2.2. Характеристика возбудителя

Вирус впервые выделили и описали Рейзенгер и Хедделсон в 1959 г.

Морфология и химический состав. Морфология ВПГ-3 сходна с таковой вируса НБ. О существовании 5 структурных белков вируса было известно ранее; - фосфопротеин (Р, мол.м. 83 кД), ГА-нейраминидазный гликопротеин (HN, мол. м. 69 кД), главный нуклеокапсидный протеин (NP, мол.м. 66 кД), гликопротеин (F, мол.м. 55 кД), матричный белок (М, мол.м. 38 кД). Шестой белок L (мол.м. 180 кД) является, очевидно, полимеразой. Клеточный активный белок А (мол.м. 43 кД), ассоциированный со многими оболочечными вирусами, обнаружен как седьмой белок.

Устойчивость. ВПГ-3 не обладает высокой устойчивостью. Он быстро разрушается под действием высокой температуры и УФ-излучения. При 37°С титр вируса в течение 2-4 сут снижается на 1-3,5 lg ТЦД; прогревание при 56°С в течение 30 мин ведет к утрате ин­фекционной и ГА активности. Вирус инактивируется при 60°С в течение 30 мин, при 50°С - за 120 мин, при обработке 0,5%-ным раствором формалина и 1%-ным раствором β-пропиолактона повреждаются ГА и уничтожается инфекционность вируса; 0,2%-ный р-р додецилсульфата натрия и 1 М раствор MgCl₂ снижает как инфекционную, так и ГА-активности. Обработка 0,4%-ным этиленимином в течение 20 ч не действует на ГА-активность, но уничтожает инфекци­онность вируса. Под воздействием жирорастворителей (хлороформа, эфира) полностью те­ряется инфекционная активность вируса. Раствор (8 М) мочевины уничтожает ГА-активность вируса. Дезоксихолат натрия при 37°С в течение 1 ч действует на вирус слабее: при концен­трации 0,1% титр ГА снижался в 8 раз, а инфекционный титр падал на 5-6 lg ТЦД₅₀.

На вирус губительно действуют низкие значения рН; при 6,8-7,5 он хорошо сохраняется, но при рН 3,4 быстро инактивируется. Изучено влияние температуры и относительной влажности на выживаемость ВПГ-3 в аэрозоле. Наибольшая стабильность его в аэрозоле наблюдалась в среде Игла при 6°С и относительной влажности 30%.

Антигенная структура, вариабельность и родство. ВПГ-3 обладает выраженной АГ активностью и имеет 2 типа АГ, различающихся по свойствам и специфичности: рибонуклеопротеидный, или S-АГ, и поверхностный V-АГ. 1-й обнаруживается в РСК, 2-й - в РСК и РТГА. АГ вариабельности штаммов вируса ПГ-3 не установлено. Все штаммы в разных странах от телят и взрослых животных по АГ-структуре идентичны и соответствуют прототипному шт. SF-4, выделенному в США. Установлены различия в вариантах вируса ПГ-3 по ГА-, нейраминидазной и синцитий-образующей активности. Вирусы ПГ-3 КРС и человека АГ-сходны между собой. Их прототипные штаммы различаются между собой в перекрест­ной РЗГА только 4-кратно. В HN-AГ идентифицировано 6 АГ-сайтов, 3 из которых связаны с нейтрализацией и содержат 11 эпитопов. HN-гликопротеины вирусов ПГ-3 человека и КРС имеют 3 общих эпитопа. Остальные 10 HN-эпитопов ВПГ-3 человека у ВПГ-3 КРС отсутст­вуют. У обоих вирусов обнаружена значительная консервативность и гомология в амино­кислотной последовательности NP-, Р-, С- и М-белков. ПГ-3 КРС отличается от вируса ПГ-3 человека по белку HN. Однако белок F ПГ-3 КРС имеет 80,44 и 22% гомологии с аналогичными белками ПГ-3 человека, вирусов Сендай и НБ.

Локализация вируса. Вирус ПГ-3 относится к возбудителям, которые оказывают пря­мое воздействие на респираторный тракт. При попадании в носовую полость и2ли другие участки дыхательной системы вирионы внедряются в эпителиальные клетки, где они быстро размножаются. Затем большое число их выделяется на поверхность слизистых оболочек, поступает в слизь, тем самым разрушая важный защитный барьер - слизистую оболочку, что создает б2лагоприятные условия для секундарной микрофлоры. Движение слизи и возду­ха способствует распространению вирусных частиц по всей дыхательной системе с после­дующим заражением других эпителиальных клеток.

