●Лизируют клетки, содержащие чужеродные субстанции

●Опсонирующее влияние

●Активирует систему комплемента

Специфичность антител - способность Ig реагировать только с определенным антигеном. Валентность – это количество антидедерминант в молекуле антитела; как правило они бивалентны, хотя существуют 5- и 10-валентные антитела.

Аффинность – прочность связи между детерминантами антигена и антидетерминантами антитела. Авидность – характеризует прочность связи антигена с антителом в реакции антиген-антитело (определяется аффинитетом и валентностью антигена).

Всостав Ig входит 18 аминокислот. Ig состовляют 15-20% белков плазмы. Кроме различных классов и подклассов Ig различают изо-, алло- и идиотипы.

Изотипы – структуры, встречающиеся в норме у всех индивидуумов одного вида. Тяжелые цепи Ig разделены на 5 классов ( a , g, e , d, m), а легкие на 2 типа ( c , l ) в соответствии с определенными антигенными особенностями.

Аллотипы – аллотипические детерминанты, имеющиеся у одних особей данного вида и отсутствующие у других. Локализованы в постоянной области Н- и L-цепей. Находятся под генетическим контролем поэтому обнаруживаются не у всех особей.

Взависимости от строения константных областей тяжелых цепей (Fc) разделены на 5 классов (IgA, IgM,

IgG, IgD, IgE).

IgG – составляют основную массу антител.

IgG1, IgG2, IgG3 – мм – 150 кД, обеспечивает защиту от микроорганизмов и токсинов.

IgG – активирует С1-С9 класс. , проникают через плаценту.

IgM – макроглобулин, пентамид, мм 950 кД., синтезирется на разных стадиях иммунного ответа, эффективно агглютинирует антигены.

IgА – основной иммуноглобулин слизистых секретов. Обеспечивает защиту слизистых оболочек от инфекции.

IgD –увеличивается при беременности.

3. Возбудитель сыпного тифа. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Болезнь Брил-ля-Цинссера. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение. Особенность циркуляции в Волгоградской области. (122)

Эпидемический сыпной тиф — острый антропоноз с трансмиссивным механизмом распространения платяными вшами. Клинически характеризуется лихорадкой, с поражением кровеносных капилляров с нарушением кровоснабжения жизненно важных органов (мозг, сердце, почки), появлением сыпи.

Таксономия и общая характеристика: Возбудитель — R. prowazekii, род Rickettsiaсемейство

Rickettsiaceae. Хорошо культивируется в организме платяных вшей, желточных мешках, обладает гемолитическими свойствами, способен формировать негативные колонии («бляшки») в культуре клеток; при окраске по Здродовскому окрашивается в красный цвет. Устойчив к действию факторов внешней среды; длительно сохраняется в высохших фекалиях инфицированных вшей. Эпидемиология и механизм заражения. Заражение либо втиранием фекалий инфицированных вшей через расчесы кожи, либо путем вдыхания пылевидного аэрозоля из высохших инфицированных риккетсиями фекалий.

Клиника, диагноз, лечение. Инкубационный период 10 дней. Начало заболевания острое, клинические проявления обусловлены генерализованным поражением системы эндотелиальных клеток кровеносных сосудов, что приводит к нарушению каскада тромбо-антитромбообразования. Морфологическую основу болезни составляет генерализованный васкулит с формированием сыпи на кожных покровах.

Болезнь протекает с высокой температурой, симптомами поражения сердечно-сосудистой и нервной систем.

Иммунитет — непродолжительный, клеточно-гуморальный.

83

Диагностика: лабораторным исследованием на специфические антитела (РСК, РНГА, ИФА и др.). Лечение: однократным приемом доксициклина, при его отсутствии — препаратами тетрациклинового ряда.

Профилактика. Изоляция завшивленных больных, дезинфекция препаратами, содержащими перметрин. Для специфической профилактики разработана живая вакцина из штамма Е.

