6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Лабораторный справочник СИНЭВО

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

гатов, которые могли бы интерферировать с количеством тромбоцитов и, возможно, с количеством лейкоцитов).

III. Оценка лейкоцитов по мазку

5 Проверка количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, указанной гематологическим анализатором: лейкоцитоз с нейтрофилией у взрослых и детей, лимфоцитоз у взрослых и детей, эозинофилия, моноцитоз, абсолют5 ная базофилия, нейтропения, панцитопения.

5 Проведение лейкоцитарной формулы, если она не была указана гемато5 логическим анализатором.

5 Обнаружение аномальных клеток.

Необходимая обработка после взятия пробы: мазок может быть выпол5 нен на предметном стекле (22x22 мм) или покровном стекле (мазок с бахро5 мой), которые должны быть хорошо высушены и обезжирены, без пыли/гря5 зи. Капля крови размазывается на поверхности предметного стекла и про5 сушивается на воздухе. Мазки, сделанные на предметном стекле, обеспечи5 вают равномерное распределение крови на поверхности поверхностного стекла; с другой стороны, предметные стекла менее хрупкие и более просты в обращении и маркировке, но имеют повышенную характерность к скопле5 нию лейкоцитов больших размеров по краям мазка края и на бахроме маз5 ка. Мазок требуемого качества должен быть ~ 3 см в длину, 2 см в ширину, равномерно вытянутый, с короткими краями бахромы (< 0,3 см), полем зре5 ния в середине на 151,5 см, и толстым полем такой же длины на другом кон5 це. После высыхания мазки фиксируют при помощи безводного метанола и окрашиваются по методу Май5Грюнвальд5Гимза. Краситель содержит мети5 леновый синий (превращаясь в метиленовый азур с дихромовой кислотой)

иэозин. Метиленовый азур является одним из основных красителей, окра5 шивающий в сине5фиолетовый цвет кислотные компоненты клетки (нуклеи5 новые кислоты, белки), а эозин взаимодействует со щелочными клеточны5 ми элементами, придавая красно5розовый оттенок цитоплазматическим компонентам и гемоглобину. Исходя из своих свойств, лейкоцитарные гра5 нуляции окрашиваются по5разному, давая возможность проводить их мор5 фологический анализ: грануляции нейтрофилов являются слабощелочными

иокрашиваются плохо аузорофильным компонентом, эозинофильные гра5 нуляции содержат высокой степени щелочное соединение и хорошо окра5 шивается эозином, а базофильные грануляции содержат преимущественно кислые белки и окрашиваются в пурпурно5синий цвет.

Метод исследования: микроскопическое исследование, первоначально на низкой мощности объектива (с объективом 10x/20x) для определения цвета и распределения клеток. Также можно произвести оценку количества лейкоцитов, наличие анормальных клеточных элементов (бластов, эритро5 бластов), агрегаций тромбоцитов, эритроцитарных агглютинатов/скоплений. Затем мазок исследуется при помощи иммерсионного объектива с 1005кратным увеличением, оценивая каждый тип клеток по количественным

икачественным аномалиям.

Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина»:

5 отсутствие морфологических аномалий.

Интерпретация результатов:

I. Определение эритроцитов в мазке: эритроциты оцениваются на предмет изменения размера, формы, распределения гемоглобина и наличия внут5 риклеточных включений. Оптимальное изучение морфологии эритроцитов проводится в области мазка, где красные кровяные клетки находятся бок о

бок, но не перекрываются друг другом. Как правило, эритроциты выглядят круглой формы, без ядра, одинаковые по размеру и форме, с диаметром среднего размера 758 мкм (по сравнению с ядром одного малого лимфоци5 та), с бледной областью у центра, не превышающей 1/3 диаметра клетки, окруженной окантовкой гемоглобина красно5оранжевого цвета.

Морфологические разнообразия эритроцитов

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

II. Определение тромбоцитов в мазке: определяется число и морфология тромбоцитов. Нормальные тромбоциты выглядят как маленькие цитоплаз5 матические фрагменты голубого цвета с малыми диффузными азурофиль5 ными грануляциями (красно5фиолетового цвета), 254 мкм в диаметре, овально5круглые. В мазках капиллярной крови без антикоагулянта тромбо5 циты выглядят в виде агглютинатов или агрегаций, распределенных нерав5 номерно в поле зрения.

