II. Работа, выполняемая студентами.

1.Учет результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков.

2. Ситуационная задача Определение активности антибиотиков методом серийных разведений (выполняет бригада студентов).

Постановка эксперимента: серийные разведения антибиотиков готовят в пробирках с МПБ, для чего берут 7 стерильных пробирок. В первую вносят 1,8 мл МПБ, в остальные 6 пробирок – 1 мл МПБ. Затем в первую пробирку вносят 0,2 мл антибиотика (в определенной концентрации, выраженной в ЕД) и готовят серию последовательных разведений. В последнюю пробирку (контроль) антибиотик не добавляют. Каждую пробирку (включая контрольную) засевают 0,1 мл культуры, содержащей 1000 микробных клеток в 1 мл, инкубируют 24 ч при 37⁰С. Исходную взвесь тест-культуры готовят по 500 млн. стандарту мутности. Учет результатов проводят на через 24 часа. . Отмечают в протоколе то разведение исследуемого антибиотика (ЕД), которое приводит к отсутствию роста тест-культуры, т.е. минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика (МИК). Затем производят высев на МПА материал из пробирок, где нет роста микроорганизмов. Термостатируют при 37⁰С 24 часа (для выявления цидного или статического действия этой концентрации антибиотика).

III. Демонстрация.

1.Таблицы спектра и механизма действия химиотерапевтических средств.

2. Различные химиотерапевтические препараты в товарной упаковке

Определение антимикробной активности антибиотиков по ГФ XI

Основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Осуществляется методом диффузии в агар на плотной питательной среде. Этот метод основан на сравнении размеров зон угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов Государственного стандартного образца антибиотиков и испытуемого препарата. В качестве тест-микробов используют определенные штаммы различных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bac. cereus var. mycoides, Bac. pumilis, Bordetella bronchiseptica, Pseudomonas aeruginosa) и дрожжи Candida utilis. Хранение, выращивание и методы посева этих микробов изложены в ГФ XI, вып. 2 (стр. 218-222).

Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия – ЕД, для большинства антибиотиков 1 ЕД соответствует 1 мкг активного вещества (кислоты или основания).

Методика определения антимикробной активности

В чашки Петри, установленные на столиках со строго горизонтальной поверхностью, разливают расплавленные питательные среды в два слоя, причем для нижнего слоя используют незасеянные среды, для верхнего – среду, предварительно засеянную соответствующим тест-микробом в таком количестве, которое обеспечит максимальный рост микроба и четкость зон угнетения его роста.

Шесть стерильных цилиндров высотой 10 ± 0,1 мм и внутренним диаметром 6,0 ± 0,1 мм из нержавеющей стали или алюминия расставляют на поверхности засеянной среды на равном расстоянии друг от друга и от края чашки. Вместо цилиндров могут быть использованы лунки диаметром от 6 до 8 мм, сделанные в толще агара с помощью стерильного сверла.

В цилиндры или лунки каждой чашки вносят равные объемы рабочих растворов стандартного и испытуемого образцов антибиотика. Рабочие растворы нескольких концентраций готовят из исходного (основного) раствора с концентрацией 1 мг/мл. После внесения в лунки растворов антибиотика чашки с тест-микробами выдерживают при комнатной температуре в течение 2 часов, а затем инкубируют при температуре (36±1)⁰С в течение 16-18 часов (для бактерий).

Диаметры зон угнетения роста тест-микроба измеряют с точностью до 0,1 мм.

Число чашек, используемых в каждом опыте, должно быть достаточным для обеспечения статистической достоверности результатов, но не менее 6 чашек.

Расчет антимикробной активности испытуемого антибиотика ведут согласно соответствующей статье ГФ XI, вып. 2 (стр.213-225).