Болезнь Бриля – рецидив после ранее перенесенного эпидемического сыпного тифа. Возбудитель— R. prowazekii. Клинически протекает как эпидемический тиф легкой и средней тяжести. Патоморфология инфекционного процесса та же, что и при эпидемической форме. Различие заключается в эпидемиологии (нет переносчика, отсутствует сезонность проявления, источник и реализация способа заражения) и патогенезе начальной стадии болезни. Она возникает вследствие активации латентно «дремлющих» риккетсий.

Микробиологическая диагностика. Затруднена на первой неделе. Диагноз устанавливается на основании клинико-эпидемиологических данных с учетом анамнеза больного и подкрепляется серологическим исследованием со специфическим антигеном. При отсутствии переносчика в очаге лечение может осуществляться без изоляции больного, в зависимости от его состояния. Прогноз благоприятен даже в отсутствии лечения антибиотиками.

Профилактика. Меры профилактики те же, что и при эпидемической форме. Специфическая профилактика невозможна.

4. Техника окраски по Нейссеру. (97)

·Метод окраски по Нейссеру

1)Мазок окрашивают уксуснокислой синей 1 минуту.

2)Промывают водой и наливают р-р Люголя на 20-30 секунд.

3)Окрашивают везувином 1-3 мин.

4)Промывают водой, высушивают.

Тела бактерий - нежные светло-коричневые, зерна волютина – в темно-синие, почти черные.

Билет 22 1. Температурные условия размножения микроорганизмов (психрофилы, мезофилы,

термофилы). Оптимальные условия культивирования патогенных бактерий. (24)

Температура влияет на скорость размножения.

—мезофилы размножаются в диапазоне температур 20—40 °С. К мезофиллам относится большинство болезнетворных для человека бактерий;

—термофилы растут в диапазоне температур 40—60 °С. К термофилам относятся актиномицеты, некоторые спороносные бациллы;

—психрофилы размножаются в диапазоне температур 0—20 °С.

В зависимости от необходимой реакции питательной среды.

1.Те из них, которые лучше всего растут на кислых питательных средах, называются ацидофилами.

2.Бактерии, для культивирования которых необходимо использовать щелочные среды, называются алкалифилами.

3.Подавляющее большинство патогенных для человека бактерий растут на средах с нейтральным рН.

По требованиям к условиям аэрации во время культивирования.

1.Облигатные аэробы требуют во время культивирования постоянного доступа воздуха к поверхности питательной среды.

2.Анаэробы, наоборот, культивируются в безвоздушной среде.

3.Особого газового состава для своего культивирования требуют микрофилы (сниженного содержания кислорода) и капнофилы (повышенного содержания углекислого газа).

4.Факультативные анаэробы растут при любых условиях аэрации.

2. Иммунитет. Определение и задачи иммунитета, понятие о врожденном и приобретенном иммунитете. Типы приобретенного иммунитета. (58)

Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ – антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и сохранение гомеостаза, целостности организма.

84

Врожденный, наследственный— это выработанная в процессе филогенеза генетически закрепленная, передающаяся по наследству невосприимчивость данного вида и его индивидов к какому-либо антигену (или микроорганизму). Примером может служить невосприимчивость человека к некоторым возбудителям сельскохозяйственных животных, нечувствительность человека к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. Отсутствие взаимных иммунных реакций на тканевые антигены у однояйцовых близнецов.

Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным.

Приобретенный иммунитет — это невосприимчивость, приобретаемая в процессе онтогенеза в результате естественной встречи с этим антигеном организма, например, при вакцинации. Примером естественного приобретенного иммунитета - невосприимчивость к инфекции, возникающая после перенесенного заболевания, а также «проиммуниция», т. е. приобретение невосприимчивости к ряду микроорганизмов.

