VI. Резка
Резку осуществляют на приборе под названием микротом.
Основной элемент микротома – стальной нож.
Микротом может находиться внутри прибора, который поддерживает постоянную t ≈ - 18-200. Он носит название криостат. Этот прибор широко используется для экспресс–диагностики во время хирургических операций, для научных исследований, для гистохимических методов исследования, так как этапы фиксации и уплотнения осуществляются одновременно благодаря замораживанию при низких температурах и существенно экономят время исследования.
После резки парафиновый срез помещают в каплю воды на предметное стекло и слегка подогревают на термостолике, чтобы срез расправился. Далее оставляют стекло до полного высыхания воды.
VII. Депарафинизация.
Прежде чем окрашивать гистологический срез, необходимо освободиться от парафина и наводнить препарат, так как обычные гистологические красители водные. Препарат на предметном стекле погружают в следующие растворы:
ксилол I → ксилол II → 960 I → 960 II → 700 → Н2О
VIII. Окрашивание
Препарат окрашивают сначала ядерным красителем, затем цитоплазматическим.
Виды красителей:
А) ядерные (основные)
гематоксилин (окрашивает ядро в синий цвет)
железный гематоксилин
азур II (в фиолетовый цвет)
кармин (в красный цвет)
сафранин (в красный цвет)
метиловый синий (в синий цвет)
толуидиновый синий (в синий цвет)
тиониновый синий (в синий цвет)
Б) цитоплазматические (кислые)
эозин – окрашивает цитоплазму в розовый цвет
эритрозин
оранжевый «G»
кислый фуксин – в красный
пикриновая кислота – в желтый
конго красный- в красный
В) специальные
судан III – окраска липидов и жиров в оранжевый цвет
осмиевая кислота – окраска липидов и жиров в черный цвет
орсеин – окраска эластических волокон в коричневый цвет
азотнокислое серебро – импрегнация нервных элементов в темно-коричневый цвет
Структуры клетки, окрашиваемые кислыми красителями называются оксифильными (ацидофильными) – окрашивание в розовый цвет.
Структуры клетки, окрашиваемые основными красителями называются базофильными – окрашивание в синий цвет.
Структуры клетки, окрашиваемые как основными, так и кислыми красителями одновременно называются нейтрофильными – окрашивание в фиолетовый цвет.
IX. Просветление осуществляют в следующих растворах:
Н2О → 700 → 960 I→ 960 II→ ксилолI → ксилол I
X. Заключение в бальзам.
Используют канадский бальзам, так как его коэффициент преломления равен коэффициенту преломления стекла. После нанесения бальзама срез покрывают покровным стеклом. После высушивания гистологический препарат готов для проведения гистологического анализа.
Микроскоп
Рисунок 1. Приготовление гистологических препаратов для световой микроскопии.
ТЕХНИКА РАБОТЫ С МИКРОСКОПОМ
Основным прибором, который используют студенты на занятиях, является световой микроскоп. Он позволяет получить увеличенное и обратное изображение объекта.