2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микробиология от Насти

1)по 20 мл расплавл. МПА разливают в неск. флаконов и в каждый добавл.опред. кол-ва антибиотика, перемеш. и разливают по чашкам Петри.

2)После застывания среды производят посевы испыт. культур=>термостатм(37°С на 24 ч).

3)Ч/з сутки исслед. посевы и определяют МИК

Билет 24 1. Типы и механизм питания микроорганизмов. Способы проникновения питательных веществ в клетку. (21)

Питание – процесс, где бактериальная клетка получает необходимые компоненты для построение ее биополимеров.

1.Аутотрофы (питающийся сам)– микроорганизмы, которые способны из простых неорганических синтезировать сложные органические соединения (единственный источник углерода – СО2)

2.Гетеротрофы (питающиеся за счет других)– не могут синтезировать сложные органические соединения из простых неорганических, они нуждаются в поступлении готовых органических соединений. Гетеротрофы делятся на: -Паразиты (нахлебник) – получают готовые органические соединения из живой природы, паразитируя на растениях, в организме человека и животных. -Сапрофиты (гнилой, растение)- получают готовые органические соединения из мертвой природы, разлагая органические отбросы, трупы животных и человека (санитары окружающей среды)

По способности усваивать азот:

1.Аминоаутотрофы – используют молекулярный азот воздуха (азотфиксирующие бактерии). 2.Аминогетеротрофы – получают азот из органических соединений.

Пути поступления питательных веществ:

1.Простая диффузия – идет без затрат энергии, питательные вещества поступают от мест с большей концентрацией в места с меньшей их концентрацией

2.Облегченная диффузия – перенос питательных веществ идет от мест с большей концентрацией к местам с меньшей концентрацией, но с участием молекул переносчиков (пермеаз) без затрат энергии, но с большей скоростью чем при простой диффузии

3.Активный транспорт – перенос осуществляется с помощью пермеаз, но с затратами энергии, при этом перенос может осуществляться от мест с меньшей концентрацией к местам с большей концентрацией.

4.Перенос радикалов – сопровождается транслокацией химических групп, в результате чего идет химическая модификация переносимого вещества. Перенос радикалов похож на активный транспорт. 5.Фагоцитоз и пиноцитоз – обволакивание цитоплазмой микробной клетки твёрдых и жидких питательных веществ с последующим их перевариванием.

2. Антигены бактерий и вирусов. Классификация по локализации и специфичности. Понятие о протективности и протективных антигенах. (61)

Протективные антигены - это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного инфицирования данным возбудителем. Обычно располагаются на поверхности микробной клетки.

Валентность – число активных (Аг-связывающих) центров Ат. Молекула полного Igкак минимум двухвалентна. Такие Ат известны как полные Ат; мономеры с меньшей валентностью – неполные Ат. Полные Ат (IgM, IgG) вызывают агрегацию Аг, видимую невооруженным глазом (например реакция агглютинации бактерий)

Неполные Ат содержат один Аг-связывающий центр и поэтому одновалентны (напр., Ат, вырабатываемы при бруцеллезе). Второй Аг-связывающий центр у подобных Igэкранирован различными структурами либо обладает назкой авидностью.

Неполные Ат функционально дефектны, т.к. не способны агрегировать Аг.

Неполные Ат могут связывать эпитопы Аг, препятствуя контакту с ними полных Ат, поэтому их так же называют блокирующими.

3. Возбудитель проказы. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Лечение. (120)

Хроническое гранулематозное заболевание, поражаются слизистые оболочки, верхние дыхат. пути, периферическая нервная система, глаза.

Таксономия. семейство Mycobacteriaceae, род Mycobocterium, вид M. leprae.

91

Морфологические и культуральные свойства: прямая/изогнутая палочка с закругленными концами. Грамположительные, спор и капсул не образуют, имеют микрокапсулу, жгутиков не имеют. Кислото- и спиртоустойчивость, что обуславливает окраску по Цилю—Нельсену. Не культивируется на искусственных питательных средах. Размножается только в цитоплазме клетки путем деления и образуют шаровидные скопления. Характерной особенностью является наличие бледного ядра и «пенистой» цитоплазмы. Токсинов не образует.