Морфологические аномалии тромбоцитов

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

III. Оценка лейкоцитов в мазке: исследуется морфология и распределение лейкоцитов. Определение количества лейкоцитов может проводиться путем просмотра мазков при помощи объектива слабой мощности. Необходимо идентифицировать и подсчитать минимум 100 клеток для определения лей5 коцитарной формулы. Лейкоциты, обычно присутствующие в мазке, являют5 ся нейтрофилами, эозинофилами, базофилами, лимфоцитами и моноцита5 ми. Наличие миелоидных предшественников (метамиелоцитов, миелоцитов, промиелоцитов, бластов) или отклонение «влево» показателей лейкоцитар5 ной формулы является ненормальным, и возникает при бактериальной ин5 фекции, интоксикации, некрозе тканей, кровотечениях, гемолизе, карцино5 мах, лейкемоидных реакциях, хронических миелопролиферативных синдро5 мах и т.д. Лейкоэритробластная картина состоит в наличии в периферичес5 кой крови миелоидных и предшественников и нормобластов (эритроблас5 тов), обычно ортохроматофильных, независимо от количества лейкоцитов.

Возможные причины:

5 У новорожденных детей, при тяжелых инфекционных заболеваниях, постспленэктомии, остром гемолизе, тяжелом кровотечении, талассемии средней степени, мегалобластной анемии, тяжелой железодефицитной ане5 мии, серповидной анемии, легочных и сердечных хронических заболевани5 ях, заболеваниях печени.

5 Медуллярная инфильтрация: острые и хронические миело5 и лимфопро5 лиферативные заболевания, миелодиспластические синдромы (прелейкми5 ческие), гранулематозные заболевания (туберкулез, грибки), медуллярные метастазы, миелофиброз.

Морфологические аномалии лейкоцитов

Морфологические аномалии лимфоцитов

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

Морфологические аномалии лейкоцитов

пурпурно5красные включения, представляющие собой сросшиеся азурофильные зерна (миелобласты, атипичные промиелоциты) или вакуоли (лимфобласты)

саналогичной

морфологией

лимфобластов

(лимфобластная лимфома), зрелых лимфоцитов (лимфома малых лимфоцитов), могут быть в виде ядра

сразломами (особенно Т5клеточные лимфомы), иногда – с заметными ядрышками (гигантоклеточная лимфома, иммуннобластная лимфома)

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

Иммуногематологические исследования

КОД 4003. Группа крови

Система групп крови (АВ0) состоит из одного или более антигенов, регу5 лируемых одним геном или комплексом из двух или более генов, тесно свя5 занных между собой. Также были выявлены и другие антигены, которые не были отнесены к установленным системам. Антигенами эритроцитов могут быть белки, гликопротеины или гликолипиды. Большинство из них синтези5 руются эритроцитами, однако некоторые антигены, например, принадлежа5 щие к системе Льюиса, адсорбируются из плазмы на мембране эритроци5 тов. Некоторые антигены характерны именно для эритроцитов, в то время как другие встречаются и в других клетках организма. Определение группы крови имеет важное практическое значение для трансфузионной терапии. Поэтому люди, не обладающие определенными эритроцитарными антигена5 ми крови, могут вырабатывать аллоантитела при контакте с кровью, содер5 жащие эти антигены в ходе трансфузии с продуктами крови или во время беременности. Антитела, которые взаимодействуют с эритроцитарными ан5 тигенами, вызывают гемолитические трансфузионные реакции замедлен5 ного или быстрого типов, и гемолитическую болезнь новорожденных. Сис5 тема группы крови АВ0 является самой важной системой групп крови, пото5 му что когда антигены не выражены на поверхности эритроцитов, соответ5 ствующие антитела всегда присутствуют в плазме, провоцирующие факто5 ры для выработки антител представлены различными факторами среды, та5 кими как бактерии (например, Е.соli), которые представляют на поверхнос5 ти структуры, практически идентичные углеводам AB0. Образующиеся ан5 титела представляют собой смесь иммуноглобулинов IgM (преимуществен5 но) и IgG, активных при 37 °С и способных активировать комплемент, но вы5 сокая плотность антигенных сайтов на мембране эритроцитов позволяет связывать большое количестве антител, приводя тем самым при трансфу5 зии крови, несовместимой в системе АВ0, к острым гемолитическим транс5 фузионным реакциям. Существуют три аллельных гена в системе АВ0 (А, В и 0), которые наследуются по Менделю. А и В являются кодоминантными ал5 лелями, а 0 является рецессивным аллелем. Эти три гена определяют четы5 ре фенотипа: А, В, АВ и 0. У лиц с фенотипом А или В могут быть гетерози5 готными (A0, B0 соответственно), или гомозиготными (АА и ВВ соответ5 ственно). Антигены системы АВ0 локализуются на олигосахаридных цепоч5 ках, являющихся гликосфинголипидами. Гены АВ0 системы непосредствен5 но не кодируют антигены, а кодируют ферменты, которые добавляют специ5 фические сахара в субстрат из мембраны эритроцитов (вещество Н): N5аце5 тил5галактозамин для гена А и галактоза – для гена B; аллель 0 кодирует не5 активную трансферазу, таким образом, что ни один из специфических саха5 ров не прикрепляется к мембране эритроцитов. Ген H кодирует фукозил5 трансферазу, которая добавляет группы L5фукозы к галактозе в конце оли5 госахаридной цепи, в результате чего образуется вещество Н. Редкая ал5 лель, наследуемая иногда в локусе Н называется h, которая кодирует неак5 тивную трансферазу. При гомозиготных HH (фенотип Бомбей) вещество H не присутствует на поверхности эритроцитов, а трансферазы А и Б, даже ес5 ли они присутствуют, не могут добавить специфические сахара, определя5 ющие антигенную специфичность А или B. Клиническая значимость фено5 типа Бомбей проявляется в способности этих лиц вырабатывать не только анти5А и анти5B, но и анти5H, что делает трудным поиск крови, совместимой