ВПГ-3 удается изолировать от экспериментально инфицированных и естественно боль­ных животных: через 1-9 дн после заражения - из экскретов респираторного тракта, через 3-10 дн - из гортани и трахеи, через 1-17 дн - из легких, в течение 2-4 дн - из миндалин и над­гортанных, бронхиальных лимфоузлов; в течение 1-2 дн - из селезенки, печени, сердца, надпочечников. Его также изолируют из тестикул телят и быков-продуцентов и часто из спермы быков-производителей.

Антигенная активность. АГ-активность штаммов не зависит от нейраминидазной ак­тивности. Как при естественной инфекции, так и при иммунизации появляются специфиче­ские AT, которые обнаруживаются в РН, РСК, РТГА, РДП. У экспериментально заражен­ных телят анти-ГА появляются первыми - на 6-7-й день, титр их быстро нарастает и в пери­од с 15-го по 21-й день достигает 1:256 и более, сохраняясь на этом уровне 6 мес. ВНА иг­рают незначительную роль в образовании иммунитета к ПГ-3, который обусловлен, глав­ным образом, секреторными AT. При нормальном развитии беременности материнские AT не проникают через плацентарный барьер в эмбрионы. Поэтому присутствие специфических AT в сыворотке крови плода доказывает возможность внутриутробной инфекции. Различ­ные белки одного и того же вируса отличаются по АГ активности, например, гликопротеины HN вируса ПГ-3 вызывали более выраженный АТ-ответ, чем гликопротеин F.

Экспериментальная инфекция. Лабораторные животные невосприимчивы. Заражение телят удается в случае отсутствия у них специфических AT. Пики цитотоксичности, которые колебались от 12 до 53%, наблюдали на 6-9-й день после заражения при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 100:1. Гибель инфицированных вирусом ПГ-3 клеток не превышала 5%.

Культивирование. ВПГ-3 хорошо размножается в первичных культурах клеток ПТ, ПЭК, легких и тестикул теленка; наиболее чувствительны клетки почки, легкого и тонкого кишечника, менее чувствительны клетки лимфоузлов, тестикул, тимуса и печени. В различ­ных культурах клеток КРС все штаммы ПГ-3 вызывают сходное ЦПД, характеризующееся образованием синцития и вакуолей. Сроки проявления гемадсорбции и ЦПД зависят не от штамма, а от вида культуры клеток.

ВПГ-3 размножается в диплоидных перевиваемых культурах клеток: HeLa, Hep-2, KB, МДВК, ВНК-21, Vero, АИ-ВЕК. В стационарных 2-3-сут культурах MDBK и ПС (почка сай­ги) в течение 10 пассажей титр вируса ПГ-3 составлял 4,75-5,0 lg ТЦД_50/мл и 7,0-7,5 lg, ТЦД_50/мл соответственно. ВПГ-3 размножается в КЭ, зараженных на ХАО, в аллантоисную и амниотическую полости, накапливаясь в титрах 10³-10^8,3 ЭИД₅о/мл. Однако заражен­ные эмбрионы не погибают, поэтому при первичном выделении вируса можно использовать КЭ, но для доказательства наличия его в экстраэмбриональной жидкости ее испытывают в культуре клеток почки теленка.

ГА свойства. ВПГ-3 агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, обезьяны, коровы, мышей, голубя, буйвола, овцы, козы, плохо агглютинирует эритроциты человека и не агглютинирует эритроциты лошади. Данные об агглютинации эритроцитов кур противоречивы.

ГАд свойства. В основе явления ГАд лежит сродство рецепторов ВПГ-3, находящихся на поверхности пораженной клетки, с рецепторами эритроцита, что приводит к их взаимно­му сцеплению аналогично РГА, Преимущество этой реакции состоит в том, что она стано­вится положительной еще до появления отчетливых цитопатических изменений в инфици­рованных клетках уже через 4 ч после заражения. Клетки, инфицированные ВПГ-3, лучше всего сорбируют эритроциты морской свинки, слабее - эритроциты кролика, белой мыши и других животных. Вирус вызывает диффузную адсорбцию эритроцитов. Для постановки ре­акции используют 0,5%-ную взвесь стерильно взятых и отмытых эритроцитов морской свинки, которые добавляют по 0,2 мл в пробирки с испытуемой клеточной культурой.