Биохимические свойства. Утилизируют глицерин и глюкозу и имеют специфический фермент Одифенолоксидазу. Обладают способностью продуцировать внеклеточные липиды. Аэробы. Антигенная структура. Ряд антигенов М. leprae являются общими для всех микобактерий, выделен видоспецифический гликолипид с наличием тисахарида. АТ к гликолипиду обнаруживаются только у больных лепрой.

Патогенез, клиника: Антропоноз. Резервуар, источник возбудителя - больной человек (при кашле, чихании – выделяет бактерии). Основной механизм заражения — аэрогенный, путь передачи — воздушно-капельный. Входные ворота - слизистая оболочка верхних дыхательных путей и поврежденные кожные покровы. Возбудитель распространяется лимфогематогенным путем, поражая клетки кожи и периферической нервной системы. Инкубационный период от 3-5 лет.

При высокой резистентности развивается (ТТ-тип лепры), а при низкой резистентности развивается (LL-тип лепры).

Иммунитет: относительный.

Микробиологическая диагностика: Материал: соскобы с кожи и слизистых оболочек носа, мокрота, пунктаты лимфатических узлов. Мазки окрашивают по Цилю—Нельсену.

Наибольшее значение бактериоскопия соскобов имеет при LL-форме, при которых М. leprae выявляются в больших количествах.

При ТТформе заболевания М. leprae в соскобах выявляются очень редко.

Серологическая диагностика основана на обнаружении антител к фенольному гликолипиду в ИФА. Вспомогательное значение имеет изучение иммунного статуса больного, в том числе постановка лепроминовой пробы (лепромин А). У больных LL-формой проба отрицательная, а у больных ТТформой она положительная.

Лечение: Препараты сульфонового ряда: дапсон, солюсульфон. Рифампицин, клофазимин и фторхинолоны. Методы генной терапии.

Профилактика: Специфической профилактики нет. используется вакцина BCG, составной частью является лепромин А.

4. Техника окраски по Бурри-Гинсу. (96)

·Метод по Бурри-Гинсу

1)На предметном стекле каплю черной туши смешивают с каплей культуры петлёй (по Бурри).

2)Делают мазок по типу кровяного.

3)Высушивают на воздухе, фиксируют.

4)Окрашивают карболовым фуксином 5 мин (по Гинсу).

5)Промывают водой, высушивают.

Капсулы, имея консистенцию геля, плохо удерживают краситель, их исследуют методом негативного контрастирования.

Бактерии – красные, капсулы – неокрашенные на темном фоне.

92

Билет 25 1. Формы существования и классификация вирусов. Строение простых и сложных вирусов. (27)

Вирусы - это мельчайшие формы жизни, не имеющие клеточного строения. Вирусы образуют отдельное царство (Vira).

От других микробов вирусы отличаются характерными для них уникальными свойствами:

1.Ультрамикроскопические размеры вирусов. Вирусы измеряются в нанометрах (1 мм = 1000 мкм, 1

мкм = 1000 нм).

По размерам вирусы подразделяются 1. на мелкие (например, вирус полиомиелита) - размер вирусных частиц 10-25 нм, 2. средние (например, вирусы гриппа) - размер вирионов составляет 100-120 нм, 3. крупные (например, вирус натуральной оспы) - размер вирусных частиц около 350 нм

2.Наличие только одного типа нуклеиновой кислоты - ДНК или РНК. По этому признаку все вирусы разделены на два класса - ДНК-содержащие вирусы и РНК-содержащие вирусы.

3.Облигатный внутриклеточный паразитизм. Вирусы способны реплицироваться (размножаться) только внутри живых клеток, так как у них отсутствуют собственные системы, синтезирующие белок и генерирующие энергию.

4.Простое строение вириона (вирусной частицы). Вирион состоит из генома (ДНК или РНК), покрытого одной (капсидом) или двумя (капсидом и суперкапсидом) оболочками. У вирусов отсутствуют такие клеточные элементы как цитоплазма, клеточные мембраны, рибосомы и др.

