2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микробиология от Насти

выделенного от больного. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида.

При появлении в капле с сывороткой и микробами хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увеличивающимися разведениями агглютинирующей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Одновременно учитывают контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка. Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.

Билет 4 1) Понятие о доменах. Общая характеристика и отличия прокариот (бактерий, архей) и

эукариот. Принципы классификации микроорганизмов. (2)

Домен — самый верхний уровень группировки организмов в системе научной классификации, включающий в себя несколько царств. Микроорганизмы представлены доклеточными формами (вирусы — царство Vira) и клеточными формами (бактерии, архебактерии, грибы и простейшие).

Различают 3 домена:

«Bacteria», «Archaea» и «Eukarya»:

домен «Bacteria» — прокариоты, представленные настоящими бактериями (эубактериями);

домен «Archaea» — прокариоты, представленные архебактериями;

домен «Eukarya» — эукариоты, клетки которых имеют ядро с ядерной оболочкой и ядрышком, а цитоплазма состоит из высокоорганизованных органелл — митохондрий, аппарата Гольджи и др.

Домен «Eukarya» включает: царство Fungi (грибы); царство животных Animalia (включает прстейшие – подцарство Protozoa); царство растений Plante.

Домены включают царства, типы, классы, порядки, семейства, роды, виды.

Прокариоты - это организмы у которых нет оформленного ядра, а есть лишь предшественник – нуклеоид. Он представлен 1 или несколькими хромосомами, которые состоят из ДНК и свободно располагаются в цитоплазме не отграниченные от неё никакой мембраной. Прокариоты не имеют аппарата митоза, ядрышка, митохондрий. Обладают рибосомами клеточной стенкой с пептидогликаном. По типу дыханияаэробы и анаэробы. Двигаются с помощью жгутиков, построенных у прокариот из белка флагеллина и не содержат микротрубочек.

Эукариоты - имеют ядро отграниченное от цитоплазмы ядерной мембраной, аппарат митоза и ядрышко, рибосомы, митохондрии, не содержат пептидогликана, все аэробы. Подвижность обеспечивают жгутики и состоят из белка тубулина, представляют систему микротрубочек. К царству вирусов и плазмид относят организмы геном, которых представлен либо ДНК, либо РНК. Они являются абсолютными внутриклеточными паразитами.

Геном – полный набор генетической информации. Для того чтобы обозначить определение понятия «микроорганизм» необходимо определить главный критерий который бы отличал живое от неживого. Ген является единственным носителем и хранителем жизни. Отличие живого от неживого наличие собственной генетической системы. Все кто имеют свою генетическую систему рассматриваются как организмы.

11

Микроорганизмы - это невидимые простым глазом представители всех царств жизни, занимающие низшие ступени эволюции, но играющие важную роль в круговороте веществ в природе, патологии растений, животных и человека. Прокариоты отличаются от эукариот по ряду основных признаков: 1.Отсутствие истинного дифференцированного ядра (ядерной мембраны).

2.Отсутствие развитой эндоплазматической сети, аппарата Гольджи.

3.Отсутствие митохондрий, хлоропластов, лизосом. 4.Неспособность к эндоцитозу (захвату частиц пищи).

5.Клеточное деление не связано с циклическими изменениями строения клетки. 6.Значительно меньшие размеры (как правило).

2) Общая характеристика патогенных микроорганизмов. Понятие о нозологических формах инфекционных заболеваний. (42)

Для большинства патогенных микробов оптимальной является температура 30–37°С. Патогенные микробы могут перезимовать в почве и различных субстратах. Высокая температура среды губительна для микробов.

Некоторые бактерии вне организма человека и животного образуют споры путем уплотнения протоплазмы и образования плотной оболочки, что позволяет им длительно сохраняться во внешней среде. Высушивание, приводящее к обезвоживанию, губительно для микробов. Споры очень стойко переносят высушивание.

