II. Работа, выполняемая студентами.

1. Промикроскопировать с окраской по Граму:

1. аэробные гетеротрофные бактерии Pseudomonas aeruginosa;

2. факультативные анаэробы Proteus vulgaris;

3. аэротолерантные гетеротрофы Lactobacillus bulgaricum и Lactococcus lactis;

4. облигатный аэроб, гетеротроф Micrococcus luteus;

5. облигатные анаэробы Clostridium pasterianum.

2. По результатам микроскопии и изучения микробов, перечисленных в п.1, заполнить таблицу:

Название микроба	Морфология и окраска по Граму	Тип питания микроба	Тип биологического окисления (дыхания)

3. Просмотр демонстрации, оформление протокола и уборка рабочего места.

III. Демонстрация.

1. Питательные среды для различных групп микроорганизмов.

2. Рост анаэробных микробов на специальных питательных средах – Вильсон-Блера и Китта-Тароцци, культивирование анаэробов в трубках Виньяль-Вейона и чашках Петри по Фортнеру – совместные культуры аэробов и анаэробов.

Лабораторная работа №5

Изучение фаз роста микроорганизмов

Определение количества и биомассы клеток

I. Вопросы для обсуждения.

1. Понятия роста и размножения микроорганизмов.

2. Методы определения биомассы клеток (определение сухой массы, общего азота, ДНК, использование метода светорассеяния).

3. Методы определения количества клеток (количественный посев, счетные камеры, окрашенные мазки).

4. Рост бактерий в периодической культуре. Кривая роста.

5. Понятия скорости роста, времени генерации.

6. Пигменты микроорганизмов. Функция и свойства пигментов микробов.

II. Работа, выполняемая студентами.

1. Построение кривой роста популяции дрожжей.

μзасеянных одной из культур дрожжей (Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula rubra). Культуры выращены на жидком сусле. Пробы для подсчета количества клеток отбирали сразу после посева и через 3, 6, 12 и 48 часов выращивания. Каждый студент подсчитывает количество дрожжевых клеток в пробе с помощью камеры Горяева.

На дно камеры Горяева нанесена сетка, разделенная на большие квадраты, некоторые из которых разделены на 16 малых квадратов площадью 1/400 см² . Глубина камеры – 0,1 мм, таким образом, объем малого квадрата - 1/4000 мм³. Студент подсчитывает количество клеток в 5 ( для более точного результата в 10) больших квадратах, вычисляет среднее число клеток в одном большом квадрате– а и рассчитывает концентрацию клеток по формуле:

a 1000 4000

N=b;

16

где N – число клеток в 1 мл суспензии, а – число клеток в одном большом квадрате, b– разведение.

Бригада строит кривую роста популяции и определяет константу скорости роста (К), время генерации (G) и удельную скорость роста в логарифмической фазе.

ln N - ln N ₀ t ln N_t - ln N _o

К = ; G= ;μ= ;

ln2K(t-t₀)

где N_t и N₀ конечное и начальное количество бактерий в промежутке времениtиt₀.

2. Просмотр демонстрации, оформление протокола и уборка рабочего места.