2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микробиология от Насти

контролем образования лимонной корочки Проба Манту проводится только внутрикожно.

Оценка реакции

Если укол очная реакция (0-1 мм) нет папулы и нет гиперемии, то реакция отрицательная. В организме ребенка нет микобактеий туберкулеза.

При диаметре папулы 2-4,9 мм или при наличии гиперемии без папулы - реакция сомнительная. Это могут быть артефакты или проявлении неспецифической аллергии.

При диаметре папулы 5 мм и более - положительная. Это может быть при: -заболевании туберкулезом -поствакцинальной реакции -инфицировании.

Билет 14 1. Морфология микроскопических грибов и принципы их классификации. (16)

Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Это многоклеточные или одноклеточные нефотосинтезирующие (бесхлорофильные) эукариотические микроорганизмы с клеточной стенкой. Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану и многослойную, ригидную клеточную стенку, состоящую из нескольких типов полисахаридов, а также белка, липидов и др. Некоторые грибы образуют капсулу.

Цитоплазматическая мембрана содержит гликопротеины, фосфолипиды и эргостеролы. Грибы являются грамположительными микробами, вегетативные клетки — некислотоустойчивые. Грибы состоят из длинных тонких нитей (гиф), сплетающихся в грибницу, или мицелий. Гифы низших грибов

— фикомицетов — не имеют перегородок. У высших грибов — эуми-цетов — гифы разделены перегородками; их мицелий многоклеточный. Различают гифальные и дрожжевые формы грибов. Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы), сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Гифы, врастающие в питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за питание гриба), а растущие над поверхностью субстрата — воздушными или репродуктивными гифами (отвечают за бесполое размножение). Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными клетками и называются ценоцитными. Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами с отверстиями.

Дрожжевые грибы (дрожжи), в основном, имеют вид отдельных овальных клеток (одноклеточные грибы). По типу полового размножения они распределены среди высших грибов — аскомицет и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту. Могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий (псевдомицелий) в виде цепочек удлиненных клеток — «сарделек». Грибы, аналогичные дрожжам, но не имеющие полового способа размножения, называют дрожжеподобными. Они размножаются только бесполым способом — почкованием или делением. Грибы размножаются спорами половым и бесполым способами, а также вегетативным путем (почкование или фрагментация гиф). Грибы, размножающиеся половым и бесполым путем, относятся к совершенным. Несовершенными называют грибы, у которых отсутствует или еще не описан половой путь размножения.

Бесполое размножение осуществляется у грибов с помощью эндогенных спор, созревающих внутри круглой структуры — спорангия, и экзогенных спор — конидий, формирующихся на кончиках плодоносящих гиф.

Типы грибов. Выделяют 3 типа грибов, имеющих половой способ размножения (так называемые совершенные грибы): зигомицеты (Zygomycota), аскомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Отдельно выделяют условный, формальный тип/группу грибов — дейтеромицеты (Deiteromycota), у которых имеется только бесполый способ размножения (так называемые несовершенные грибы).

Заболевания, вызываемые патогенными грибками, называются микозами.

Выделяют поверхностные (кератомикозы), кожные (дерматомикозы), подкожные, глубокие (системные), оппортунистические микозы и микотоксикозы.

Бластомицеты располагаются в мазках изолированными округлыми клетками, их считают одноклеточными организмами. Колонии бластомицетов похожи на бактериальные – гладкие, пастообразные, вырастают через 24-48 ч. К бластомицетам относятся дрожжи и дрожжеподобные грибки (Candida). Candida albicans.

Окраска по Граму.

51

2. Механизмы формирования лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней и пути ее преодоления. (56)

Антибиотикорезистентность — это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме.

Резистентность может быть природной и приобретенной.

Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно устойчивы к определенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени, или в результате бактериальной непроницаемости для данного.

Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды.

Проблема формирования и распространения лекарственной резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, наблюдается множественная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).

Генетические основы приобретенной резистентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях.

Приобретенная лекарственная устойчивость в результате:

•мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) мутантов. Мутации возникают независимо от применения антибиотика, т. е. сам препарат не влияет на частоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора.

Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки). 2) множественные (серия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пенициллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);

•переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид). Некоторые плазмиды могут передаваться между бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга.

•переноса транспозонов, несущих r-гены (или мигрирующих генетических последовательностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду.

Реализация приобретенной устойчивости. Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам.

Реализация приобретенной лекарственной устойчивости возможна на каждом из следующих этапов:

•модификация мишени. Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко снижается или может быть включен «обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен действию данного препарата.

•«недоступность» мишени за счет снижения проницаемости клеточной стенки и клеточных мембран или «эффлюко»-механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.

•инактивация препарата бактериальными ферментами.

Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые делают препараты неактивными (например, беталактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза).

Беталактамазы — это ферменты, разрушающие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Ингибиторы (например, клавулановую кислоту, сульбактам, тазобактам). Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушительное действие на бета-лактамы.

52

3. Возбудитель ботулизма. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение. (115)

Ботулизм — тяжелое инфекционное заболевание, вызываемое токсигенными штаммами Clostridium botulinum, с преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы. Возбудитель относится к роду Clostridium семейству Clostridiaceae.

Морфология. палочки с закругленными концами, подвижны (перитрихи). При неблагоприятных условиях клетка образует эндоспору, бактерия принимает форму «теннисной ракетки».

Молодые клетки грамположительны, при старении культуры (через 4–5 суток роста) палочки окрашиваются грамотрицательно.

Культуральные свойства. Возбудитель ботулизма — строгий анаэроб и хорошо растет без доступа воздуха на плотных и жидких питательных средах. На кровяном агаре образуют мелкие линзообразные колонии серовато-желтоватого цвета, окруженные зоной гемолиза.

На печеночном агаре — рост полиморфных колоний звездообразной формы.

На жидких питательных средах типа среды Китта–Тароцци вызывают помутнение среды и газообразование. Культура бактерий во время роста приобретает запах прогорклого масла. Длительность культивирования — 24 ч. Оптимум рН для роста — 7,2–7,4, а для прорастания спор — 6,0–7,2. Температурный оптимум роста — 28–35 С.

По биохимическим свойствам выделяют четыре группы бактерий:

1)бактерии I группы проявляют выраженные протеолитические свойства, гидролизуют желатин и эскулин, ферментируют глюкозу и мальтозу, проявляют липазную активность на яичном агаре;

2)бактерии II группы проявляют сахаролитическую активность, но лишены протеолитической;

3)для бактерий III группы характерны липазная активность и гидролиз желатина;

4)бактерии IV группы гидролизуют желатин, но не проявляют сахаролитических свойств и липазной активности

Антигенная структура. Бактерии разделяют на 8 сероваров — A, B, C1(альфа), С2(бетта), D, E, F, G. Антигенная структура бактерий остается малоизученной, показано наличие жгутиковых Н-антигенов и типоспецифических антигенов.

Факторы патогенности.

Ботулинический экзотоксин — самый сильный в природе бактериальный токсин (смертельная доза для человека 0,005 мг). Для человека патогенны токсины бактерий типов A, B, Е, F, самый сильнодействующий — тип А. Ботулинический токсин представляет собой смесь различных белков, из которых основными являются нейротоксин и нетоксичные протеины.

Резистентность. Возбудитель ботулизма обитает в почве. Превращаясь в споры, C. botulinum может долгие годы сохраняться в окружающей среде. Инактивация спор достигается автоклавированием при 160–170 С в течение 60–120 мин, обработкой формалином в течение 24 ч или этиловым спиртом в течение 2 ч. Вегетативные формы возбудителя устойчивы в консервантах, при высокой концентрации NaCl. Они инактивируются при 80 С в течение 30 мин или 3–5% щелочью через 3–5 мин. Эпидемиология. Ботулизм — сапронозное заболевание. Резервуаром и источником инфекции являются почва и травоядные животные, в кишечнике которых C. botulinum накапливаются в огромном количестве.