С этой целью применяют вакцинацию, а также введение специфических иммуноглобулинов, сывороточных препаратов или иммунокомпетентных клеток. Приобретаемый при этом иммунитет называют поствакцинальным. Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный иммунитет обусловлен активной реакцией, активным вовлечением в процесс иммунной системы при встрече с данным антигеном (например, поствакцинальный, постинфекционный иммунитет), а пассивный иммунитет формируется за счет введения в организм уже готовых иммунореагентов, способных обеспечить защиту от антигена. К таким иммунореагентам относятся антитела, т. е. специфические иммуноглобулины и иммунные сыворотки, а также иммунные лимфоциты.

Иммуноглобулины используют для пассивной иммунизации, а также для специфического лечения при многих инфекциях (дифтерия, ботулизм, бешенство, корь и др.).

Пассивный иммунитет у новорожденных детей создается иммуноглобулинами при плацентарной внутриутробной передаче антител от матери ребенку.

В связи с этим различают клеточный, гуморальный, клеточно-гуморальный и гуморальноклеточ-ный иммунитет.

Примером клеточного иммунитета может служить противоопухолевый, а также трансплантационный иммунитет; иммунитет при ток-синемических инфекциях (столбняк, ботулизм, дифтерия); при туберкулезе ведущую роль играют иммунокомпетентные клетки (лимфоциты, фагоциты); при некоторых вирусных инфекциях (натуральная оспа, корь и др.) роль в защите играют специфические антитела, а также клетки иммунной системы.

Для уточнения характера иммунитета есть терминология: антитоксический, противовирусный, противогрибковый, противобактериальный, противопротозойный, трансплантационный, противоопухолевый и другие виды иммунитета.

Активный иммунитет, может поддерживаться, сохраняться либо в отсутствие, либо только в присутствии антигена в организме. Примером стерильного иммунитета является поствакцинальный иммунитет при введении убитых вакцин, а нестерильного— иммунитет при туберкулезе, который сохраняется только в присутствии в организме микобактерий туберкулеза.

3. Возбудитель сифилиса. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболевания. Микробиологическая диагностика. Лечение. (126)

Treponema palladium ; T. entericum

Морфология: типичные трепонемы. имеющие 8-12 завитков, двигательный аппарат – 3 жгутика. Окраску по Граму не воспринимают, по Романовскому-Гимзе – слабо розового цвета, выявляется импрегнацией серебром.

Культуральные свойства: на пит. средах не растёт, накопление культуры происходит путём заражения кролика в яичко. Вирулентные штаммы культивируют на средах с мозговой и почечной тканью. Биохимические свойства: микроаэрофил (представляют группу факультативно-анаэробных бактерий, устойчивых к действию кислорода в небольших концентрациях).

Антигенная структура: сложная, обладает специфическим белковым и липоидным антигенами. Факторы патогенности: участвуют адгезины, липопротеины учавствуют в развитии иммунопатологических процессов.

Резистентность: чувствителен к высыханию, солнечным лучам, на предметах сохраняется до высыхания. При неблагоприятных условиях переходит в L-формы и образует цисты.

85

Патогенез: Вызывают сифилис. Из места входных ворот трепонемы попадают в регионарные лимфатические узлы, где размножаются. Далее Т. проникает в кровяное русло, где прикрепляется к эндотелиоцитам, вызывая эндартерииты, приводящие к васкулитам и тканевому нектрозу. С кровью Т. разносится по всему организму, обсеменяя органы: печень, почки, костную, сердечно-сосудистую, нервную системы.

Иммунитет: не вырабатывается. В ответ на антигены возбудителя развивается ГЗТ и аутоиммунные процессы. Гуморальный иммунитет вырабатывается на липоидный антиген Т. и представляет собой титр IgA и IgM.

Микроскопическое исследование. Во время появления твердого шанкра. Материал для исследования: отделяемое шанкра, содержимое регионарных лимфатических узлов, из которых готовят препарат «раздавленная» капля и исследуют в темном поле. При положительном результате видны тонкие извитые нити длиной 6—14 мкм, имеющие 10—12 равномерных мелких завитков правильной, формы. Обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов.