5.Дизъюнктивной (разобщенной) способ репродукции внутри клетки. При репродукции вирусов в разных частях инфицированной клетки синтезируются нуклеиновые кислоты и белки, которые затем объединяются в дочерние вирусные частицы. Синтез компонентов вирусных частиц происходит либо в цитоплазме, либо в цитоплазме и ядре клетки.

Классификация вирусов. по Балтимору:

I группа – вирусы, содержащие двуцепочечную (дц) ДНК и не имеющие РНК стадии (например, герпесвирусы, поксвирусы).

II группа – вирусы, содержащие одноцепочечную (оц) ДНК (например, парвовирусы). III группа – вирусы, содержащие двуцепочечную (дц) РНК (например, ротавирусы).

IV группа – вирусы, содержащие одноцепочечную (оц) плюс-РНК (например, пикорнавирусы, флавивирусы).

V группа – вирусы, содержащие одноцепочечную (оц) РНК негативной или двойной полярности (например, ортомиксовирусы, филовирусы).

VI группа – вирусы, содержащие одноцепочечную (оц) плюс-РНК и имеющие в процессе жизненного цикла стадию синтеза ДНК на матрице РНК (например, ретровирусы).

VII группа – вирусы, содержащие двуцепочечную (дц) ДНК и имеющие в процессе жизненного цикла стадию синтеза ДНК на матрице РНК (например, вирус гепатита В).

93

Вирусная частица называется вирионом.

Выделяют следующие формы вирионов:

1.- палочковидная форма характерна для вируса табачной мозаики;

2.- пулевидная форма присуща вирусу бешенства;

3.- сферическая форма отмечается у многих вирусов, в частности у герпесвирусов, вируса иммунодефицита человека;

4.- нитевидная форма наблюдается у филовирусов;

5.- овальная форма характерна для вируса натуральной оспы;

6.- сперматозоидная форма отмечается у большинства вирусов бактерий (бактериофагов).

Различают 3 типа симметрии:

1) спиральный, когда капсомеры укладываются по спирали – винтообразная структура нуклеокапсида; 2) кубический(икосаэдрический), когда капсомеры укладываются по граням многогранника (12-20- гранника) – в основе лежит фигура икосаэдра (20гранника). Вирионы со сложным капсидом, построенным более чем из 60 капсомеров, содержат группы из 5 субъединиц – пентамеры, или из 6 субъединиц – гексамеры; 3) смешанный тип симметрии (у бактериофагов).

В зависимости от количества оболочек вирусы подразделяются на 2 типа:

1.- простые вирусы (просто устроенные, безоболочечные, “голые”), состоящие из нуклеиновой кислоты и одной белковой оболочки - капсида;

2.- сложные вирусы (сложно устроенные, оболочечные, “одетые”), содержащие кроме нуклеиновой кислоты и капсида внешнюю липопротеиновую оболочку (суперкапсид).

В центре вириона располагается нуклеиновая кислота. Снаружи нуклеиновая кислота покрыта белковой оболочкой - капсидом. Капсид как чехлом окружает вирусную нуклеиновую кислоту. Вирусный геном и капсид вместе образуют нуклеокапсид.

Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц - капсомеров. Простые вирусы могут быть как РНК-содержащими, так и ДНК-содержащими.

Каждый капсомер построен из одной или нескольких гомологичных или гетерологичных полипептидных цепей, которые соединены друг с другом дисульфидной связью.

Таким образом, каждый капсомер может быть мономерным (содержать один полипептид) либо полимерным (включать несколько полипептидов).

У сложных вирусов наряду с капсидом имеется дополнительная оболочка - суперкапсид. Суперкапсид состоит из двойного слоя липидов и специфических вирусных белков. Суперкапсидная оболочка вируса является модифицированной цитоплазматической мембраной клетки, в которой репродуцировался данный вирус. Модификация происходит путем встраивания вирусных белков в участки цитоплазматической мембраны инфицированной клетки. Сложные вирусы также могут быть как РНКсодержащими, так и ДНК-содержащими.

