Лемешевский В.О.,Безрученок Н.Н.,Каленчук Т.В

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2

Цель: изучить функции эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уметь определять их количество в периферической крови человека и животных, понимать роль крови как внутренней среды организма, обеспечивающей его жизнедеятельность и работу многих его функциональных систем, направленных на обеспечение нормального уровня метаболических процессов в тканях.

ÏолесÃÓОпыт № 1

Подсчёт количества эритроцитов в периферической крови

Эритроциты – красные кровяные тельца, имеющие форму двояковогнутого ди ка, не имеющие ядра и содержащи в своем составе гемоглобин. Увеличение количества эритроцитов в крови называ т я эритроцитозом, уменьшени их количества – эритроп ни й. Выделяют относительный и абсолютный эритроцитоз. Относительный – за счет потери плазмы и сгущ ния крови, при этом общее количество эритроцитов в организме остается в пределах нормы. Аб ютный – истинное увеличение количества эритроцитов за счет уси енн й их продукции костным мозгом. Эритр пения также бывает относительной и абсолютной. Относительная – увеличение объема плазмы (разведение кр ви) без уменьшения общего количества эритроцитов. Абсолютная – уменьшение общего количества эритроцитов в результате усиленного разрушения эритроцитов или снижения их продукции костным мозгом. Подсчет эритроцитов, лейк цитов и тромбоцитов производят в определенном объеме крови (1 мм3) при помощи специальных счетных камер, с предварительным разбавлением крови. Разработаны также автоматические методы подсчета с помощью фотометрических и электронных приборов. Форменные элементы подсчитывают в цельной или стабилизированной крови. Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется

41

камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры 0,1 мм.

ватные шарики, марлевые салфетки.

Х д работы:

В сухую, чистую пробирку наливают 4 мл 3 % раствора NaCl для разведения крови. Кровь набирают в капилляр от гемометра Сали до метки (0,02 мл) и добавляют в пробирку, тщательно перемешивают, достигая разведения в 200 раз. Затем суспензией эритроцитов заполняют камеру

42

Горяева и, поместив ее под микроскоп, производят подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах (разделенных на 16 маленьких квадратиков), расположенных по диагонали.

При подсчете количества эритроцитов руководствуются правилом Егорова: «Относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его верхней и левой границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не подсчитываются».

Количество эритроцитов (Эр) в 1 л крови рассчитывают поÏолесÃÓформуле: Эр A 4000 200 106 ,

80

где А – умма эритроцитов в 80 маленьких квадратиках; 1 / 4000 мм3 – объем камеры Горяева над одним малень-

ким квадратиком;

200 – разв дени крови в 3 % NaCl;

80 – число мал ньких квадратиков, в которых подсчитывают эритроциты.

Р зу ьтаты раб ты:

Выводы.

43

Опыт № 2 Подсчёт количества лейкоцитов

в периферической крови

Лейкоциты – белые кровяные тельца, имеющие ядро. Увеличение количества лейкоцитов в крови – лейкоцитоз, уменьшение их количества – лейкопения.

Различают физиологические лейкоцитозы: пищеварительный (возникает после еды), миогенный (при физической

нагрузке), эмоциональный, при болевых воздействиях.

вает ядраÏолесÃÓлейк цит в. Кр вь набирают в капилляр от гемометра Са и до метки (0,02 мл) и добавляют в пробирку, тща-

Снижение числа лейкоцитов ниже нормы (лейкопении) возможны по генетическим причинам или в результате повреждения стромы кроветворных органов, например, вслед-

ствие облучения.

О нащение: микроскоп, кровь, капилляр от гемометра Сали, штатив с пробирками, 5 % ра твор ук усной кислоты, подкрашенный метиленовым иним, ч тная камера Горяева с покр вным стеклом, ст клянная палочка, ватные шарики,

марлевые салфетки.

Ход работы:

В ухую, чистую пр бирку наливают 0,4 мл 5 % раство-

тельно перемешивают, достигая разведения в 20 раз. Затем полученным раствором заполняют камеру Горяева и, поместив ее под микроскоп, производят подсчет лейкоцитов в 25 бо ьших квадратах, каждый из которых условно состоит из 16 маленьких квадратиков. В клинической практике лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах (1600 маленьких) и соответственно, в числителе формулы указывается значение не 400, а 1600. Количество лейкоцитов (Л) в 1 л рассчитывают по формуле:

44

400 – число маленьких квадратиков, в которых подсчи-

тывают лейкоциты.

ных?

ÏолесÃÓРезультаты работы:

Выв ды.

В пр сы и задания для самоконтроля:

1. Понятие о системе крови.

Основные функции крови, их краткая характерстика. Каково общее количество крови у человека и живот-

2. Наз вите физико-химические свойства крови.

3. Эритроциты и их функции. Гемоглобин и его функции.