Серодиагностика. Реакцию Вассермана ставят одновременно с 2 антигенами:

1)специфическим, содержащим антиген возбудителя— разрушенные ультразвуком трепонемы;

2)неспецифическим — кардиолипиновым.

Исследуемую сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике.

При положительной реакции наблюдается задержка гемолиза, при отрицательной—происходит гемолиз эритроцитов.

Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50 % больных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса частота положительных реакций достигает 75— 90 %.

Параллельно реакции Вассермана ставится реакция микропреципитации с неспецифическим кардиолипиновым антигеном и исследуемой инактивированной сывороткой крови или плазмой. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Положительная реакция с сывороткой крови характеризуется образованием и выпадением хлопьев.

РИФ — реакция непрямой иммунофлюоресценции — является специфической при диагностике сифилиса. В качестве антигена используют взвесь тканевых трепонем.

Сыворотку больного инактивируют и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят капли антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне.

Затем на препарат наносят сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают. Следующим этапом является обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека.

Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем. РИТ—реакция иммобилизации трепонем — также является специфической. Живую культуру трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко измельчают.

Ставят реакцию следующим образом: взвесь тканевых (подвижных) трепонем соединяют в пробирке с исследуемой сывороткой и добавляют свежий комплемент.

В одну контрольную пробирку вместо исследуемой сыворотки добавляют сыворотку здорового человека, в другую — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный — неактивный. После выдерживания при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат «раздавленная» капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем. Лечение: Пенициллины, тетрациклины, висмутсодержащие препараты.

4. Понятие о серодиагностике и сероидентификации. (78)

Серологические реакции. Реакции между антигенами и антителами in vitro или серологические реакции широко используются в микробиологических и серологических (иммунологических) лабораториях для:

· серодиагностики бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваний,

86

· сероидентификации выделенных бактериальных, вирусных и других культур различных микроорганизмов.

Серодиагностику проводят с помощью набора специфических антигенов, выпускаемых коммерческими фирмами. По результатам серодиагностических реакций судят о динамике накопления антител в процессе заболевания, о напряженности постинфекционного либо поствакцинального иммунитета.

Сероидентификацию микробных культур проводят для определения их вида, серовара с помощью наборов специфических антисывороток, также выпускаемых коммерческими фирмами.

Каждая серологическая реакция характеризуется специфичностью и чувствительностью. Под специфичностью понимают способность антигенов или антител реагировать только с

гомологичными антителами, содержащимися в сыворотке крови, либо с гомологичными антигенами соответственно. Чем выше специфичность, тем меньше ложноположительных и ложноотрицательных результатов. В серологических реакциях участвуют антитела, принадлежащие главным образом к иммуноглобулинам классов IgG и IgM.

Сероиндикация – качестве АГ используется не чистая культура микроба, а исследуемый материал от больного, в котором и определяют АГ.

Билет 23 1. Физиология микроскопических грибов. Тип питания, дыхания особенности размножения. Условия культивирования. (23)

Тип питания. Все грибы являются гетеротрофными организмами. Грибы всасывают исключительно жидкие вещества через всю поверхность тела. Также грибы могут питаться паразитируя на животных и разлагая мертвую органику. Для грибов характерно внешнее пищеварение, сначала в окружающую среду, выделяются ферменты, которые расщепляют полимеры до легкоусваиваемых мономеров. Некоторые грибы способны выделять— протеазы, расщепляющие белки; липазы, расщепляющие жиры; карбогидразы, расщепляющие полисахариды.

Грибы-сапрофиты питаются мёртвыми органическими веществами. Они играют роль в круговороте веществ в природе, минерализуя органические вещества, освобождают почву от мёртвых остатков, которые служат питанием для зелёных растений.

Грибы-паразиты ведут паразитический образ жизни. Они поселяются на живых организмах и питаются за их счёт. Например, спорынья, паразитирует на злаках.