Механизм передачи — фекально-оральный, путь — алиментарный. Из почвы споры могут попадать на продукты питания (консервы домашнего приготовления, рыба домашнего копчения, свиная колбаса, овощные консервы и др.), где при возникновении анаэробных условий прорастают и выделяют токсин. В зоне риска находятся жители регионов с теплым климатом.

Лабораторная диагностика ботулизма.

Для обнаружения токсина или возбудителя исследуют кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, фекалии, мочу, а также пищевые продукты.

1)Биологический: Ботулинический экзотоксин и его тип определяют с помощью постановки реакции нейтрализации на мышах, которым внутрибрюшинно вводят смесь исследуемого материала с диагностическими ботулиническими сыворотками A, B, E, F.

2)РНГА ,РИФ и ИФА.

3)При бактериологическом методе проводится посев на среду Китта–Тароцци. Через 24-48 часов выдержки посевов в термостате отмечают характер роста на среде Китта-Тароцци: помутнение, газообразование.

53

Готовят мазки, окрашивают по Граму. В случае выявления типичных клостридий с терминально расположенными спорами овальной формы в виде «теннисной ракетки» делают пересев на кровяной сахарный агар для получения отдельных колоний и выделения чистой культуры

Специфическая профилактика и лечение ботулизма.

Лечение. вводят противоботулиническую сыворотку. назначают поливалентную противоботулиническую сыворотку, содержащую антитела против токсинов бактерий типов A, B и Е. С установлением типа бактерий переходят к использованию специфической моновалентной сыворотки. Сыворотку вводят по Безредке. Одновременно назначают левомицетин.

Профилактика. контроль за продуктами питания, особенно при производстве консервов. Вздутые консервные банки бракуют. Важно предохранять мясопродукты, рыбу, овощи и другие продукты от загрязнения почвой. При групповых заболеваниях боту-лизмом лицам, употреблявшим подозрительный продукт, с профилактической целью вводят поливалентную противоботулиническую сыворотку. Для специфической профилактики используют трианатоксин или тетранатоксинظ Иммунитет. Иммунитет не формируется, так как токсическая доза ботулинического экзотоксина во много раз ниже иммуногенной дозы.

4. Микрофлора воздуха и методы ее исследования. (83)

Микрофлора воздуха взаимосвязана с микрофлорой почвы, воды, человека и животных.

Воздухом разносятся кокковидные и палочковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы.

Солнечные лучи и другие факторы способствуют гибели микрофлоры воздуха.

Состав и численность микроорганизмов воздуха закрытых помещений зависят от условий уборки помещения, уровня освещенности, количества людей в помещении, частоты проветривания и др. С целью снижения микробной обсемененности воздуха проводят влажную уборку и обработку

помещений лампами УФ-излучения, аэрозольную дезинфекцию в сочетании с вентиляцией и очисткой (фильтрацией) поступающего воздуха (например, в микробиологических лабораториях и операционных блоках).

Микробиологический контроль воздуха проводится с помощью методов естественной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри.

Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специальных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для принудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактериологический и др.). Импшджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотонический раствор хлорида натрия.

Санитарно-гигиеническое состояние воздуха определяется по следующим микробиологическим показателям:

1.Общее количество микроорганизмов в 1 м3воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) — количество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выраженное в КОЕ;

2.Индекс санитарнопоказательных микробов— количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушнокапельным путем. Появление в воздухе спорообразу-ющих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель возможного антисанитарного состояния.

Для оценки воздуха лечебных учреждений можно использовать данные из официально рекомендованных нормативных документов.

Билет 15 1. Ворсинки (фимбрии, пили) бактерий, классификация, строение и функции. (13)

Пили (фимбрии, ворсинки) — поверхностные нитевидные образования из гидрофобного белка пилина, более тонкие и короткие, чем жгутики (3–10 нм * 0,3–10 мкм). Не отвечают за движение, обладают антигенной активностью, могут адсорбировать бактериофаги, снижают заряд бактерии (заряжены «-») и

54

уменьшают электростатические силы отталкивания. Пили начинаются на ЦПМ и пронизывают КС.

