ilovepdf_merged

Механические методы

Метод Вейнберга (посев уколом вглубь высокого столбика ПС;

Заливка ПС вазелиновым маслом;

Использование анаэростатов;

Посев в среду Вильсон-Блэра

втрубках Вейон-Виньяля.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

Анаэростаты и трубки Вейон-Виньяля

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Регенерация ПС прогреванием в

кипящей водяной бане;

Замена обычной атмосферы

атмосферой индифферентного газа

(N2, H2, Ar, Kr);

Добавление в ПС кусочков паренхиматозных органов или мясного фарша, сорбирующих кислород

(среда Китта –Тароцци).

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

АНАЭРОБНЫЕ БОКСЫ

•Наиболее сложным подходом является пересев и культивирование

ванаэробных боксах.

•Это прозрачные камеры со шлюзами и отверстиями для рук с рукавами, заканчивающимися резиновыми перчатками.

•В них создают стерильные условия, заполняют бескислородной газовой смесью, поддерживают температуру 37 °С.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Использование веществ,

химически связывающих О2

из атмосферы роста анаэробов (напр., щелочной

раствор пирогаллола, который наливают на дно эксикатора).

Добавление в ПС

редуцирующих веществ

(глюкоза) в среде КиттаТароцци;

эксикатор

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

Жидкая среда для выращивания анаэробных бактерий (ср. Китт-Тароцци)

Среда Китта-Тароцци – МПБ, содержит кусочки печени и

0,5% глюкозы. Залита слоем

вазелинового масла. Перед засевом среду регенерируют

(прогревают в кипящей водяной бане), это удаляет

растворенный О2.

Остатки О2 адсорбируются печенью и химически связываются глюкозой.

Вазелиновое масло препятствует повторному растворению О2 при охлаждении среды.

При росте анаэробов среда мутнеет, а при наличии у них протеаз кусочки печени растворяются.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

Плотная среда для выращивания анаэробных бактерий (ср. Вильсона-Блера)

МПА, содержит глюкозу,

сульфит натрия и хлорное железо. Строгие анаэробы

окисляют сульфит (SO3) до сероводорода (H2S), а последний взаимодействует с железом с образованием

черного сульфида железа, который окрашивает колонии бактерий.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

Кровяной агар Цейсслера:

3%-ный МПА с 1-2 % глюкозы, смешивают (при температуре 50 °С) с 15-20% свежей дефибринированной крови барана, КРС, лошади, кролика или морской свинки.

Метод Перетца. В расплавленный и охлаждённый сахарный агар вносят суспензию из материала, содержащего анаэробы и заливают под стекло (6х6 см), помещённое на фрагментах спичек в чашку Петри. Под стеклом создаются анаэробные условия.

Наиболее простой и удобной разновидно-

стью метода является метод «перевернутых чашек». При этом исследуемый материал в пробирке с расплавленным сахарным агаром заливают в крышку чашки Петри и закрывают стерильным донышком чашки, избегая обра-

зования пузырьков воздуха. Щель между краями крышки и дном чашки Петри заливают расплавленным парафином.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Метод Фортнера – совместный посев на плотную ПС аэробных и анаэробных бактерий.

Сначала вырастают аэробные бактерии, которые поглощают кислород, а затем в анаэробных условиях растут анаэробы.

Доцент КГМУ, Г.Н. Наумов