для трансфузии, так как только кровь от человека с фенотипом Бомбей яв5 ляется совместимой, и такого найти бывает крайне сложно. Мутации генов А и В приводят к замене аминокислот на уровне трансфераз, что означает низкий уровень экспрессии антигенов А и В, классифицированных в качес5 тве подгрупп, наиболее распространенных по связыванию с геном А, А1 и А2. Подгруппы А и В являются клинически значимыми для доноров крови, поскольку из5за слабой выраженности антигена могут быть фенотипирован5 ны как принадлежащие к группе 0, и перелиты реципиенту с 0 группой, и мо5 гут вызвать внутрисосудистый гемолиз. Все иммуннокомпетентные лица вырабатывают естественные антитела (изоагглютинины или изогемолизи5 ны) к отсутствующим у них антигенам группы AB0 (H). Анти5А и анти5В, как правило, обнаруживаются на 356 месяце после рождения ребенка, а в воз5 расте 5 лет титр антител достигает максимального пика и сохраняется в те5 чение всей взрослой жизни. Титр антител IgM может постепенно уменьшать5 ся с возрастом. Анти5А и анти5B антитела присутствуют и у тех, кого слабые варианты А и В. Новорожденные обычно не имеют значительного количест5 ва анти5А и анти5В в плазме крови, за исключением рожденных от аллои5 мунных матерей, у которых могут присутствовать в кровотоке материнские IgG антитела, которые проходят плацентарный барьер. Антитела AB0 не яв5 ляются основной причиной гемолитической болезни новорожденных, в свя5 зи с ингибированием антител растворимыми веществами А и/или Б, кото5 рые присутствуют в крови, а также растворимых антигенов А или В, присут5 ствующих в других клетках, за исключением эритроцитов; также сродство связывания антител к молекулам сахаров выражено слабее, чем сродство антител к белковым молекулам, таких как антиген D. Гемолиз более вероя5 тен, если мать имеет группу 0, а дети – группу A.

Подготовка пациента: натощак.

Материал: венозная кровь.

Пробирка: вакутайнер без консервантов.

Условия обработки и стабильность пробы: образец хранится 48 часов при температуре 258 °C.

Метод: гелевая методика. Анализатор: гелевые карты. Тест#системы: DiaMed AG (Испания).

Основные показания к назначению анализа:

1.Перед проведением гемотрансфузией.

2.Перед инвазивными или хирургическими процедурами с возможными геморрагическими осложнениями, которые могут потребовать экстренного переливания крови.

3.Иммунологический мониторинг дородового и послеродового периода матери и ребенка.

4.У доноров крови.

5.Для совместимости групп AB0 при пересадке органов. Интерферирующие факторы: результат определения группы крови дол5

жен рассматриваться двумя специалистами и должен быть подтвержден обычно путем второй пробы крови.

Возможные искажения анализа результата по техническим ошибкам: 5 бактериальное загрязнение; 5 наличие микросгустков (ложная агглютинация);

5 не соблюдается: пропорции эритроцитов / сыворотки, порядок капельно5 го введения гемотест5сывороток (конфликт5агглютинация), время чтения

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

результата; 5 позднее чтение; сухие края (ложная агглютинация), раннее чтение результата (отсутствие агглютинации или слабая агглютинация).