Классификация:

·пили 1-го типа (общие) – имеются в количестве >100 у большинства бактерий; обеспечивают адгезию, механическую защиту, увеличивают поверхность всасывания и водно-солевого обмена; вызывают гемагглютинацию;

·пили 2-го типа (F-пили, половые) – обеспечивают конъюгацию; имеются в количестве 1-4 только у клеток-доноров, содержащих трансмиссивные плазмиды (F-, R-, Col-плазмиды). Отличительной особенностью половых пилей является взаимодействие с особыми «мужскими» сферическими бактериофагами;

·пили-кудряшки (тонкие – 1-2 нм) – участвуют в адгезии, коагрегации, формировании биопленки;

·пили IV типа – участвуют в движении клетки. Выявляются только электронной микроскопией.

2. Классификация антибиотиков по происхождению, химической структуре, механизму, типу и спектру действия. (54)

Классификация по происхождению

1.Антибиотики, полученные из грибов, например рода Penicillium(пенициллин), рода

Cephalosporium(цефалоспорины).

2.Антибиотики, полученные из актиномицетов; группа включает около 80% всех антибиотиков. Основное значение имеют представители рода Streptomyces, являющиеся продуцентами стрептомицина, эритромицина, левомицетина.

3.Антибиотики, продуцентами которых являются собственно бактерии. Примерами антибиотиков являются полимиксины, бацитрацины, грамицидин.

4.Антибиотики животного происхождения; из рыбьего жира получают эктерицид, из молок рыб – экмолин, из эритроцитов – эритрин.

5.Антибиотики растительного происхождения. К ним можно отнести фитонциды, которые выделяют лук, чеснок, сосна, ель, сирень, другие растения.

Классификация по спектру действия. Спектром действия антибиотика называют набор микроорганизмов, на которые антибиотик способен оказывать влияние.

1) влияющие преимущественно на грамположительные.

2) влияющие преимущественно на грамотрицательные.

3) широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды)

4) противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампицин);

5) противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин); 6) антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин,метронидазол,тетрациклины);

7)противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин).

Классификация антибиотиков по химической структуре

I.Бета-лактамовые антибиотики.

1.Природные пенициллины (биосинтетические): а) бензилпенициллина калиевая соль, б) бензилпенициллина натриевая соль, в) бензилпенициллин прокаин г) бициллин - 1, д) бициллин - 3, е) бициллин - 5, ж) феноксиметилпенициллин.

2.Полусинтетические пенициллины: а) пенициллиназоустойчивые с преимущественной активностью в отношении грамположительных микроорганизмов: изоксазолил пенициллины оксациллина натриевая соль, флуклоксациллин, нафциллин; б) широкого спектра действия, активные в отношении большинства грамотрицательных (кроме

синегнойной палочки) и грамположительных (за исключением пенициллиназообразующих стафилококков) микроорганизмов: амиинопенициллины ампициллин, гентациллин, пивампициллин, амоксициллин; в) активные в отношении синегнойной палочки и других грамотрицательных бактерий:

карбоксипенициллины карбенициллина динатриевая соль, тикарциллин, карфециллин, мезлоциллин; уреиодпенициллины пиперациллин, азлоциллин,; г) с преимущественной активностью в отношении грамотрицательных бактерий (активны в отношении

кишечной палочки, протея, клебсиелл, сальмонелл и др.): мециллинам, ацидоциллин и др.; д) широкого спектра действия и устойчивые к -лактамазам (ингибитор-защищенные пенициллины):

уназин (ампициллин + сульбактам), амоксиклав (амоксициллин + клавулановая кислота), тазоцин (пиперциллин + тазобактам), аугментин (амоксициллин + квалуналовая кислота); е) комбинированные антибиотики: ампиокс.

55

3.Цефалоспорины: а) цефалоспорины, обладающие высокой активностью против грамположительных бактерий: цефалоридин, цефазолин, цефалотин, цефапирин, цефадроксил, цефрадин; б) цефалоспорины, обладающие высокой активностью против грамотрицательных бактерий: цефамандол, цефуроксим, цефменоксим, цефаклор, цефотакисим (клафоран), цефокситин; в) антибиотики, обладающие высокой активностью против синегнойной палочки: цефтизоксим, цефсулодин, цефепим, цефтазидим; г) антибиотики, активные против бактероидов и других анаэробов: цефтриаксон, моксалактам, цефотетан.