Все микроорганизмы, распространенные в природе, делят на патогенные (болезнетворные), способные вызывать различные заболевания, и непатогенные (сапрофитные), которые не вызывают заболеваний. Существуют также условнопатогенные микроорганизмы, вызывающие заболевания только в определенных условиях при снижении устойчивости (резистентности) организма под влиянием неблагоприятных факторов.

В зависимости от формы все бактерии подразделяются на палочки (бациллы), кокки, имеющие круглую форму (стрептококки, стафилококки), вирусы, грибы, простейшие и т.д. К числу важнейших свойств микроорганизмов относятся патогенность и вирулентность.

Под патогенностью понимают способность микроорганизма вызывать инфекционное заболевание, а под вирулентностью меру патогенности, которая различна у тех или иных болезнетворных микроорганизмов.

Экзотоксин выделяется при жизни клетки (бактерии столбняка, дифтерии, ботулизма). Одни из них преимущественно действуют на ЦНС (токсины ботулизма, столбняка), а другие — на те или иные системы организма.

Эндотоксин выделяется при разрушении микробной клетки и вызывает общую интоксикацию. Патогенные микроорганизмы в естественных условиях питаются за счет питательных веществ.

Все микроорганизмы по типу дыхания делятся на две группы: 1) аэробы, которые хорошо развиваются при наличии кислорода (дизентерийные бактерии, холерный вибрион и др.) и 2) анаэробы, которые хорошо размножаются только при отсутствии кислорода (возбудители столбняка, ботулизма, газовой гангрены и др.).

Под нозологическими формами подразумевают отдельно взятое заболевание. Предметом изучения является здоровье. Нозологическая форма заболеваний -это о самостоятельная форма болезни, характеризующуюся следующими критериями:

Нозология— учение о биологических и медицинских основах болезней, включающее вопросы их этиологии, патогенеза, номенклатуры и классификации.

Нозологическая единица (нозологическая форма) — определенная болезнь, которую выделяют в качестве самостоятельной на основе установленных причин, механизмов развития и характерных клинико-анатомических проявлений, отражающих преимущественное поражение тех или иных органов и систем организма.

12

3) Возбудители эшерихиозов. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов. Лечение. (100)

Эшерихиозы - инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichiacoli. Различают энтеральные (кишечные) и парентеральные эшерихиозы.

Энтеральные эшерихиозы — острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы

E.coli.

Парентеральные эшерихиозы — болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli — представителями нормальной микрофлоры толстой кишки. При этих болезнях возможно поражение любых органов.

Таксономическое положение. Возбудитель — кишечная палочка — основной представитель рода

Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.

Морфологические и тинкториальные свойства. E.coli — это мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках они располагаются беспорядочно, не образуют спор, перитрихи. Некоторые штаммы имеют микрокапсулу, пили.

Культуральные свойства. Кишечная палочка — факультативный анаэроб, оптим. темп. для роста - 37С. E.coli не требовательна к питательным средам и хорошо растет на простых средах, давая диффузное помутнение на жидких и образуя колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-диагностические среды с лактозой — Эндо, Левина.

Ферментативная активность. Ее способность ферментировать лактозу.

Антигенная структура. Кишечная палочка обладает соматическим О-, жгутиковым Н и поверхностным К -антигенами. По антигенным, токсигенным, свойствам различают два биологических варианта E.coli: 1) условно-патогенные кишечные палочки; 2) «безусловно» патогенные, диареегенные. Факторы патогенности. Образует эндотоксин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. Диареегенные эшерихии продуцируют экзотоксин вызывающий значительное нарушение водно-солевого обмена. Обнаруживается инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток.