Суперкапсид и капсид выполняют функции защиты генома от воздействия повреждающих факторов внешней среды. На поверхности некоторых оболочечных вирусов располагаются шипы или шипикиэто липопротеиновые или гликопротеиновые выступы.Шипы выполняют функцию взаимодействия вирусных частиц с чувствительными клетками. Если удалить шипы детергентом,

то вирус полностью теряет инфекционную активность. У некоторых сложных вирусов между суперкапсидом и капсидом расположен слой белка, который называется матриксом.Этот белок способствует взаимодействию суперкапсида с нуклеокапсидом.

2. Цитокины. Строение, функции и значение для развития иммунной системы, лимфопоэза и регуляции иммунного ответа. (67)

Цитокины — группа гормоноподобных белков и пептидов — синтезируются секретируются клетками иммунной системы и другими типами клеток. Цитокины имеют молекулярную массу, не превышающую 30 кD.

Разнообразные биологические функции цитокинов подразделяются на три группы: они управляют развитием и гомеостазом иммунной системы, осуществляют контроль за ростом и дифференцировкой клеток крови (системой гемопоэза) и принимают участие в неспецифических защитных реакциях организма, оказывая влияние на воспалительные процессы, свертывание крови, кровяное давление.

94

Вообще цитокины принимают участие в регуляции роста, дифференцировки и продолжительности жизни клеток, а также в управлении апоптозом.

Все цитокины, а их в настоящее время известно более 30, по структурным особенностям

ибиологическому действию делятся на несколько самостоятельных групп.

Цитокины включают интерлейкины, лимфокины, монокины, хемокины, интерфероны, колоний стимулирующие фактор.

Интерлейкины (ИЛ) - цитокины, ответственные за межклеточные взаимодействия между лейкоцитами. Описано около 20 интерлейкинов.

Интерфероны - гликопротеины, вырабатываемые клетками в ответ на вирусную инфекцию

идругие стимулы. Блокируют репликацию вируса в других клетках и участвуют во взаимодействии между клетками иммунной системы.

Различают две серологические группы интерферонов: I типа - ИНФ-α и -β и II типа - ИФН-γ. Интерфероны I типа оказывают противовирусные и противоопухолевые эффекты, в то время как интерферон II типа регулирует специфический иммунный ответ и неспецифическую резистентность.

Цитокины активны в очень малых концентрациях. Их биологический эффект на клетки реализуется через взаимодействие со специфическими рецепторами, локализованными на клеточной цитоплазматической мембране. Образование и секреция цитокинов происходит кратковременно и строго регулируется.

Различают интракринный, аутокринный, паракринный и эндокринный механизмы действия цитокинов.

1.Интракринный механизм - действие цитокинов внутри клетки-продуцента; связывание цитокинов со специфическими внутриклеточными рецепторами.

2.Аутокринный механизм - действие секретируемого цитокина на саму секретирующую клетку.

3.Паракринный механизм - действие цитокинов на близкорасположенные клетки и ткани.

4.Эндокринный механизм - действие цитокинов на расстоянии от клеток-продуцентов.

3. Синегнойная палочка. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Роль в патологии человека. Микробиологическая диагностика. Лечение. (131)

Морфологические и тинкториальные свойства: Pseudomonas aeruginosa относится к семейству

Pseudomonadaceae. Грам «-», прямые палочки, расположенные одиночно, попарно или в виде коротких цепочек. Подвижны. Спор не образуют, имеют пили (фимбрии). При определенных условиях могут продуцировать капсулоподобную внеклеточную слизь полисахаридной природы.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, которые хорошо растут на простых питательных средах. Для выделения чистой культуры применяют селективные или дифференциальнодиагностические питательные среды с добавлением антисептиков.

На жидкой питательной среде бактерии образуют характерную серовато-серебристую пленку на поверхности. Характерным биологическим признаком - способность синтезировать водорастворимые пигменты (пиоцианин синезеленого цвета), окрашивающие в соответствующий цвет повязки больных или питательные среды при их культивировании.

Биохимические свойства: низкая сахаролитическая активность: не ферментирует глюкозу и другие углеводы. Псевдомонады способны только окислять глюкозу. Восстанавливает нитраты в нитриты, обладает протеолитической активностью: разжижает желатину.

