2.3. Эпизоотологические особенности

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные телята, кото­рые в острой стадии болезни выделяют вирус в количестве 10^б-10^7,5 ТЦД₅о/мл. Заражение те­лят происхо2дит воздушно-капельным путем и, возможно, перорально, так как установлено выделение вируса с молоком, фекалиями и вагинальными истечениями. Не исключается пе­редача возбудителя и половым путем.

В естественных условиях ВПГ-3 вызывает заболевание у КРС, поражая до 90-100% жи­вотных и обусловливая в 20-25% случаев вспышки респираторных болезней. Парагриппом болеют телята не старше года. AT к ВПГ-3 обнаружены у 60-100% клинически здоровых те­лят; они также выявляются у овец, коз и верблюдов. Ввиду широкого распространения ПГ-3 среди поголовья овец, рекомендуется регулярная вакцинация овец живой вакциной к ПГ-3 КРС. Имеются сообщения о выделении вируса ПГ-3 (шт. SF-4) от буйволов, лошадей, собак и крыс.

2.4. Диагностика

Включает: а) обнаружение АГ в патологическом материале (мазках, отпечатках, сре­зах), полученном от больных животных в РИФ; б) выделение возбудителя из патологическо­го материала в культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК) или легких эмбриона коровы (ЛЭК) и его идентификацию в РТГА, РИФ и др.; в) выявление AT в сыворотке крови боль­ных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РТГА. Лабораторную ди­агностику ПГ-3 проводят с использованием набора диагностикумов, выпускаемого биологи­ческой промышленностью. Ее обычно ведут параллельно с исследованием материала на аденовирусную и PC-инфекции, ИРТ и ВД-БС КРС. Схема проведения исследований на ПГ-3 аналогична схеме диагностики аденовирусной инфекции КРС. Предварительный диагноз на ПГ-3 ставят в течение 2-3 дн на основании положительных результатов обнаружения АГ в патологическом материале в РИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений, а окончательный - в течение 10-30 дн на основа­нии совпадения результатов РИФ с выделением и идентификацией вируса. В настоящее время для быстрой индикации вируса ПГ-3 может быть использована ПЦР; г) обнаружение 4-кратного и более прироста AT в парных пробах сывороток.

Выделение вируса. Ввиду малой устойчивости парагриппозного вируса испытуемый материал рекомендует­ся помещать в контейнеры с обычным льдом, немедленно доставлять в лабораторию и сразу же использовать для заражения культуры клеток. Если сделать это невозможно, нужно за­морозить материал в смеси сухого льда и спирта и хранить при - 20-60°С до исследования.

ВПГ-3 выделяют в первичных субкультурах клеток ПЭК, ЛЭК, ПТ, ТБ и др., которые готовят по общепринятой методике. Для парагриппозных вирусов характерным является диффузный характер РГАд, которая проявляется раньше, чем ЦПД вируса.

Первые ЦПИ зараженной культуры можно наблюдать иногда спустя 48 ч после иноку­ляции. Они состоят в появлении округлившихся клеток, сильнее преломляющих свет, в дальнейшем образуется синцитий и дегенерация клеток. При отрицательном результате в первом пассаже проводят второй пассаж на том же виде культуры клеток. Параллельно с пробирочными культурами ее выращивают и на покровных стеклах для ИФ. Всего рекомен­дуется не менее 4-х «слепых» пассажей. Изолят считают выделенным, если он вызывает стабильное однотипное ЦПД и положительную ГАд. В этом случае возможна его идентифи­кация в РТГАд, РН, РТГА и других реакциях. Метод выделения вируса на эмбрионах менее чувствителен, чем заражение культур клеток и применяется сравнительно редко.

Заражение естественно-восприимчивых животных. Применяют редко вследствие дороговизны и большой трудности в подборе телят, восприимчивых к ПГ-3, не имеющих специфических AT. Заражать восприимчивых животных вирусом ПГ-3 лучше нанесением на слизистую оболочку носовой полости и трахеи. От экспериментально зараженных телят вирус удается выделить из экссудата носовой полости во время подъема температуры или же из крови на 4-6-й день после интраназального и на 2-й день после внутривенного зара­жения. С носовым истечением вирус обычно выделяется со 2-го по 10-й день.

Индикация вируса. В клетках HeLa и KB вирус размножается менее активно, чем в клетках почки теленка. В культуре этих клеток, а также клеток почки обезьяны, помимо синцития, вирус вызывает образование цитоплазматических, а иногда внутриядерных включений. Их находят и в эпи­телиальных клетках бронхов и бронхиол.

Для ускоренной индикации вирусов ИРТ, ПГ-3 стафилококки обрабатывают иммунной сывороткой. Готовят мазок, на который наносят исследуемый вируссодержащий материал, обрабатывают его иммунной противовирусной сывороткой и вирусспецифиче-ским имму­ноглобулином, меченым ФИТЦе2м. По специфическому свечению на поверхности стафило­кокка осуществляют индикацию вируса. При использовании ускоренного метода индикации время индикации сокращается до 3-4 ч.