4.Методы определения количества эритроцитов и гмоглобина.

5.Физиологическая роль лейкоцитов.

45

Лейкоцитарная формула. Т- и B-лимфоциты и их значение в процессах иммунитета.

6.Охарактеризуйте иммунную систему крови.

7.Что такое фагоцитоз и каково его значение?

8.Тромбоциты, их количество, строение, функции.

9.Плазма крови, ее основные константы и функции. Понятие о кровозамещающих растворах.

10.Функциональные системы, обеспечивающие постоянство важнейших констант крови (рН, осмотическое давле-

ние). 11ÏолесÃÓ.О н вны физиологические константы крови и механизмы их р гу яции.

12.С вр м нны клинические методы исследования крови.

46

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3

Цель: изучить роль крови как важнейшего компонента внутренней среды организма, характеристику, механизмы поддержания и методы определения важнейших констант крови.

Опыт № 1 Расчет цветового показателя

еслиÏоколичестволесÃэритроцитов меньшеÓ1,0 × 1012 / л, то первые две цифры.

Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином и соответствует максимальному содержанию гемоглобина в одном нормальном эритроците,

величина его условно принимает я за единицу.

Если цветовой показатель выше нормы, возникает ги-

перхромия, ниже нормы – гипохромия.

Ход работы:

Цветовой показат ь рассчитывают по формуле:

Р зу ьтаты работы:

ЦП

Выводы.

47

Опыт № 2 Расчет кислородной ёмкости крови

Кислородная емкость крови – максимальное количество кислорода, которое может содержаться в определенном объеме крови (1 л) при полном насыщении гемоглобина кислородом. В норме кислородная емкость крови 180–220 мл О2 в 1 л крови.

начинаются в 0,48 % растворе NaCl, в 0,34 % растворе разрушаются все эритроциты.

48

Оснащение: штатив с 9 пробирками, содержащими по 3 мл раствора NaCl в убывающей концентрации (0,9 %, 0,8 %, 0,7 %, 0,6 %, 0,5 %, 0,4 %, 0,3 %, 0,2 % и 0,1 %-й), про-

бирка с донорской кровью, 2 пипетки.

Ход работы:

Пробирки последовательно ставят в штатив. Затем, с помощью пипетки, в каждую из пробирок добавляют по 2 капли цитратной крови. Через 5 мин оценивают результа-

ты – наличие или отсутствие гемолиза, степень выраженностиÏолесÃÓгемолиза.

Рекомендации к оформлению работы:

Зарисуйте девять пробирок, укажите концентрацию раствора NaCl в каждой пробирке. Определите верхнюю и нижнюю границы резистентно ти эритроцитов и сравните данные с нормой. Оцените степень выраженности гемолиза: + – первые признаки г молиза, ++ – выраженный гемолиз, +++ – полный гемолиз.

Результаты работы. Выв ды.

Опыт № 4 Анализ различных видов гемолиза

Г молиз – это разрушение эритроцитов, сопровождающееся выходом гемоглобина в раствор (окрашивается в красный цвет и становится прозрачной – «лаковая кровь»).

Виды г м иза: осмотический, химический, биологический, температурный (холодовой, тепловой), механический.

Наименьшую резистентность имеют эритроциты овец, коз и свиней, наибольшую – птиц и рыб. В летний период времени резистентность эритроцитов у животных повышается.

49

Оснащение: штатив с пятью пробирками, пипетки, физиологический раствор, дистиллированная вода, 0,1 % раствор HCl, 5 %-й раствор глюкозы, сапонин, исследуемая донорская кровь.

Ход работы:

В штатив ставят 5 пробирок, в каждую из которых наливают по 3 мл, соответственно, физиологического раствора, дистиллированной воды, 0,1 % раствора HCl, 5 % раство-

ра глюкозы, раствора сапонина. Во все 5 пробирок вносят пипеткойÏолесÃÓпо 2 капли крови. Рассматривая содержимое всех 5 пробирок, сравнивают результаты.

Рекомендации к оформлению работы:

Определите наличие или отсутствие гемолиза в каждой пробирке.

Опишите механизм гемолиза в каждой пробирке.

Результаты работы. Выводы.

Опыт № 5 Опред ление ск р сти оседания эритроцитов (СОЭ)

СОЭ – п казат ль, характеризующий оседание эритроцитов крови при добавлении антикоагулянта. Главным фактором, от которого зависит СОЭ, является соотношение белковых фракций плазмы. Альбумины, имеющие самую мощную гидратную б чку, уменьшают СОЭ. При увеличении содержания крупнодисперсных белков (фибриноген, глобулины) СОЭ увеличивается.

СОЭ зависит от заряда самих эритроцитов: чем слабее заряжены эритроциты, тем выше их способность к агрегации и СОЭ. Определяется СОЭ также размерами эритроцитов, чем меньше диаметр эритроцитов, тем выше СОЭ.

50