К факторам патогенности всех штаммов E.coli относятся пили и белки наружной мембраны, способствующие адгезии, а также микрокапсула, препятствующая фагоцитозу. Резистентность.E.coliотличается более высокой устойчивостью к действию различных факторов внешней среды; она чувствительна к дезинфектантам, быстро погибает при кипячении. Роль E.coli. Кишечная палочка — представитель нормальной микрофлоры толстой кишки. Она является антагонистом патогенных кишечных бактерий, гнилостных бактерий и грибов рода Candida. Кроме того, она участвует в синтезе витаминов группы В, Е и К, частично расщепляет клетчатку. Штаммы, обитающие в толстой кишке и являющиеся условно-патогенными, могут попасть за пределы ЖКТ и при снижении иммунитета и их накоплении стать причиной различных неспецифических гнойновоспалительных болезней (циститов, холециститов) - парентеральных эшерихиозов.

Эпидемиология. Источник энтеральных эшерихиозов - больные люди. Механизм заражения — фекально-оральный, пути передачи—алиментарный, контактно-бытовой.

Патогенез. Полость рта. Попадает в тонкую кишку, адсорбируется в клетках эпителия с помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают, освобождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишечника, вызывает диарею, повышение температуры тела и другие симптомы общей интоксикации. Выделяет экзотоксин - тяжелая диарея, рвоту и значительное нарушение водно-солевого обмена.

Клиника. Инкубационный период составляет 4 дн. Болезнь начинается остро, с повышения температуры тела, болей в животе, поноса, рвоты. Отмечаются нарушение сна и аппетита, головная боль. При геморрагической форме в кале обнаруживают кровь.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет непрочный и непродолжительный. Микробиологическая диагностика. Основной метод — бактериологический. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глюкозу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образующие сероводород) и принадлежность к серогруппе, что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологическое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.

13

4) Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам. (76)

Метод стандартных индикаторных дисков– он позволяет охарактеризовать культуру бактерий, выделенную от больного, как устойчивую, умеренно устойчивую, умеренно чувствительную, чувствительную или высоко чувствительную к тому или иному антибиотику. Д

1)Для этого из суточной чистой культуры со скошенного агара готовят бактериальную взвесь густотой 5×108 м.т./мл и засевают 1 мл, нанося на всю поверхность специальной твердой питательной среды АГВ, разлитой в чашки Петри.

2)Посев подсушивают 20-30 минут и накладывают на него стандартные маркированные бумажные диски, содержащие определенную концентрацию того или иного антибиотика.

3)Диски накладывают на расстоянии не менее 10 мм от края чашки и 20 мм друг от друга.

4)Посевы инкубируют в термостате. Через 24 часа измеряют диаметр зон задержки роста вокруг дисков. В зависимости от его величины (d в мм) культуру относят к той или иной группе чувствительности.

5)Антибиотики, к которым данный штамм бактерий оказался высоко чувствительным, и рекомендуются для лечения.

Метод серийных разведений – позволяет определить мин. ингибир. концентрацию (МИК) данного антибиотика для данного штамма.

1)В ряд пробирок разливают МПБ в объеме 1 мл, а в первую – 1,9 мл.

2)В отделльной пробирке готовят матричный р-р антибиотика с высок. конц-ей.

3)Из нее в первую пробирку вносят 0,1 мл, перемеш. и переносят 1 мл в след. пробирку,ее встряхивают и переносят 1 мл из нее в след. и т. д.

4)Из послед.пробирки ряда по окончании приготовления разведения 1 мл выливают.

5)Затем во все пробирки вносят 0,1 мл взвеси сут. культуры со скошеш.агара =>термостат(37°С на 24 ч)

6)Ч/з сутки исслед. посевы и отмечают наим. концентрацию антибиотика, вызвавш. задержку рост-это

(МИК).

В контр. пробирке(без антибиотика) бактерии размножаются, вызывая помутнение бульона.

При постановке опыта на плотной среде:

1)по 20 мл расплавл. МПА разливают в неск. флаконов и в каждый добавл.опред. кол-ва антибиотика, перемеш. и разливают по чашкам Петри.