Грибы-симбиоты: лишайники и микориза. Грибы могут вступать в симбиотические отношения с другими организмами (микориза-ассоциация гриба с корнем растения). Гриб получает много органических веществ и витаминов, а растительный компонент эффективно поглощает питательные вещества из почвы Размножение. Грибы размножаются спорами; - бесполое и половое.

В первом случае споры образуются в результате митоза, во втором - в результате мейоза, которому. Бесполые споры образуются либо внутри специализированных структур, либо на их поверхности. Половые споры и способы их образования отличаются разнообразием и определяют таксономическое положение гриба.

По типу дыхания в окружающей среде грибы — аэробы, их тканевые формы (при попадании в макроорганизм) — факультативные анаэробы.

Для культивирования дрожжей, плесеней и актиномицетов используют различные питательные среды, как плотные, так и жидкие: среду Сабуро, мозговые среды, жидкое пивное сусло и др. Наиболее широкое применение получила среда Сабуро. Она содержит пептон, глюкозу, агар-агар. Все эти компоненты растворяют в воде, устанавливают рН 5,0—5,5 и стерилизуют в автоклаве. Температура культивирования (22—29°С). Поверхность колонии может быть бугристой, складчатой, иногда плоской, консистенция — рыхлой.

87

Цвет колоний грибов разнообразный: беловато-желтый, коричневый, оранжевый, красный, бурый, черный, зеленоватый.

На жидких питательных средах плесени образуют серовато-беловатое войлокообразное сплетение мицелия или густой конгломерат из пушистых холмиков. Грибы не вызывают при росте помутнения среды.

Колонии дрожжей и дрожжеподобных грибов могут быть плоскими или куполообразными, гладкими, блестящими, иногда слегка исчерченными или складчато-бугристыми. Консистенция их сметанообразная с различными оттенками: беловато-желтоватые, коричневые, желтые и темные. На жидких средах растут сплошной пристеночной пленкой.

Колонии актиномицет. Для получения чистой культуры грибов к питательным средам добавляют различные вещества, подавляющие рост посторонней микрофлоры, например антибиотики (пенициллин, стрептомицин и др.). Используют также сочетание бычьей желчи, кристаллического фиолетового и стрептомицина, которые добавляют к среде Сабуро.

2. Иммунные сыворотки, препараты иммуноглобулинов. Классификация, получение, области применения. (70)

Иммунные сыворотки: на основе антител.

●1. Антитоксические - сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены, т.е. сыворотки, содержащие в качестве антител антитоксины, которые нейтрализуют специфические токсины.

●2. Антибактериальные - сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины, комплементсвязывающие антитела к возбудителям брюшного тифа, дизентерии, чумы, коклюша.

●3. Противовирусные сыворотки (коревая, гриппозная, антирабическая) содержат вируснейтрализующие, комплементсвязывающие противовирусные антитела.

Иммунные сыворотки получают путем гипериммунизации животных (лошади) специфическим антигеном (анатоксином, бактериальными или вирусными культурами и их антигенами) с последующим, в период максимального антителообразования, выделением из крови иммунной сыворотки.

Иммунные сыворотки, полученные от животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужеродные для человека сывороточные белки.

Для получения гомологичных нечужеродных иммунных сывороток используют сыворотки переболевших людей (коревая, оспенная сыворотки) или специально иммунизированных людей доноров (противостолбнячная, противоботулиническая), содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания.

Нативные иммунные сыворотки содержат ненужные белки (альбумин), из этих сывороток выделяют и подвергают очистке специфические белки- иммуноглобулины.

Методы очистки: осаждение спиртом, ацетоном на холоде, обработка ферментами. Иммунные сыворотки создают пассивный специфический иммунитет сразу после введения. П рименяют с лечебной и профилактической целью.

Для лечения токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена), а также для лечения бактериальных и вирусных инфекций (корь, краснуха, чума, сибирская язва).

С лечебной целью сывороточные препараты в/м.