Артефакты, вызываемые эритроцитами

Ложные агглютинации:

а) наличие сгустков (псевдоагглютинация) вследствие использования ма5 кромолекулярных растворов, нарушение коагуляции, не полностью коагули5 рованные образцы крови, гиперфибриногенемия, продукты распада фибри5 на, фибринолитики, диспротеинемия, парапротеинемия, криоглобулинемия, увеличение факторов острой фазы, лекарственные препараты (высокие до5 зы гепарина), ревматоидные факторы, повышение уровня холестерина, об5 щего билирубина, лейкоцитарных ферментов;

б) аутоагглютинация:

•наличие холодовых агглютининов;

•эритроциты, захваченные аллоантителами (у новорожденных детей – с несовместимостью по системе Rh, АВ0), пациенты после гемотрансфу5 зии несовместимой кровью;

•определение группы крови в пуповинной крови;

•наличие терапевтических иммунных комплексов;

с) полиагглютинация (при септицемии, вызванной грамотрицательными палочками, хорошо выражены криптоантигены из5за ферментативного дей5 ствия бактериальных агентов, распознанных антителами, присутствующими

вбольшинстве человеческих сывороток). Отсутствие агглютинации:

•Архивный образец крови.

•Слабые антигены (у новорожденных или у недоношенных детей).

•Наличие подгрупп А или В по рецессивному типу.

•При лейкемии, лимфоме, болезни Ходжкина.

•У пациентов с группой А или В кровь с переливанием группы крови 0.

•Фетоплацентарное кровотечение.

•Наличие большого количества вещества А или В в плазме крови при раке желудка, поджелудочной железы, которое нейтрализует тест5антитела.

Код 4003. Резус#фактор

Антигены системы группы крови Rh закодированы двумя генами: RHD и RHCE. RHD кодифицирует антиген D, в то время как RHCE кодифицирует антигены Cc и Ее. Антиген d используется для отметки отсутствия антигена D. RHD и RHCE кодируют схожие полипептиды, которые на мембране эрит5 роцитов формируют комплекс с гликопротеином, связывающим Rh. Функ5 ция антигенов Rh до конца неизвестна, хотя, учитывая фенотип клеток Rh 0, предполагается, что антигены Rh могут играть структурную роль в мембра5 не эритроцитов.

Структура антигенов Rh предполагает наличие транспортных белков, а гликопротеин, связанный с Rh, может играть определенную роль в транс5 порте аммиака. Существуют 45 антигенов, которые были отнесены к систе5 ме групп крови Rh, среди которых наиболее распространенными и важными являются D, C, с, E и е, но возможно стать аллоиммунными на антигены C, с, E и е при переливании крови и беременности, но они гораздо менее им5 муногены, чем D. Менее чем 3% от общего населения, подверженного дей5 ствию антигенов C, с, E, е становятся аллоимунными, поэтому предтрансфу5 зионное тестирование обычно не проводится на эти антигены. После анти5

генов А и В антиген D свидетельствует о самой высокой иммуногенности ан5 тигена (в 20 раз выше, чем у большинства других Rh5антигенов). При прове5 дении гемотрансфузии D5положительных эритроцитов почти 80% от D5нега5 тивных реципиентов вызывают образование анти5D антител. К тому же, ан5 ти5D иммунизация способствует дальнейшему синтезу антител, по сравне5 нию с другими антигенами в рамках группы крови или за пределами систе5 мы Rh. Также антиген D вовлечен в 95% случаев гемолитической болезни новорожденных. Человек считается «резус положительным», если его эрит5 роциты выражены антигеном D, а термин «резус отрицательный» относится к случаю, когда отсутствует антиген D. Отсутствие антигена встречается у 15517% людей белой расы и реже – у других групп населения. У «белых лю5 дей» отсутствие антигена D связано с делецией гена RhD, в то время как у азиатов и афроамериканцев связано с инактивацией генов, а не их делеци5 ей. Некоторые эритроциты, выражающие D5антиген, требуют длительной инкубации с анти5D реагентом для появления реакции агглютинации. Эти эритроциты считаются положительным D антигеном, и описаны как рецес5 сивный D, ранее известные как Du (менее чем в 1% случаев). Считается, что фенотип рецессивного D гена появляется в ходе одного из трех механизмов:

1)Наследственная передача RHD гена, который кодирует белок D с ослаб5 ленной антигенной экспрессией. Более распространена среди чернокожего населения и связана с гаплотипом DCE, а среди белого населения связана

сгаплотипами DCе или DсE.

2)Взаимодействие гена D с другими генами. Люди с геном D в транспози5 ции относительно гена С (например, DсE / Се) представляют ослабленную экспрессию гена D.