4.Прочие антибиотики, имеющие в структуре -лактамное кольцо: а) группа карбапенемов -

имипенем, меропенем, тиенам; б) группа монобактамов - азтреонам.

II. Макролиды и азалиды:

эритромицин, олеандомицина фосфат, олететрин, спирамицин (ровамицин), рокситромицин, джозамицин (вильпрафен), кла-ритромицин, азитромицин (сумамед).

III.Аминогликозиды (аминоциклитолы).

1.Природные антибиотики: неомицина сульфат, мономицин, канамицин, гентамицина сульфат, стрептомицина сульфат, нетилмицин, нетромицин, гарамицин, тобрамицин.

2.Полусинтетические антибиотики: сизомицина сульфат, амикацин, изепамицин.

IV. Тетрациклины (в структуре 4 цикла).

1.Природные антибиотики: тетрациклин, тетрациклина гидрохлорид.

2.Полусинтетические дериваты: морфоциклин, метациклина гидрохлорид (рондомицин), доксициклина гидрохлорид (вибрамицин), миноциклин.

V. Производные диоксиаминофенилпропана (нитробензолы, хлормицетины, хлорамфениколы):

левомицетин, левомицетина сукцинат растворимый, легразоль, левовинизоль, ируксол, синтомицин. VI. Циклические полипептиды (природные): ванкомицин, полимиксина М сульфат, грамицидин. VII. Полиеновые антибиотики: нистатин, леворин, амфотерицин В, гризеофульвин.

VIII. Стероидные антибиотики: фузидин. IX. Линкозамиды: линкомицин (линкоцин), клиндамицин (далацин Ц).

Х. Антибиотики разных групп: ристомицина сульфат, фузидиновая кислота, спектомицин, фюзафюнхин, бацитрацин.

По механизму действия антибиотики делятся следующим образом:

I. Антибиотики, нарушающие синтез полимеров, необходимых для построения оболочки микробной клетки: пенициллины, цефалоспорины, циклосерин, ристомицин.

II. Антибиотики, нарушающие проницаемость оболочки и функции цитоплазматической мембраны (детергентное действие): полимиксины, грамицидин, нистатин, амфотерицин В, аминогликозиды (канамицин, гентамицин).

III Антибиотики, нарушающие синтез нуклеиновых кислот: - РНК - стрептомицин, гризеофульвин, рифампицин, рифамицин, ванкомицин; - ДНК - брунеомицин, рубомицин, оливомицин.

IV. Антибиотики, ингибирующие синтез белков микробной клетки: левомицетин, аминогликозиды, тетрациклины, макролиды, линкомицин, эритромицин, стероиды.

3. Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение. Особенность эпиднадзора бруцеллеза в Волгоградской области. (111)

1.Таксономическое положение: род Brucella, виды, вызывающие заболевание и у животных и у человека. B. melitensis, B. suis, B. abortus

2.Морфолого-тинкториальные свойства: Гр-коккобактерии или короткие палочки, неподвижны. Спор нет. Могут образовывать капсулу (При действии специфического бактериофага или при культивировании на среде с 10% иммунной сывороткой).Способны образовывать стабильные и нестабильные L-формы.

3.Культуральные свойства:Тип дыхания – аэробы, капнофилы. Требовательны к питательным средам, на простых питательных средах не растут, растут на сложных питательных средах (сывороточно-декстрозный и кровяной агар). Элективными средами являются печеночный бульон и печеночный агар. В жидких средах вызывают равномерное помутнение с небольшим осадком, но без пленки на поверхности. На плотных средах формируют очень мелкие круглые выпуклые гладкие прозрачные голубовато-серые колонии.Температурный оптимум роста 37 гр, оптимум рН 6,6—7,4.

56

4.Биохимические свойства: содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, реакция Фогеса—Проскауэра отрицательная, продуцируют сероводород, разлагают мочевину.