Синегнойная палочка имеет каталазу и цитохромоксидазу. Многие штаммы синегнойной палочки продуцируют бактериоцины — протеины, обладающие бактерицидными свойствами. Антигенные свойства: О- и Н-антигены. Липополисахарид клеточной стенки является типоили

группо-специфическим термостабильным О-антигеном, на основе которого проводят серотипирование штаммов.

Термолабильный жгутиковый Н-антиген бывает двух типов и обладает протективным действием. На поверхности клеток палочки обнаружены антигены пилей.

Факторы патогенности:

1.факторы адгезии и колонизации: пили(фимбрии), экстрацеллюлярная слизь, гликолипопротеид – защищает бактерии от фагоцитоза.

95

2. токсины: эндотоксин – развитие лихорадки; экзотоксин А – цитотоксин, вызывает нарушения клеточного метаболизма; экзоэнзим S; лейкоцидин – токсическое действие на гранулоциты крови. 3.ферменты агрессии: гемолизины (термолабильная фосфолипаза С и термостабильный гликолипид); нейроминидаза; эластаза.

Резистентность: условия почти полного отсутствия источников питания; сохраняется в воде. Чувствительна к высушиванию, высокая устойчивость к антибиотикам.

Эпидемиология: источник: больной. Механизмы заражения: контактный, респираторный, кровяной, фекально – оральный.

Патогенез: проникают через поврежденные ткани. Засевают рану или ожоговую поверхность. Размножаются. Локальные процессы (инфекция мочевыводящих путей, кожи, респираторного тракта). Бактериемия. Сепсис.

Клиника: раневые инфекции, ожоговую болезнь, менингиты, инфекции мочевыводящих путей, кожи, заболевания глаз, сепсис.

Иммунитет. В сыворотке крови здоровых и переболевших - антитоксические и антибактериальные антитела.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования: кровь, гной и раневое отделяемое, моча, мокрота.

Бактериоскопия – нет, отсутствие морф. и тинктор. особенностей.

Основной метод диагностики - бактериологическое исследование, позволяет идентифицировать возбудитель, и определить чувствительность бактерий к антимикробным препаратам.

При идентификации учитывают рост на агаре, положительный цитохромоксидазный тест, выявление термофильности (рост при 42С).

Для внутривидовой идентификации бактерий применяют серотипирование.

Серологический метод исследования направлен на обнаружение специфических антител к антигенам палочки (обычно экзотоксину А и ЛПС) с помощью РСК, РПГА.

Лечение: антибиотики (цефалоспорины, β-лактамы, аминогликозиды). Тяжелые формы – плазма из крови, иммунизированной поливалентной корпускулярной синегнойной вакциной. Для местного лечения: антисинегнойный гетерологичный иммуноглобулин. Для лечения гнойных инфекций кожи, ожогов – синегнойный бактериофаг.

Профилактика: специфическая – стерилизация, дезинфекция, антисептика. Контроль за обсемененностью внешней среды. Неспецифическая– иммуномодуляторы. Пассивная специфическая иммунизация гипериммунной плазмой. Для создания активного иммунитета–вакцины(поливалентная корпускулярная синегнойная вакцина,стафило–протейно-синегнойная вакцина.

4. Реакция иммунофлюоресценции (МФА). Механизм, компоненты, применение. (87)

Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса).

Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах

люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом.

Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

96

Билет 26 1. Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Понятие о

дезинфекции, стерилизации, асептике и антисептики. Методы обработки и способы контроля. (25)

1. Температура.

●Способность микроорганизмов к выживанию после длительного нахождения в экстремальных температурных условиях.

●Способность микроорганизмов к росту в экстремальных температурных условиях

●Повышение температуры выше максимальной может привести к гибели клеток. Механизм губительного действия высоких температур связан с денатурацией клеточных белков.

В зависимости от температурных зон выделяют психрофильные, мезофильные и термофильные микроорганизмы.

Психрофильные микроорганизмы –граница роста находится около 0°С. Факультативные психрофильные микробы могут размножаться при +30°С. У облигатных психрофильных микробов верхняя граница роста соответствует 20°С, оптимальная зона 10-15°С.