3)Наследственная передача гена, кодирующего антигенный комплекс D, в котором отсутствуют определенные эпитопы, называется и неполным D. Данные лица могут вырабатывать анти5D в случае их трансфузии с D5поло5 жительными эритроцитами. Среди них DVI представляет самое малое коли5 чество эпитопов и данные лица представляют самый высокий риск при им5 мунизации, но менее значимый, чем D5негативные лица. Доноры D5рецес5 сивного гена должны считаться Rh(D)5положительными и важно, что они не должны быть определены ошибочно как «Rh негативные», потому что D5 слабый антиген может вызвать иммунный ответ, если перелить через кровь Rh5отрицательным лицам. Лица с D5слабым могут быть перелиты с Rh5по5 ложительной кровью (исключение – DVI), а беременные не нуждаются в про5 филактике с анти5D иммуноглобулином. В случае использования соответ5 ствующего моноклонального анти5D реактива большинство антигенных де5 терминантов, включенные прежде как Du, не должны отличаться от D5гена при обычных условиях. Фенотип Rh0 появляется, когда эритроциты не про5 являют свойств Rh5антигена минимум двумя возможными механизмами: на5 следственная передача гена, который кодирует гликопротеин, связываю5 щий анормальный Rh, с нормальными генами RHD и RHCE (или наслед5 ственность) определенной мутации гена RHCE связана с отрицательным D геном. Фенотип Rh0 связан со структурными аномалиями эритроцитов и ге5 молизом. Данные лица вырабатывают аллоантитела, взаимодействующие со всеми эритроцитами, за исключением Rh0. Анти Rh0 антитела возникают при аллоиммунизации вследствие несовместимых трансфузий Rh5системы или при беременности. Очень редко могут вырабатываться естественные антитела в системе Rh без известных антигенных стимуляторов (анти5Е, ан5

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

ти5СW), в большинстве случаев несоответствующих с точки зрения клиники. Также при иммунных гемолитических анемиях аутоантитела часто облада5 ют анти5Rh5активностью. Большинство анти5Rh5антител являются IgG, осо5 бенно IgG1 и IgG3 (неполные агглютинины), хотя некоторые могут быть IgM и обычно не активируют комплемент. Агглютинирующие антитела типа IgM являются обычно транзиторными и появляются в начале иммунизации. На5 иболее распространенными являются анти5D5антитела, которые могут про5 воцировать гемолитическую болезнь новорожденных и тяжелые гемолити5 ческие трансфузионные реакции. Их частота значительно снизилась сразу с анти5D профилактикой у Rh5отрицательных беременных с резус положи5 тельным плодом. Aнти5C5, C5, E5антитела связаны с гемолитической болез5 нью новорожденных и легкими гемолитическими трансфузионными реакци5 ями. Типирование резус5фактора эритроцитов производится с помощью ан5 ти5D моноклональных сывороток, которые взаимодействуют в соленой сре5 де и содержат как человеческие IgM (которые не являются категорией DVI), так и поликлональные IgG5антитела, которые могут быть использованы и в антиглобулиновом тесте на D5рецессивный фактор. При подготовке анти5 Rh5сыворотки добавляется человеческий или бычий сывороточный альбу5 мин, который изменяет диэлектрическую константу среды и способствует агглютинации резус5положительных эритроцитов.

Подготовка пациента: натощак.

Материал: венозная кровь.

Пробирка: вакутайнер без консервантов.

Условия обработки и стабильность пробы: образец хранится 48 часов при температуре 258 °C.

Метод: гелевая методика с моноклональными антителами5D. Анализатор: гелевые карты.

Тест#системы: Diagnostic Grifols (Швейцария).

Основные показания к назначению анализа:

1.Перед гемотрансфузией.

2.Перед некоторыми инвазивными или хирургическими процедурами с возможными геморрагическими осложнениями, которые могут потребовать переливания крови.

3.Дородовой и послеродовой иммуногематологический мониторинг мате5 ри и ребенка.

4.Доноры крови.

Интерпретация результатов: полное определение фенотипа Rh назнача5 ется донорам крови, его следует учитывать при переливании крови у дево5 чек и женщин в период менопаузы, у больных, постоянно подвергающихся трансфузиям и у реципиентов несоответствующих антиэритроцитарных ан5 тител.

•Rh(D)5положительные, если получены результаты, ясно положительные с обеими анти5D тест5сыворотками, а аутоконтроль – негативный;

•Rh(D)5отрицательны, если получены явно негативные результаты с обеи5 ми анти5D тест5сыворотками, независимо от результатов аутоконтроля.

Дополнительное тестирование является обязательным, если получены сла5 бо положительные результаты или противоречивые результаты с тест5сыво5 ротками, а самоконтроль – негативный, а также и если получены положитель5 ные результаты с обеими тест5сыворотками, а аутоконтроль – положительный.