5.Антигены: Имеют соматический О- и капсульный Vi-антигены. Различные виды бруцелл различаются количественным соотношением А- (абортус) и М- (мелитензис) антигенов; имеются G- и К-антигены.

6.Факторы вирулентности: капсула (у капсульных штаммов) эндотоксин, гиалуронидаза.

7.Устойчивость в окружающей среде и к антимикробным препаратам. Бруцеллы длительно сохраняются в окружающей среде: в молоке — до 45 дней, в масле, сливках, простокваше и свежих сырах — в течение всего периода их пищевой ценности, в брынзе — до 60 дней, в замороженном мясе

— свыше 5 мес, в засоленных шкурах — 2 мес, в шерсти — до 3—4 мес, в воде — до 5 мес, в почве — до 3 мес.

Малоустойчивы к высокой температуре, при кипячении погибают моментально, при 60 °С — в течение

30мин. Чувствительны к большинству антибиотиков, действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов в обычных концентрациях.

Источник инфекции – сельскохозяйственные и домашние животные — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже олени, лошади, собаки, кошки.Больные животные выделяют бруцеллы с молоком, мочой, калом, околоплодными водами и др.

Возбудителями бруцеллеза

крупного рогатого скота являются В. abortus, мелкого рогатого скота — В. melitensis, свиней — В. suis

Больной человек не заразен, является биологическим тупиком.

Пути передачи: алиментарный (сырое молоко, молочные продукты, мясо и др.), контактно-бытовой ( при уходе за больными животными).

Патогенез. Бруцеллы проникают в организм через кожу или слизистые оболочки и распространяются по лимфатическим путям, на месте внедрения не развивается первичный аффект. Иногда наблюдается увеличение регионарных лимфатических узлов. Дальнейшая судьба возбудителя зависит от вирулентности, величины инфицирующей дозы, иммунореактивности организма. При попадании в организм больших доз вирулентных бруцелл очень быстро может наступить диссеминация возбудителя. При малых инфицирующих дозах и пониженной вирулентности бруцеллы могут длительно задерживаться в регионарных лимфатических узлах, фаза генерализации запаздывает или вообще отсутствует. В основе развивающихся в ранний период бруцеллеза диффузных изменений сосудов и паренхиматозных органов лежит токсическое действие бруцелл. Из кровотока бруцеллы оседают в воспалительных очагах, лимфатических узлах, селезенке и костном мозгу, где длительно могут сохраняться, располагаясь внутриклеточно. При обострениях процесса бруцеллы вновь усиленно размножаются, попадают в кровоток, вызывая повторные волны генерализации. Длительное пребывание возбудителя в организме приводит к его аллергизации. Со 2—3 нед, а иногда и с самого начала заболевания на первый план в патогенезе выдвигаются аллергические поражения. Аллергия при бруцеллезе играет двоякую роль. С одной стороны, аллергическое воспаление лежит в основе большинства клинических проявлений болезни, особенно в хронической стадии. С другой стороны, аллергическая реакция препятствует распространению бруцелл в организме, что имеет большое значение для предупреждения повторной генерализации процесса.

Клиническая картина. Инкубационный период 1—3 нед, но может затягиваться и до нескольких месяцев. Болезнь начинается постепенно, иногда остро. Болезнь протекает с длительной лихорадкой, ознобом, потливостью, болями в суставах, мышцах, с симптомами поражения сердечно-сосудистой, нервной, мочеполовой систем, опорно-двигательного аппарата и др. Клиническая картина бруцеллеза характеризуется большим полиморфизмом и зависит от характера пораженного органа.

Иммунитет при бруцеллезе клеточно-гуморальный, в основном нестерильный и относительный. После выздоровления иммунитет угасает, возможна реинфекция. Ввиду относительности иммунитета большие инфицирующие дозы бруцелл могут вызвать его прорыв у больных хроническим или латентным бруцеллезом, что ведет к тяжелому течению болезни.

Материал для диагностики

Острый, лихорадочный период: кровь, ликвор, пунктат грудины (при нейробруцеллезе). Хронический период: моча, желчь, мокрота (редко), секционный материал. Пунктат из сустава брать бесполезно, т.к.