2)После застывания среды производят посевы испыт. культур=>термостатм(37°С на 24 ч). 3)Ч/з сутки исслед. посевы и определяют МИК

Билет 6 1. Строение и функции бактериальной клеточной стенки. Особенности строения Гр(+) и Гр(–) бактерий. (8)

Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и ядра, называемого нуклеоидом.

Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.

Цитоплазматическая мембрана располагается под клеточной стенкой (между ними -

периплазматическое пространство). По строению является сложным липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная мембрана).

Функции цитоплазматической мембраны:

1.Является основным осмотическим и онкотическим барьером.

2.Участвует в энергетическом метаболизме и в активном транспорте питательных веществ в клетку, так как является местом локализации пермеаз и ферментов окислительного фосфорилирования.

3.Участвует в процессах дыхания и деления.

4.Участвует в синтезе компонентов клеточной клетки (пептидогликана).

5.Участвует в выделении из клетки токсинов и ферментов. Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной микроскопии.

Клеточная стенка.

Особенности КС Грам+ бактерий:

1.Мощная и толстая.

2.Основную часть массы КС составляет ПГ (40–90 %).

3. У Грам+ бактерий обнаружено более 100 различных химических типов ПГ.

14

5.ПГ ковалентно связан с тейхоевыми кислотами (ТК) или глицерина. Липотейхоевые кислоты фиксированы в мембране липофильными концами.

6.Нет липополисахаридов (ЛПС), содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков; белки формируют на внешней поверхности КС отдельный слой.

7.КС плотно прилегает к ЦПМ, нет периплазматического пространства.

8.Грам+ бактерии чувствительны к пенициллину и лизоциму. Пенициллин разрушает межпепдидные связи, а лизоцим — гликозидные связи.

9.ПГ многослойный.

Таким образом, основными компонентами КС Грам+: пептидогликаны, тейхоевые кислоты и полисахариды.

Особенности КС Грам– бактерий:

1.Тоньше, чем у Грам+, ее толщина 10–20 нм.

2.Содержание ПГ значительно меньше, чем у Грам+ бактерий.

3.ПГ однослойный или двуслойный, толщиной 2–3 нм.

4.У всех Грам– бактерий строение ПГ одинаково. В образовании боковых пептидных связей у Грам– бактерий участвует мезо-диаминопимиелиновая кислота. В образовании межпептидной связи участвуют мезо-диаминопимиелино-вая кислота и Dаланин.

5.ПГ не содержит ТК.

6.ПГ неплотно прилегает к ЦПМ. Только у Грам– бактерий между ЦПМ

и ПГ КС есть периплазматическое пространство. Тонкий ПГ соединен белками с наружной мембраной.

7. КС многослойная, сверху ПГ только у Грам– бактерий находится наружная мембрана (НМ) толщиной 8–10 нм. Состоит из липопротеина (ЛП), ЛПС, фосфолипидов и белков. Основной компонент НМ — билипидный слой: внутренний слой образован ЛП, а наружный — ЛПС.

ЛПС состоит из трех компонентов:

–липида А;

–кор-слоя;

–О-специфической цепи полисахарида, образованной повторяющимися идентичными олигосахаридными последовательностями. Она определяет антигенную специфичность, т. е. серовар определенного штамма бактерий, является О-антигеном.

8. Грам– бактерии менее чувствительны к пенициллину и лизоциму, чем Грам+.

Функции клеточной стенки:

1. Обеспечивает механическую защиту от воздействий окружающей среды.

Концентрация осмотически активных веществ (сахаров и солей) в клетке намного выше, чем в окружающей среде.

2. Формообразующая.

3. Транспортная: обеспечивает проникновение питательных веществ в клетку и удаление из нее продуктов метаболизма.

4. Содержит родо- и видоспецифические антигены (ЛПС Грам– бактерий, ТК Грам+ бактерий).