Профилактически: в/м лицам, имевшим контакт с больным, для создания пассивного иммунитета.

3. Возбудитель хламидиозов. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Лечение.

(124)

Таксономия: порядок Chlamydiales, семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Болезни, вызываемые хламидиями, называют хламидиозами.

88

Морфология хламидий: мелкие, грам «-» бактерии, шаровидной формы. Не образуют спор, нет жгутиков и капсулы. Клеточная стенка: 2-х слойная мембрана. Имеют гликолипиды. По Граму – красный цвет. Основной метод окраски – по Романовскому – Гимзе.

2 формы существования: элементарные тельца (неактивные инфекционные частицы, вне клетки); ретикулярные тельца (внутри клеток, вегетативная форма).

Культивирование: только в живых клетках. В желточном мешке развивающихся куриных эмбрионов, организме чувствительных животных и в культуре клеток.

Ферментативная активность: Ферментируют пировиноградную кислоту, синтезируют липиды. Не способны синтезировать высокоэнергетические соединения.

Антигенная структура: Антигены трех типов: родоспецифический термостабильный липополисахарид (в клеточной стенке). Выявляют с помощью РСК; видоспецифический антиген белковой природы (в наружной мембране). Обнаруживают с помощью РИФ; вариантоспецифический антиген белковой природы.

Факторы патогенности. С белками наружной мембраны хламидий связаны их адгезивные свойства. Хламидии образуют эндотоксин. У некоторых хламидий обнаружен белок теплового шока, способный вызывать аутоиммунные реакции.

Резистентность. Высокая к различным факторам внешней среды. Устойчивы к низким температурам, высушиванию.

Профилактика: Неспецифическая.

Диагностика: При заболеваниях глаз применяют бактериоскопический метод — в соскобах с эпителия конъюнктивы выявляют внутриклеточные включения. Для выявления антигена хламидии в пораженных клетках применяют РИФ. При поражении мочеполового тракта может быть применен биологический метод, основанный на заражении исследуемым материалом (соскобы эпителия из уретры, влагалища) культуры клеток.

Серологический метод - для обнаружения IgM против С. trachomatisпри диагностике пневмонии новорожденных.

Лечение. Антибиотики, иммуномодуляторы, эубиотики.

Профилактика. Только неспецифическая (лечение больных), соблюдение личной гигиены.

С. trachomatis - возбудитель заболеваний мочеполовой системы, глаз и респираторного тракта человека.

1) Урогенитальный хламидиоз — заболевание, передающееся половым путем.

Это — острое/хроническое инфекционное заболевание, которое характеризуется преимущественным поражением мочеполового тракта. Заражение человека происходит через слизистые оболочки половых путей.

Основной механизм заражения — контактный, путь передачи — половой. Иммунитет: клеточный. После перенесенного заболевания - не формируется.

2)Трахома — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением конъюнктивы и роговицы глаз.

Антропоноз. Передается контактнобытовым путем.

Патогенез: поражает слизистую оболочку глаз. Он проникает в эпителий конъюнктивы и роговицы, где размножается, разрушая клетки. Развивается фолликулярный кератоконъюнктивит.

Диагностика: исследование соскоба с конъюнктивы. В пораженных клетках при окраске по Романовскому— Гимзе обнаруживают цитоплазматические включения фиолетового цвета, расположенные около ядра — тельца Провачека. Для выявления специфического хламидийного антигена в пораженных клетках применяют также РИФ и ИФА. Иногда прибегают к культивированию хламидий трахомы на куриных эмбрионах или культуре клеток.

Лечение: антибиотики (тетрациклин) и иммуностимуляторы (интерферон).

3)Венерическая лимфогранулема — заболевание, передающееся половым путем, характеризуется поражением половых органов и регионарных лимфоузлов.

Механизм заражения — контактный, путь передачи — половой. Иммунитет: стойкий, клеточный и гуморальный иммунитет.

