II. Работа, выполняемая студентами.

1. Выявление капсулы у дрожжей Cryptococcus sp.

На край хорошо обезжиренного предметного стекла нанести каплю раствора фуксина Циля. В этой капле размешать петлю агаровой культуры дрожжей и выдержать 1 мин. Рядом нанести каплю туши. Смешать обе капли кончиком предметного стекла и этим же стеклом сделать мазок по всей поверхности препарата. Высушить на воздухе и микроскопировать в иммерсионной системе (объектив х90).

2. Выявление волютина в клетках культуры Candida mycoderma:

1. окраской по Омелянскому;

2. метиленовой синью.

1. Окраска по Омелянскому.

Приготовить препарат, высушить, фиксировать в пламени. Окрасит фуксином Циля 1 мин. Слить краску, не промывая водой, обесцветить 1% раствором H₂SO₄ 5-10 сек. Промыть водой, окрасить метиленовой синью, разбавленной 1:40, 30 сек. Промыть водой, высушить,микроскопировать в иммерсионной системе..

2. Окраска метиленовой синью 1:40.

На фиксированный мазок налить краситель, выдержать 5 мин. Промыть водой, высушить, микроскопировать в иммерсионной системе.

3. Выявление гликогена в клетках Saccharomyces cerevisiae в препаратах “раздавленная капля” с использованием концентрированного раствора Люголя.

На предметное стекло в каплю концентрированного раствора Люголя петлей внести дрожжи, препарат закрыть покровным стеклом и микроскопировать в сухой системе микроскопа. (Объективы х 8,40)

4. Выявление жира в клетках культуры Trichosporon pullulans в препарате “раздавленная капля”.

На предметное стекло в каплю воды вносят петлей культуру дрожжей, закрывают покровным стеклом, микроскопируют в затемненном поле зрения (опустив конденсор и закрыв диафрагму при увеличении х 40).

5. Просмотр демонстрации, оформление протокола и уборка рабочего места.

III. Демонстрация.

1. Клеточная стенка Saccharomyces cerevisiae.

2. Ядро Trichosporon pullulans.

3. Митохондрии Saccharomyces cerevisiae.

Методы окрашивания.

Митохондрии. Сделать взвесь культуры в 0,01% растворе януса зеленого в фосфатном буфере рН 5,6. Выдержать 30 мин. Смотреть в препарате “раздавленная капля”.

Клеточная стенка. Приготовить препарат на предметном стекле, высушить, фиксировать в жидкости Корнуа 15 мин. Высушить. Протравить 10% раствором таннина 2 мин. Промыть водой. Окрасить разбавленным фуксином Циля (1 часть фуксина Циля и 9 частей воды) 30 сек. Промыть, промокнуть фильтровальной бумагой.

Ядро. Препарат на предметном стекле высушить, фиксировать в жидкости Корнуа 7 мин. Высушить. На мазок нанести 1н. HCl, выдержать 8 мин при 60С⁰, осторожно нагревая на спиртовке. Промыть водой. Нанести краску Романовского-Гимза, выдержать 20 мин, промыть водой (краска Романовского-Гимза: 2 капли красителя в 1 мл фосфатного буфера рН 7,0)

Лабораторная работа №4 Питание микроорганизмов, питательные среды Дыхание микроорганизмов

I. Вопросы для обсуждения.

1. Формы и типы питания микроорганизмов (голозойные, голофитные; микробы: ауто- и гетеротрофы; фото - и хемотрофы ; лито- и органотрофы).

2. Питательные среды, их классификация (по составу, консистенции, назначению). Требования к питательным средам.

3. Дыхание микроорганизмов как процесс биологического окисления. Микроорганизмы-аэробы, анаэробы (облигатные и факультативные), микроаэрофилы, аэротолерантные микроорганизмы. Методы культивирования микроорганизмов в аэробных и анаэробных условиях.

4. Общие представления о микробных ферментах.