5. У патогенных бактерий оказывает повреждающее действие на организм и индуцирует иммунный ответ.

6. Несет на поверхности разнообразные рецепторы, в т. ч. к фагам и бактериоцинам. 7. Участвует в процессе деления.

8. Обеспечивает межклеточные взаимодействия между бактериями при конъюгации, а также между патогенными бактериями и тканями высших организмов.

15

Метод выявления клеточной стенки - электронная микроскопия, плазмолиз. Окраска по Граму. Техника окраски по Граму:

–на фиксированный мазок через фильтровальную бумагу наливают основной краситель — карболовоспиртовой раствор кристаллического фиолетового, препарат промывают;

–обрабатывают мазок раствором Люголя 1 мин до почернения;

–96° этиловым спиртом в течение 30–60 с;

–промывают водой;

–окрашивают контрастным красителем водным фуксином 1–2 мин;

–промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсионной системой. Грам+ бактерии после обработки спиртом - темно-фиолетовыми.

Грам– бактерий в розово-красный цвет.

L-формы бактерий, их медицинское значение L-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки (протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к размножению.

2. Понятие о госпитальных и внутрибольничных инфекциях. Роль условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе ВБИ. (47)

Внутрибольничная инфекция –заболевание, связанное с пребыванием, лечением, обследованием или обращением человека за медицинской помощью в МО, или заболевание сотрудника, вследствие его работы в данной организации.

Инфекционный процесс - это патологический процесс в организме, возникающий вследствие взаимодействия между патогенными микроорганизмами и иммунной системой больного, сопровождающийся размножением микроорганизмов, повреждением тканей и изменением реактивности макроорганизма.

16

Эпидемический процесс - это возникновение и распространение инфекционных заболеваний в человеческом обществе.

Наибольшее распространение получили следующие виды ВБИ:

1.Инфекции мочевыделительной системы (уретриты, циститы, пиелонефриты).

2.Гнойно-септические инфекции (сепсис, пневмония, гнойничковые поражения кожи, нагноения послеоперационных ран и т.д.).

3.Кишечные инфекции (сальмонеллез, гепатит А, дизентерия).

4.Гемоконтактные инфекции (гепатит В, С, ВИЧ).

Для возникновения внутрибольничного очага необходимо наличие:

1.Источника возбудителя инфекции.

2.Механизма передачи. Вследствие попадания в организм больничной микрофлоры во время пребывания больного в стационаре; Источниками заражения могут быть больные, посетители и медперсонал учреждения.

Госпитальная инфекция – более широкое понятие, объединяющее внутрибольничное заражение и заболевания, которые возникают в стационаре и обусловлены заражением не только в нем, но и до поступления в стационар.

Болезни: - инфекционные болезни, возникающие при нахождении больного в стационаре с какой-либо другой патологией; - заболевания медицинского персонала, полученные при уходе за больными;

- «лабораторные» инфекции – гепатиты, брюшной тиф, паратифы и ВИЧ-инфекция, передающиеся при взятии крови у пациента на исследование; - ятрогенные инфекции, возникающие при выполнении инвазивных методов обследования и лечения.

Большую группу ВБИ составляют раневые инфекции, инфекции бронхолегочной и мочеполовой систем, сосудистого русла и ряд других.

Основными путями передачи ВБИ являются воздушно-капельный (аэрозольный), контактнобытовой, пищевой (алиментарный) и искусственный (артифициальный).

Особенности нозокомиальной инфекции:

o Возбудители госпитальной инфекции устойчивы к большинству антибиотиков и антисептиков; o Развитию госпитальной инфекции предрасположены лица со сниженной иммунобиологической резистентностью организма (вследствие болезни, перенесенной операции и др.);

o Отмечается массовое инфицирование со сходной клинической симптоматикой одним штаммом микроорганизма.