У доноров, в случае если первичный тест на Rh D является отрицатель5 ным, необходимо проводить второе тестирование для выявления рецессив5

ного D5фактора (это не является обязательной процедурой для реципиентов крови, которым нужно провести переливание крови с резус5отрицательным фактором). К тому же, определение наличия рецессивного D5фактора у бе5 ременных женщин исключает ненужное лечение анти5D иммуноглобулином. Перед тем, как определить пациента как D5рецессивного, необходимо уста5 новить факт, что больному не проводилось за последнее время перелива5 ние крови с Rh+ эритроцитами.

Интерферирующие факторы:

Ложноположительные реакции

1.Эритроциты в виде столбика монет.

2.Полиагглютинация.

3.Гемолитические анемии с тепловыми аутоантителами (наличие антител IgG на поверхности эритроцитов) – повторное определение группы с реаген5 том, из которого удален альбумин, который содержит анти5D агглютинирую5 щие антитела, способные агглютинировать с эритроцитами в солевой сус5 пензии (анти5D солевой).

Ложноотрицательные реакции

1.Гемолитическая анемия новорожденных (блокировка D5антигенных си5 тусов материнскими антителами).

2.У лиц с рецессивным Rh D геном возможна слабая и поздняя агглюти5 нация.

ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ ВИДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ИССЛЕДОВАНИЕ КАЛА

КОД 4010. Копрограмма

Диарейный синдром по частоте встречаемости занимает третье место среди состояний, с которыми пациенты обращаются за медицинской помо5 щью. Хотя у большинства пациентов происходит самоизлечение, существу5 ют и тяжелые формы, которые характеризуются частым стулом жидкой кон5 систенцией (часто – водянистой), с большими потерями жидкости, что мо5 жет приводить к водно5электролитическому дисбалансу, сопровождающего5 ся тяжелыми нарушениями гемодинамики (сердечно5сосудистый коллапс), способной привести к смертельному исходу. При микроскопическом иссле5 довании определяют основные элементы кала: мышечные волокна, расти5 тельную клетчатку, нейтральный жир, жирные кислоты, клеточные элемен5 ты, клетки кишечного эпителия, слизь и другие элементы.

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

Основные требования к назначению анализа:

1.Диагностика заболеваний желудочно5кишечного тракта.

2.Мониторинг проводимой терапии.

Техника отбора и транспортировка образцов:

Для копрологического исследования собирают свежевыделенный кал в сухую чистую пластиковую или стеклянную емкость (стерильный одноразо5 вый контейнер для кала) в количестве 10515 грамм. Кал не должен содер5 жать посторонних примесей, например, мочи. Емкость с калом плотно за5 крывается крышкой, помещается в чистый одноразовый пакет.

Референс#значения в лаборатории «СИНЭВО Украина»:

КОД 4008. Aнализ кала на яйца гельминтов и цисты простейших

При помощи этого обследования выявляется наличие определенных па5 разитов с локализацией в кишечнике в пределах, установленных биологи5 ческим циклом:

5 Простейшие: Giardia lamblia, Trichomonas intestinalis, Entamoeba spp., Blastocystis hominis.

5 Нематоды: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Enterobius vermicularis, Strongyloides stercoralis.

5 Цестоды: Таenia spp.

Для повышения чувствительности клинических тестов рекомендуется проводить 3 последовательные исследования с интервалом в 7 дней.

Основные показания к назначению анализа:

1.Диагностика паразитарного заражения.

2.Оформление при госпитализации в стационарное отделение. Метод: прямое микроскопическое исследование.

Интерпретация результатов: в норме простейшие в кале не обнаружива5

ются.

Интерферирующие факторы

Единичный отрицательный результат, не подтвержденный дополнительно, не исключает возможности заражения простейшими. При обследовании на Giardia может быть получен отрицательный результат на ранней стадии за5 ражения, при хронической инвазии и у больных, выделяющих паразита цик5 лически. Ложноотрицательные результаты могут быть получены при усло5 вии, что за неделю, предшествующей тесту, пациент принимал барий, вис5 мут, минеральные масла, тетрациклин, антиамебные препараты, антидиа5 рейные, антацидные медикаменты. Во всех этих случаях рекомендуется провести определение антигена Giardia в кале.