57

это проявление аллергической реакции. От животных - абортированный плод, содержимое желудка (легко получить материал), молоко.

Бактериологический метод.

1 –ый Посев на печеночный бульон (кровь, молоко) или агар, или в желточный мешок куриного эмбриона. Инкубация в атмосфере с 10% углекислого газа СО2 для выделения (рост 1-4 недели). 2 –ой Изучение характера роста. Микроскопия колоний. Окраска по Граму. Постановка

ориентировочной реакции агглютинации на стекле со специфической агглютинирующей сывороткой. Посев на пестрый ряд. Проведение дифференцировки видов бруцеллы по образованию сероводорода, чувствительности к основному фуксину, тионину и определение их потребности в углекислоте.

3 -ий Учет ферментативных свойств. Ответ.

Биологический метод. Для биопробы используют белых мышей и морских свинок. Животных заражают кровью внутрибрюшинно, осадком мочи и молока — подкожно.

Через 20—30 дней у зараженного животного берут кровь и ставят с ней реакцию агглютинации. Затем животных забивают, вскрывают и делают посевы крови из сердца, взвеси внутренних органов и лимфатических узлов.

Серологический метод. В начале инкубационного периода и заболевания появляются неполные АТ, держаться долго – до 5-10 лет. Полные АТ появляются через месяц после заболевания, максимальных титров достигают к 6 мес и держаться до года.

ПЦР – диагностика. Обнаруживают ДНК Brucella species - в исследуемом образце материала; - в выделенной чистой культуре.

Аллергический метод Кожноаллергическая реакция Бюрне с бруцеллином. Ставится в комплексе с серологическими реакциями. Положительная у больных, переболевших, вакцинированных. В основе лежит РГЗТ, аллергизация наступает через 3 мес. Пока в организме есть единичные клетки бруцелл реакция положительная. Держится более 10 лет. Тяжелым больным реакция не ставится, могут развиться некрозы. Ставят здоровым людям перед вакцинацией, при обследовании очага, хроническим больным в стадии ремиссии.

4. Реакция нейтрализации токсина. Механизм. Способы постановки, область применение. (85)

В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин. Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тестобъектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают сантитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам).

Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Билет 16 1. Цитоплазматическая мембрана бактерий, химический состав, строение, роль в

жизнедеятельности бактерий. Мезосомы и их значение. (15)

Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ) – это двойной слой липидов (при электронной микроскопии кажется трёхслойной) с направленными наружу гидрофильными головками и погруженными внутрь гидрофобными хвостами (чаще фосфолипиды и нейтральные жиры).

Состоит из 15-30% липидов и 50-70% протеинов.

Это физический, осмотический и метаболический барьер между внутренним содержимым клетки и внешней средой. Она ограничивает протопласт, располагается под КС, избирательно проницаема, ригидна и лабильна.

ЦПМ пронизывают белки:

58

·структурные (поддерживают структуру мембраны) и функциональные (ферменты синтеза, переноса веществ (пермеазы) и дыхания);

·интегральные, поверхностные и периферические.

Функции ЦПМ: структурная, барьерная, транспортная, интегрирующая, энергетическая (за счет ферментов ЦПЭ, АТФ-азы), участие в процессах биосинтеза, репликации ДНК, деления и спорообразования, регуляция поступления в клетку метаболитов и ионов, регуляция осмотического давления.

Мезосомы – мембранные структуры, впячивания ЦПМ внутрь клетки (образуются при избыточном росте ЦПМ). Представляют собой ламеллярные, везикулярные или тубулярные структуры. Они позволяют увеличить рабочую поверхность мембраны, участвуют в процессах деления и спорообразования, в секреторных процессах, в процессах с высокой затратой энергии.

По расположению в клетке различают:

·септальные (образуются в зоне клеточного деления и формирования клеточной перегородки);

·латеральные (образуются в результате инвагинации периферических участков ЦПМ).

Менее сложные структуры называются внутрицитоплазматическими мембранами. За редкими исключениями бактерии не способны к эндо- и экзоцитозу.