Профилактика госпитальной инфекции:

Выдача одноразового белья, полотенец, перчаток; обязательная дезинфекция матрацев, подушек, одеял;

Гигиена медперсонала (использование спецодежды, обязательная вакцинация, дезинфекция рук персонала перед прямым контактом с больным и после него; выявление носительства стафилококка);

Организационные мероприятия (разделение гнойных и чистых палат, отделений, операционных и оборудования;

ограничение приема посетителей, контроль за использованием антибактериальных препаратов, контроль стерильности инструментов, перевязочного материала, рук хирурга, кожи, операционного белья сокращение длительности).

3.Стафилококки. Таксономия и биологическая характеристика. Эпидемиология и

патогенез заболеваний. Роль в патологии человека. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.

(105)

Стафилококки (род Staphylococcus)

Стафилококки относятся к семейству Staphylococcaceae роду Staphylococcus,

наиболее часто встречающиеся — S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus и S. lugdunensis.

Морфология. Стафилококки представляют собой округлые клетки диаметром около 1 мкм. В мазках располагаются несимметричными гроздьями. Грамположительные, с возрастом бактерии могут стать грамотрицательными. Легко окрашиваются анилиновыми красителями. Спор не образуют, неподвижны, некоторые образуют капсулу.

17

Культуральные свойства. Стафилококки нетребовательны к питательным средам, растут в широких температурных границах, оптимальная температура

для них 35–37 qС. Размножаются в аэробных и анаэробных условиях (факультативные анаэробы) — на простых средах при рН 5,0–9,0, лучше при рН 7,2–7,4.

На бульоне наблюдается диффузное помутнение, на агаре образуют колонии круглой формы от 1 до 5 мм, с блестящей поверхностью и ровными краями. Если стафилококки образуют пигмент, колонии приобретают соответствующий

цвет: золотисто-желтый, лимонно-желтый и др. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективной средой для них служат среды с высокой концентрацией соли — желточно-солевой агар (ЖСА) или молочно-солевой агар. На кровяном агаре стафилококки, особенно вирулентные (S. aureus), дают ярко выраженный гемолиз.

Биохимические свойства. они расщепляют глюкозу, лактозу, сахарозу

идругие углеводы с образованием кислоты, но без газа; выделяют сероводород, восстанавливают нитраты. Индол не образуют. Продуцируют каталазу, превращая перекись водорода в воду и кислород.

Антигенная структура стафилококков сложная и вариабельная.

Протеин А клеточной стенки стафилококков неспецифически связывается с Fc-фрагментом IgG, при этом Fab-фрагмент молекулы остается свободным

иможет соединяться со специфическим антигеном, что используется в диагностике (реакция коагглютинации).

Антигенными свойствами обладают капсула и пептидогликан. Тейхоевые кислоты клеточной стенки являются видоспецифичными антигенами (для

S. aureus — рибиттейхоевая, для S. epidermidis — глицеринтейхоевая, для S. saprophyticus — оба типа кислот).

Факторы патогенности. Стафилококки — условно-патогенные бактерии. Факторами патогенности являются капсула, компоненты клеточной стенки (белок А, пептидогликан, тейхоевые кислоты), токсины и ферменты.

Чаще заболевания вызываются штаммами S. aureus, имеющего наибольший спектр факторов патогенности: токсины и экзоферменты.

S.aureus может выделять токсины (цитолитические, энтеротоксины и эксфолиативные):

xгемолизины (D-, E-, J-, G-) — мембранотоксины, токсичные для эритроцитов, лейкоцитов, макрофагов, фибробластов;

xлейкоцидин избирательно разрушает лейкоциты;

xэнтеротоксины (9 серологических групп) — термостабильные экзотоксины (инактивируются при 100 qС в течение 30 мин), которые, накопившись в продуктах питания, вызывают пищевые интоксикации, сопровождающиеся рвотой и диареей;

xтоксин синдрома токсического шока (TSST-1) обладает нейротропным

и вазотропным эффектом;

x эксфолиативный токсин, разрушающий межклеточные контакты в гранулярном слое эпидермиса, вызывает синдром «ошпаренной» кожи.