Диагностика: Материал для исследования - гной, биоптат из пораженных лимфоузлов, сыворотка крови. Бактериоскопический метод, биологический (культивирование в желточном мешке куриного

89

эмбриона), серологический (РСК с парными сыворотками положительна) и аллергологический (внутрикожная проба с аллергеном хламидии) методы.

Лечение. Антибиотики — макролиды и тетрациклины. Профилактика: Неспецифическая.

4)С. pneumoniae - возбудитель респираторного хламидиоза, вызывает острые и хронические бронхиты и пневмонии. Заражение – воздушно-капельным путем. Попадают в легкие через верхние дыхательные пути. Вызывают воспаление.

Диагностика: постановка РСК для обнаружения специфических антител (серологический метод). При первичном заражении учитывают обнаружение IgM. Применяют также РИФ для обнаружения хламидийного антигена и ПЦР.

Лечение: Проводят с помощью антибиотиков (тетрациклины и макролиды). Профилактика: Неспецифическая.

5)С. psittaci - возбудитель орнитоза — острого инфекционного заболевания, которое характеризуется поражением легких, нервной системы и паренхиматозных органов (печени, селезенки) и интоксикацией. Зооантропоноз.

Источники инфекции – птицы.

Механизм заражения – аэрогенный, путь передачи – воздушнокапельный.

Возбудитель – через слиз. оболочки дыхат. путей, в эпителий бронхов, альвеол, размножается, воспаление.

Диагностика: Материал для исследования - кровь, мокрота больного, сыворотка крови для серологического исследования. Применяют биологический метод — культивирование хламидий в желточном мешке куриного эмбриона, в культуре клеток. Серологический метод. Применяют РСК, РПГА, ИФА, используя парные сыворотки крови больного. Внутрикожная аллергическая проба с орнитином.

Лечение: антибиотики (тетрациклины, макролиды).

4. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам. (76)

Метод стандартных индикаторных дисков– он позволяет охарактеризовать культуру бактерий, выделенную от больного, как устойчивую, умеренно устойчивую, умеренно чувствительную, чувствительную или высоко чувствительную к тому или иному антибиотику. Д

1)Для этого из суточной чистой культуры со скошенного агара готовят бактериальную взвесь густотой 5×108 м.т./мл и засевают 1 мл, нанося на всю поверхность специальной твердой питательной среды АГВ, разлитой в чашки Петри.

2)Посев подсушивают 20-30 минут и накладывают на него стандартные маркированные бумажные диски, содержащие определенную концентрацию того или иного антибиотика.

3)Диски накладывают на расстоянии не менее 10 мм от края чашки и 20 мм друг от друга.

4)Посевы инкубируют в термостате. Через 24 часа измеряют диаметр зон задержки роста вокруг дисков. В зависимости от его величины (d в мм) культуру относят к той или иной группе чувствительности.

5)Антибиотики, к которым данный штамм бактерий оказался высоко чувствительным, и рекомендуются для лечения.

Метод серийных разведений – позволяет определить мин. ингибир. концентрацию (МИК) данного антибиотика для данного штамма.

1)В ряд пробирок разливают МПБ в объеме 1 мл, а в первую – 1,9 мл.

2)В отделльной пробирке готовят матричный р-р антибиотика с высок. конц-ей.

3)Из нее в первую пробирку вносят 0,1 мл, перемеш. и переносят 1 мл в след. пробирку,ее встряхивают и переносят 1 мл из нее в след. и т. д.

4)Из послед.пробирки ряда по окончании приготовления разведения 1 мл выливают.

5)Затем во все пробирки вносят 0,1 мл взвеси сут. культуры со скошеш.агара =>термостат(37°С на 24 ч)

6)Ч/з сутки исслед. посевы и отмечают наим. концентрацию антибиотика, вызвавш. задержку рост-это

(МИК).

В контр. пробирке(без антибиотика) бактерии размножаются, вызывая помутнение бульона.

При постановке опыта на плотной среде:

90