2. Механизмы формирования лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней и пути ее преодоления. (56)

Антибиотикорезистентность — это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме.

Резистентность может быть природной и приобретенной.

Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно устойчивы к определенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени, или в результате бактериальной непроницаемости для данного.

Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды.

Проблема формирования и распространения лекарственной резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, наблюдается множественная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).

Генетические основы приобретенной резистентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях.

Приобретенная лекарственная устойчивость в результате:

•мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) мутантов. Мутации возникают независимо от применения антибиотика, т. е. сам препарат не влияет на частоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора.

Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки). 2) множественные (серия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пенициллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);

•переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид). Некоторые плазмиды могут передаваться между бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга.

•переноса транспозонов, несущих r-гены (или мигрирующих генетических последовательностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду.

Реализация приобретенной устойчивости. Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам.

Реализация приобретенной лекарственной устойчивости возможна на каждом из следующих этапов:

•модификация мишени. Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко снижается или может быть включен

59

«обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен действию данного препарата.

•«недоступность» мишени за счет снижения проницаемости клеточной стенки и клеточных мембран или «эффлюко»-механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.

•инактивация препарата бактериальными ферментами.

Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые делают препараты неактивными (например, беталактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза).

Беталактамазы — это ферменты, разрушающие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Ингибиторы (например, клавулановую кислоту, сульбактам, тазобактам). Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушительное действие на бета-лактамы.

3. Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение. (114)

Газовая гангрена — тяжелая раневая инфекция, вызываемая бактериями

рода Clostridium семейства Clostridiaceae и характеризующаяся острым тяжелым течением с интоксикацией, некрозом тканей и их распадом. Преимущественную

роль играют возбудители четырех видов: C. perfringens(70–80% случаев), C. novyi (C. oedematiens) (20– 30% случаев), C. septicum

(10–15% случаев) и C. histolyticum (5–10% случаев).

Морфология. Располагаются клостридии парами или цепочками. Наличие капсулы и отсутствие жгутиков только у C. perfringens. Клостридии хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Они грамположительные.

Культуральные свойства. Возбудители газовой гангрены — строгие анаэробы. Для этого используют:

физический (кипячение среды с последующим быстрым охлаждением и заливанием поверхности вазелиновым маслом или парафином;

посев в «высокий столбик» питательной среды;

применение анаэростатов;

химический (использование газогенераторных систем, добавление в питательные среды — тиогликолевой кислоты, тиогликолята натрия, цистеина и др.);

биологический (совместное выращивание анаэробов и аэробов).

При посеве возбудителей газовой гангрены в «высокий столбик» сахарного агара колоний: гладкие (S), шероховатые (R) и слизистые (М). На кровяном агаре колонии, кроме C. histolyticum, окружены зоной гемолиза.

Сульфитредуцирующие свойства возбудителей газовой гангрены выявляются на «высоком столбике» железосульфитной среды Вильсона–Блера, где происходит почернение среды с множественными разрывами агара (C. perfringens через

4–6 ч).

Для C. perfringens также характерен рост на лакмусовом молоке: в среде появляются кирпично-красный пронизанный пузырьками газа творожистый осадок казеина и прозрачная сыворотка.

На желточно-молочно-лактозном агаре (среда Виллиса–Хоббса) - белых опалесценций вокругколоний, лецитиназные свойства в виде перламутровой (жемчужной) опалесценции, а также рост лактозоположительных колоний.

Биохимические свойства. Все штаммы сбраживают многие углеводы с образованием кислоты и газа, не ферментируют манит; Большинство штаммов C. perfringens, вырабатывают ферменты, разжижающие желатин.

Антигенная структура. Основу классификации возбудителей газовой гангрены по антигенному признаку составляют тип и характеристики экзотоксинов, вырабатываемых бактериями. У C. perfringens выделяют шесть сероваров

(А, В, С, D, E, F), все они образуют D-токсин (лецитиназу). У C. novyi обнаружено четыре серовара (А, В, С, D), в патологии человека значимы только возбудители типа А. Другие возбудители газовой гангрены не классифицированы по

60