Мезофильные микроорганизмы –границы роста находятся в пределах 20-45°С (оптимальная температура 35-37°С). Обитают в организме теплокровных животных, в почве, воде, могут переживать в воздухе. Предельные температуры роста простейших находятся в границах 56°С, водорослей - 60°С, грибов - 60-62°С, фотобактерий - 70-72°С, хемолитотрофов – выше 90°С.

Облигатные термофильные микробы обитают в фумаролах, кипящих и горячих источниках, промышленных и бытовых водах, самовозгорающихся материалах, конденсатах паровых труб.

Высушивание приводит к обезвоживанию микробной клетки и нарушению окислительновосстановительных процессов. Высушивание почти не действует на спорообразующие бактерии.

Лучистая энергия. Ультрафиолетовые лучи, инфракрасные, гамма-лучи и солнечный свет воздействуют на микроорганизмы фотонами. Чем выше энергия фотонов, тем сильнее биологический эффект.

Инфракрасные лучи, соприкасаясь с микроорганизмами, выделяют тепловую энергию, при этом лучистая энергия переходит в тепловую.

Рентгеновские и гаммалучи в больших дозах 280-440 Дж/кг вызывают ионизацию органических веществ, появление свободных радикалов, которые приводят к разрушению ядерного вещества и клеточной ДНК.

Ультрафиолетовые лучи. Микробицидное действие характерно для коротковолновых УФ-лучей, особенно с длиной 250-270 нм. Механизм их действия связан с поглощением излучения молекулами ДНК, в результате чего образуются тиминовые, тимин-цитозиновые и цитозиновые димеры. Такие повреждения ДНК востанавливаются механизмами темновой репарации и фотореактивации. При действии высоких доз УФ-лучей происходит необратимая цепная реакция окисления липидов и белков.

Нескольким меньшим микробицидным действием обладает ультразвук. Практическое применение для консервации продуктов. Механизм бактерицидного действия ультразвука заключается в том, что в цитоплазме бактерий образуется кавитационная полость, которая заполняется парами жидкости, в пузырьке возникает давление до 10000 атм, что приводит к дезинтеграции цитоплазматических структур.

2. Химические вещества могут: служить источниками питания; не оказывать какого-либо влияния; стимулировать или подавлять рост.

97

Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы, называются дезинфицирующими. Химические вещества, используемые для дезинфекции, относятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям.

Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая, салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли).

Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке. Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании данного предмета. Как правило, при дезинфекции погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии.

Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и бактерионосители.

Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию воспалительного процесса.

2. Центральные и периферические органы иммунной системы. Понятие о механизме лимфопоэза. (65)

I. Центральные органы иммунной системы: К центральным органам иммунной системы относятся костный мозг и вилочковая железа (тимус).

Красный (активный) костный мозг у ребенка располагается во всех костях скелета, а с 3-4-летнего возраста начинается постепенное его замещение на жировой. У взрослого человека красный костный мозг располагается в губчатых костях скелета (тазовые кости, рёбра, грудина, тела позвонков) и эпифизах трубчатых костей.

Тимус расположен в переднем верхнем средостении, за грудиной, над сердцем. Тимус состоит из двух больших долей, которые фрагментированы на множество долек, разделенных фиброзными перегородками.

Вкаждой дольке выделяют две гистологические зоны, по периферии – корковая, в центре – мозговая.

Вцентральных органах иммунной системы происходит лимфопоэз – процесс развития и созревания лимфоцитов из стволовых кроветворных клеток. В ходе лимфопоэза в костном мозге образуется лимфобласт – клетка предшественник всех лимфоцитов, из которой в костном мозге созревают:

• нулевые лимфоциты (естественные или натуральные киллеры, которые уничтожают раковые клетки и клетки, пораженные вирусом),

• дендритные клетки (популяция антигенпрезентирующих клеток),

• В-лимфоциты

• незрелые Т-лимфоциты. Незрелые предшественники Т-лимфоцитов (преТ-лимфоциты) мигрируют из костного мозга в тимус, где завершается их лимфопоэз (созревание).