КОД 4009. Анализ кала на энтеробиоз

Анальный соскоб является наиболее эффективным методом обнаружения яиц Enterobius vermicularis. Взрослые паразитарные особи заселяются вре5 менно в отделах тонкого кишечника, а после оплодотворения самки мигри5 руют в толстую кишку (особенно в область слепой кишки). Когда проходят все стадии развития и достигают примерно одной и той же стадии развития, самки мигрируют и откладывают их в анальных складках в ночное время су5 ток. Сильный зуд обусловлен наличием особей самок в анальных складках, что приводит к непроизвольному почесыванию, таким образом, что яйца по5 падают на нижнее белье и на пальцы рук. Эти особенности биологического цикла Enterobius vermicularis означают, что использование в этих случаях классического копропаразитологического метода (прямое исследование в

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

толстом слое) нецелесообразно, поскольку яйца, которые находятся в анальных складках, отлично обнаруживаются с помощью метода анального соскоба. Преимущество метода состоит в том, что он позволяет более чем

в50% случаев диагностировать энтеробиоз уже при первом исследовании,

вто время как при классическом копропаразитологическом исследовании этот процент составляет лишь 10515% случаев. Для исключения диагноза энтеробиоза рекомендуется проводить 7 исследований с интервалом в 2 дня. При получении положительного результата анализа рекомендуется обследовать и других членов семьи.

Основные показания к назначению анализа:

1.Подозрение на заражение Enterobius vermicularis.

2.Проведение госпитализации в стационарные отделения.

Подготовка пациента: соскоб делают утром, не вставания с постели, до проведения гигиенических процедур и испражнения. Для исследования ма5 териала необходимо взять прозрачную липкую ленту (узенький скотч), кото5 рую приклеивают к перианальным складкам липкой стороной, потом этой же стороной с исследуемым материалом приклеивают к чистому сухому предметному стеклу. Предметное стекло помещается в чистый одноразо5 вый пакет с замком и доставляется в лабораторию.

Метод: прямое микроскопическое исследование.

Интерпретация результатов:

1.В норме яйца остриц в кале не обнаруживаются.

2.Положительный результат не исключает наличия других возбудителей.

3.Отрицательный результат полностью не исключает инфекции, и может быть обусловлен интермитирующей экскрецией паразита.

ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕРМЫ

КОД 4015. Спермограмма

Сперма имеет достаточно сложный состав, и в ее формировании участву5 ет вся репродуктивная система мужчины: яички с придатками, семенные протоки, семенные пузырьки, предстательная железа и бульбоуретральные железы. Семенная жидкость состоит из двух отдельных частей: семенной плазмы (образуется, главным образом, в результате секрета простаты, се5 менных пузырьков) и форменных элементов (сперматозоидов и/или поло5 вых клеток, продуцируемых яичками). Яички вырабатывают сперматозои5 ды, которые составляют около 5% объема спермы. Сперматозоиды скапли5 ваются в ампулярной части семенных канальцев до их высвобождения в процессе эякуляции. Здесь сперматозоиды становятся метаболически неак5 тивными из5за кислой среды и низкого содержания кислорода. Было уста5 новлено, что сперматозоиды могут выживать в этой области примерно один месяц. Семенные пузырьки вырабатывают около 60% объема спермы. Это вязкая жидкость с нейтральной или слегка щелочной реакцией рН, желтого или более пигментированного цвета из5за большего содержания флавонов, которые отвечают за флюоресценцию в ультрафиолетовом свете. Кроме то5 го, в секрете пузырьков содержится источник фруктозы, которая является энергетическим субстратом, необходимым для подвижности сперматозои5 дов. Простата участвует в образовании 20% объема спермы. Эта молокоо5 бразная жидкость, выделяемая простатой, имеет слегка кислую реакцию

(рН 6,5) из5за наличия лимонной кислоты. Секрет предстательной железы богат кислой фосфатазой и протеолитическими ферментами, отвечающими за свертывание и сжижение спермы. Придатки яичек, семенные протоки, парауретральные и уретральные железы образуют 10515% объема спермы, их биохимическое значение окончательно не определено. Придатки яичек вырабатывает несколько различных белков, играющих важную роль в опло5 дотворяющей способности спермы.

Основные показания к назначению анализа:

1.Диагностика мужского бесплодия (включая азооспермию, олигозоо5 спермию, астенозооспермию, тератозоооспермию).

2.Оценка эффективности вазэктомии.

3.Диагностика гематоспермии.

4.Оценка возможных последствий эпидемического паротита (у подрост5 ков или взрослых).

Отбираемый образец: сперма.

Подготовка пациента: собирается весь полученный материал в чистый стеклянный градуированный сосуд. Доставляется в лабораторию как можно быстрее, но не позднее 60 мин, при условии хранения при t 37 °С.

Метод: макро5 и микроскопическое исследование.