Экзоферментами S. aureus являются:

x плазмокоагулаза (коагулаза), превращающая фибриноген в фибрин, препятствующий контакту с фагоцитами; по способности коагулировать

плазму стафилококки делятся на коагулазопозитивные (S. aureus) и коагулазонегативные (S. epidermidis, S. saprophyticus);

x каталаза, защищающая от действия кислородзависимых бактерицидных механизмов фагоцитов;

x гиалуронидаза, разрушающая гиалуроновую кислоту соединительной ткани;

x стафилокиназа (фибринолизин), разрушающая фибриновые сгустки; x дезоксирибонуклеаза, расщепляющая ДНК, разжижающая гной.

Резистентность. Стафилококки переносят высушивание в течение 6 мес., Они устойчивы к нагреванию — при 70–80 qС погибают через

18

20–30 мин. Сухой жар убивает бактерии за 2 ч. Чувствительны к действию применяемых антисептиков

идезинфектантов, например 15% раствор хлорамина уничтожает стафилококки через 2–5 мин, 3% раствор фенола — через 15–20 мин.

Стафилококки быстро формируют устойчивость к антибактериальным препаратам, в том числе к антибиотикам.

Эпидемиология. Источником инфекции могут быть больные со стертыми формами стафилококковой инфекции, эндогенные очаги хронической инфекции (например, хроническая стафилодермия, хронический тонзиллит и др.) или бессимптомные носители.

Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет медицинский персонал лечебнопрофилактических учреждений, который может быть носителем госпитальных штаммов стафилококка. При экзогенном попадании возбудителя (чаще всего в госпитальных условиях) входными воротами являются кожа, слизистые оболочки ротовой полости, дыхательных путей и ЖКТ, конъюнктива век, пупочная ранка

идр. На месте внедрения развивается воспаление с некрозом и нагноением. При сниженной резистентности организма возбудитель и его токсины проникают из очага инфицирования в кровь. Наступает бактериемия, развивается интоксикация.

Клиника. Они способны поражать практически все органы и ткани. Стафилококки могут быть одной из причин пневмонии, эмпиемы, остеомиелита, артритов, менингита, послеоперационных гнойных осложнений, импетиго,

фурункулеза, карбункулов и других гнойно-воспалительных заболеваний.

Стафилококки, продуцирующие энтеротоксин, вызывают пищевую интоксикацию при пищевых отравлениях, которые проявляются рвотой, болями в животе, диареей после употребления в пищу инфицированных кондитерских

изделий с кремом, консервов, мясных и овощных салатов. Стафилококки могут быть причиной следующих синдромов:

xсиндром «ошпаренных младенцев» (болезнь Риттера)

x синдром «ошпаренной кожи» (синдром Лайелла) x синдром токсического шока

Лечение. Иногда для лечения применяют стафилококковый бактериофаг, антитоксическую полученные из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. Профилактика. заключается в строгом соблюдении правил асептики, антисептики, дезинфекции и

стерилизации для профилактики внутрибольничной инфекции, в плановом обследовании медицинского персонала на носительство стафилококков. стафилококковый анатоксин.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат кровь, гной из абсцессов, отделяемое воспалительных очагов и ран, жидкость из серозных полостей, мокрота, моча, слизь из зева и носа, а при подозрении

на пищевое отравление — пищевые продукты, рвотные массы, промывные воды желудка, а также смывы с рук персонала и предметов окружающей среды

Бактериологический метод

1 день. Посев материала тампоном на (желточно - солевой агар ЖСА) или (кровяной агар). Для накопления культуры отсевают тампон на одну из жидких накопительных сред – солевой бульон или мясо – пептонный бульон (МПБ). Инкубируют при 37ºС 18 ч (КА, солевой бульон, МПБ) и 48 ч (ЖСА).