Созревание лимфоцитов состоит из двух этапов: антигеннезависимой дифференцировки и селекции. Созревание В-лимфоцитов происходит ей в костном мозге, а Т-лимфоцитов – в тимусе.

Входе антигеннезависимой дифференцировки на поверхности лимфоцитов появляются рецепторы, способные взаимодействовать специфически с эпитопами антигенов. Формируется набор (пул) Т и В- лимфоцитов, клоны которого способны специфически связываться с вариантом антигенной детерминанты. Причем, в составе пула есть лимфоциты, способные связываться и с собственными антигенами человека.

Поэтому после дифференцировки происходит селекция – уничтожение лимфоцитов, несущих рецепторы к собственным антигенам, путем апоптоза.

Клонально-селективная теория - лимфоциты с необходимой специфичностью уже существуют в организме до первого контакта с антигеном благодаря антигеннезависимой дифференцировки. Специфичность определяется наличием на их поверхности соответствующих рецепторов к чужеродным антигенам. Каждый клон лимфоцитов располагает рецептором только одного типа.

Созревшие в костном мозге В-лимфоциты и в тимусе Т-лимфоциты поступают в периферические органы иммунной системы.

98

Если в организм попадает чужеродный антиген, он распознается соответствующим клоном лимфоцитов и начинается антигензависимая дифференцировка этого клона: его пролиферация (размножение) и запускается продукция антител, приводящей к удалению антигена из организма. Сначала в течение первой недели появляются IgM антитела. Спустя 2-3 недели начинаю нарастать титры IgG-антител, достигая максимума через 3 месяца. Каскад иммунной реакции, кроме того, приводит к появлению клеток памяти (Т и В-лимфоцитов памяти).

Вторичный иммунный ответ за счет клеток-памяти развивается быстро, обычно в течение 4-5 суток, и сопровождается резким повышением титра IgG-антител. Таким образом формируется постинфекционный (естественный активный) иммунитет и поствакцинальный (искусственный активный) иммунитет.

II. Периферические органы иммунной системы

•неинкапсулированная лимфоидная ткань слизистых оболочек и кожи,

•лимфатические узлы,

•селезенка, • печень, • кровь, лимфа.

В периферических органах иммунной системы находятся зрелые лимфоциты.

Неинкапсулированная лимфоидная ткань слизистых оболочек и кожи:

•лимфоидная ткань, ассоциированная с ЖКТ (глоточное лимфоидное кольцо Пирогова, пейеровы бляшки тонкой кишки, лимфоидные фолликулы аппендикса),

•лимфоидная ткань, ассоциированная с бронхами и бронхиолами,

•лимфоидная ткань мочевыводящих путей,

•лимфоидная ткань, ассоциированная с кожей.

Данный орган периферической иммунной системы усиливает барьерные факторы неспецифического иммунитета (кожи и слизистых). Основная функция лимфоидной ткани слизистых оболочек и кожи – дифференцировка В-лимфоцитов в плазмоциты, которые продуцируют секреторные иммуноглобулины классов IgА и IgЕ, обеспечивающие местный иммунитет.

Лимфатические узлы – множественные, симметрично расположенные по телу, инкапсулированные периферические лимфоидные органы бобовидной формы. У человека насчитывается около 500 лимфатических узлов. Если возбудитель преодолел кожные и слизистые барьеры, то с потоком лимфы он попадет в лимфоузлы, которые выполняют функцию механического и биологического фильтра. Лимфатические узлы содержат фагоцитирующие клетки, разрушающие чужеродные агенты на корпускулярном уровне, в них продуцируются плазматические клетки и синтезируются антитела.

В лимфатических узлах инфекционные агенты задерживаются, обезвреживаются антителами, а затем поглощаются макрофагами. Поэтому, при инфекции региональные лимфоузлы обычно увеличиваются и становятся болезненными на ощупь. В ряде случаев инфекция сопровождается воспалением лимфатических узлов – лимфаденитом.

Селезенка содержит лимфоидную ткань, которую называют белой пульпой. В белой пульпе имеются тимусзависимые и тимуснезависимые зоны, которые заселяются Т- и В-лимфоцитами соответственно. Селезенка является лимфоцитарной «таможней» для антигенов, которые попали в кровь.