Референс#значения в лаборатории «СИНЭВО Украина»:

ЛАБОРАТОРНЫЙ СПРАВОЧНИК СИНЭВО

Классификация подвижности, в которой учитывается тип подвижно# сти сперматозоидов

Тип «А»: отличная подвижность, с движением в лучевидной части, сопро5 вождаясь латеральными движениями головки, что вызывает поступатель5 ное движение по прямой линии.

Тип «B»: наблюдаются движения хвостиком, но отсутствуют движения го5 ловкой и перемещения по прямой линии или есть линейное движение, но медленное.

Тип «C»: беспорядочные и хаотичные вибрационные движения, обуслав5 ливающие движения только на месте.

Тип «D»: сперматозоиды неподвижны, их часто путают с мертвыми спер5 матозоидами.

Интерферирующие факторы: медикаментозные препараты, которые от5 рицательно влияют на данный вид исследования: азатиоприн, циметидин, циклофосфамид, эстроген, кетоконазол, метотрексат, метилтестостерон, нитрофурантоин, винкристин.

ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА

КОД 1100. Протромбиновое время, ПВ (Quick Time, Prothrombine time, РТ)

Протромбиновое время (ПВ) характеризует действие внешних механиз5 мов и общих факторов свертывания крови (VII проконвертин, X5фактор, V проаксселерин, протромбин II, I5фибриноген) в присутствии избыточного ко5 личества тканевого тромбопластина. Факторы II, VII, IX, X свертывания кро5 ви синтезируются в печени в неактивной форме с последующим витамин К5 зависимым процессом их активации и трансформации глутаминовой кисло5 ты из их химической структуры в γ5карбоксиглутаминовую кислоту. При этом активные формы (γ5карбоксилаты) имеют повышенное сродство к ио5 нам кальция. В условиях іn vivo активация внешнего пути коагуляции запус5 кается высвобождением тканевого тромбопластина из поврежденных тка5 ней. Тканевой тромбопластин (комплекс, образованный из тканевых факто5 ров, гликозилированных белков тканей и фосфолипидов с отрицательным зарядом) активирует фактор VII в присутствии ионов кальция (см. рисунок). Фактор VII (Х5фактор) активирует как конверсию протромбина в тромбин, так и внутренний механизм коагуляции, активируя при этом фактор IX. В ус5 ловиях іn vitro активация фактора VII осуществляется путем добавления ре5 агента тромбопластина (полученного путем экстракции из тканей с высоким содержанием тромбопластина, таких как мозг, легкие, плацента, или за счет механизма рекомбинации) и ионов кальция. После этого происходит трансформация протромбина в тромбин, который, в свою очередь, превра5

щает фибриноген в фибрин и время фибринообразования (время свертыва5 ния крови) при этом измеряется в секундах.

Prothrombin

Подготовка пациента: натощак.

Материал: венозная кровь.

Пробирка: вакутайнер с натрием цитрат (соотношение кровь – антикоагу5 лянт 1:9).

Условия обработки и стабильность пробы: Давление, создаваемое жгутом, должно быть в диапазоне между значениями систолического и диа5 столического давлений, не превышающее 1 минуты. Полученный образец центрифугируется 15 минут при 2500 оборотов в минуту. Отделенная плаз5 ма стабильна при комнатной температуре в течение 4 часов (более 4 часов начинается процесс инактивации факторов V и VIII). Архивированная плаз5 ма может храниться при температуре 520 °C в течение 3 недель. Необходи5 мо избегать двухразового размораживания и повторного замораживания!

Метод: коагулометрический.

Анализатор: Sysmex CA 50.

Тест#системы: Siemens (Германия).

Референтные значения в лаборатории «СИНЭВО Украина»:

Протромбиновое время = 10,4512,6 секунд.

Протромбиновый индекс (ПТИ, протромбиновая активность) = 705130%. Международное нормализованное отношение (МНО, INR) – до 1,0.

Основные показания к назначению анализа:

1.Мониторинг антикоагулянтной терапии.

2.Скрининг патологий коагуляции крови, обусловленный изолированным или сочетанным дефицитом факторов протромбинового комплекса.

3.Дисфибриногенемии.

4.Дефицит витамина К.

5.Мониторинг функции синтеза белка в печени.

6.Предварительный предоперационный скрининг показателей гемостаза. Интерпретация результатов: многочисленные международные исследо5

вания показали, что в стабильной фазе лечения оральными антикоагулян5 тами результаты могут значительно изменяться, в зависимости от тканево5 го поражения, при котором высвобождается тромбопластин, а также от ис5 пользуемых тест5систем для подобного вида исследования. Для решения