2-3 день. На ЖСА: белые или кремовые колонии, гладкие с ровными краями, диаметром 2-3 мм. При наличии фермента лецитиназы вокруг колонии образуется радужный венчик.

На КА: наличие или отсутствие гемолиза. На солевом бульоне, МПБ – равномерное помутнение, образование пленки.

Бактериоскопия: Из ½ части подозрительной колонии готовят мазок, окрашивают по Граму. Обнаруживаются грам (+) кокки. Получение чистой культуры для изучения биохимических свойств: Оставшуюся часть колонии отсевают на скошенный мясопептонный агар (МПА) для накопления и сохранения чистой культуры (ЧК).

3-4 день. 1.Проводят видовую идентификацию микроорганизма. Изучение биохимических свойств: со скошенного МПА ставят пробы: - определение фермента плазмакоагулазы (РПК). - определение ДНКазы. - ферментация маннита. - ферментация мальтозы. - наличие гемолиза. 2.

19

2. Исследование крови на стерильность. Кровь в количестве 5-10 мл засевают асептически в 2 флакона с питательной средой в соотношении 1: 10. 1-й флакон - «двойная среда» для роста факультативных анаэробов - скошенный МПА с 50-100 мл МПБ с 1% глюкозой. 2-ой флакон100 мл тиогликолевой среды – для роста анаэробов.

Посевы инкубируют 10 суток с ежедневным просмотром.

Серологический метод.

Определение стафилококковых энтеротоксинов. Используют метод иммуноферментного анализа

(ИФА). Навеску 8 пищевого продукта вносят в лунку плашки, на которой предварительно адсорбированы антитела к энтеротоксинам типов А, В, С, Д, Е. При наличии энтеротоксина к образующемуся комплексу АГ+АТ присоединяются специфичеческие АТ, меченными ферментом пероксидазой.

Методы постановки проб для идентификации.

1.Реакция плазмокоагуляции (РПК). В пробирку с 0,3 мл цитратной кроличьей плазмы вносят петлю суточной культуры бактерий. Результат регистрируют через 4, 18 часов инкубации при 37ºС. при положительной реакции образуется студнеобразный сгусток плазмы.

2.Определение ДНК-азы. На поверхность МПА, содержащего ДНК наносят петлей штрихами культуру. После инкубации при 37С в течение 18-24ч поверхность агара заливают 1N раствором соляной кислоты. Вокруг колоний, образующих ДНКазу образуется зона просветления.

3.Ферментация углеводов. Культуру петлей отсевают на МПА с 1% субстратом (углевод) и индикатором. Инкубируют при 37С в течение 18-24ч. При ферментации углевода цвет выросших колоний меняется (с зеленого на желтый при использовании индикатора бромтимолового синего).

4.Наличие гемолиза. На сектор чашки с КА петлей засевают исследуемую культуру. После инкубации при 37С в течение 18-24ч учитывают наличие гемолиза вокруг колоний.

4. Реакция преципитации. Механизм, компоненты, способы постановки, области применение. (81)

Реакция преципитации — это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена c антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

Реакции преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. К вариантам реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы относят двойную иммунодиффузию по Оухтерлони, радиальную иммунодиффузию, иммуноэлектрофорез и др.

Ее используют при диагностике сибирской язвы, чумы, туляремии, менингита.

Реакцию кольцепреципитации

Ставят в узких преципитационных пробирках с иммунной сывороткой, на которую наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.

Если в качестве антигенов используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов или тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи при сибирской язве).

Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони.

Растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после его затвердевания в нем вырезают лунки размером 2–3 мм.

Вэти лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу.

Вместе встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы.

Реакция радиальной иммунодиффузии.

Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях.

Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Составляют калибровочную кривую, по которой определяют концентрацию антигена в исследуемом образце.

Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.

20