Печень – Т и В лимфоциты печени и нормальные киллеры совместно с макрофагами контролируют кровь воротной вены, которая содержит всосавшиеся в кишечнике вещества, обеспечивают поддержание иммунологической толерантности к пищевым веществам и клеткам печени. Периферическая кровь и лимфа – являются транспортно-коммуникационным компонентом иммунной системы.

3. Возбудитель лептоспирозов. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Микробиологическая диагностика. Лечение. Специфическая профилактика. (127)

Лептоспироз — острая зоонозная инфекция, характеризующаяся волнообразной лихорадкой, интоксикацией, поражением капилляров печени, почек, ЦНС.

Морфология. Лептоспиры представляют собой тонкие спирохеты. Двигательный аппарат представлен одиночными фибриллами. Число завитков 20–40. Слабо окрашиваются анилиновыми красителями. Легко различимы при микроскопии в темном поле и фазовом контрасте. Цист не образуют. Культуральные и биохимические свойства. Аэробы. Источником углерода и энергии служат липиды. Каталаза- и оксидазаположительны. Культивируются на питательных средах, содержащих сыворотку

99

или сывороточный альбумин, при температуре 28–30 qС. Особенность роста на жидкой питательной среде — отсутствие помутнения.

Антигенная структура. Содержат общеродовой антиген белковой природы, обнаруживаемый в РСК, а также вариантоспецифический поверхностный антиген липополисахаридной природы, выявляемый в реакции агглютинации.

Основной таксон — серовар.

Резистентность. L. interrhogans чувствительна к высыханию, нагреванию, низким значениям рН, дезинфицирующим веществам. При нагревании до 56 qС погибает в течение 25–30 мин. Кипячение убивает микроб мгновенно. В водоемах сохраняется до 30 дней, во влажных и щелочных почвах — до 280 дней, на пищевых продуктах — 1–2 суток.

Эпидемиология. Патогенен для человека и животных вид L. interrhogans, вызывающий лептоспироз, — природно-очаговый зооноз с преимущественно фекально-оральным механизмом передачи возбудителя. Основным резервуаром - грызуны, дополнительными — домашние животные. Восприимчивость людей к лептоспирозу высокая. Основные пути передачи: водный, алиментарный, контактный.

Факторы патогенности. Некоторые серовары L. interrhogans характеризуются гемолитической и липазной активностью, продуцируют плазмокоагулазу, фибринолизин, цитотоксины.

Патогенез и клиника заболевания. Входные ворота — слизистые оболочки пищеварительного тракта, поврежденная кожа. Проникнув в организм, микроб с кровью разносится к органам ретикулоэндотелиальной системы (печень, почки), где размножается и вторично поступает в кровь, что совпадает с началом болезни. Возбудитель поражает капилляры печени, почек, ЦНС, что приводит к развитию геморрагий в этих органах.

Иммунитет. Перенесенная болезнь оставляет стойкий, преимущественно гуморальный.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат кровь, спинномозговая жидкость, моча, сыворотка крови в зависимости от стадии заболевания.

Для диагностики используют бактериоскопический (обнаружение лептоспир в темнопольном микроскопе), бактериологический и серологические методы (РА, РСК), а также применяют ПЦР. Биопробу на кроликах.

Профилактика и лечение.Специфическая профилактика проводится вакцинацией по эпидемическим показаниям убитой нагреванием, корпускулярной вакциной, содержащей 4 основных серогруппы возбудителя. Для лечения используют антибиотики (пенициллин, тетрациклин) в сочетании с лептоспирозным гетерологичным иммуноглобулином.

4. Реакция агглютинации. Компоненты, цель и методы постановки, учет. (79)

Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изотонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировочная,

непрямая и др. Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осадка.

РА используют для:

1)определения антител в сыворотке крови больных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) и других инфекционных болезнях;

2)определения возбудителя, выделенного от больного;

3)определения групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 ˚С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специфическими антителами. Реакция агглютинации с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации.

Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.

100