Лабораторная работа № 8

Иммунитет

Неспецифические факторы

естественной защиты организма

I. Вопросы для обсуждения.

1. Определение понятия “иммунитет” как системы неспецифических и специфических факторов защиты макроорганизма.

2. Тканевые, клеточные и гуморальные факторы неспецифической резистентности организма.

3. Фагоцитоз. Этапы и механизмы фагоцитоза.

4. Нормальная микробиота тела человека, ее значение.

II. Работа, выполняемая студентами.

1. Промикроскопировать и зарисовывать препараты фагоцитирующих клеток – микрофагов (полиморфно-ядерных гранулоцитов) и макрофагов (мононуклеарных фагоцитов) с поглощенными в процессе фагоцитоза микробными клетками (стафилококками, E.coli, дрожжами и др.) и частицами латекса.

2. Задача 4. Определение титра лизоцима (мурамидазы) в слюне. Готовят ряд последовательных разведений слюны в пробирках, в каждую из которых вносят по 1 мл суспензии суточной культуры Micrococcus lysodecticus, содержащей 1 млрд/мл микробных клеток. Пробирки помещают на инкубацию в термостат (37⁰ С) на 60 мин. После инкубации определяют титр лизоцима по последнему разведению, в котором наблюдается полный лизис бактерий (просветление микробной суспензии).

5. Просмотр демонстрации, оформление протокола и уборка рабочего места.

III. Демонстрация.

Таблицы “Фагоцитоз”, “Неспецифические факторы резистентности макроорганизма”.

Лабораторная работа № 9

Иммунитет, антигены, антитела,

серологические реакции и их применение

I. Вопросы для обсуждения.

1. Иммунитет как система специфических реакций защиты организма. Виды и формы иммунитета.

2. Общие представления об антигенах (АГ) и антителах (АТ).

3. Характеристика иммунокомпетентных клеток. Кооперация клеток в гуморальном и клеточном иммунных ответах.

4. Серологические реакции – агглютинации, преципитации, реакция связы

вания комплемента (РСК) и др.

5. Аллергия. Понятия ГНТ, ГЗТ.

6. Контрольная работа ( тест) по теме: “ Иммунитет”.

II. Работа, выполняемая студентами.

1. Постановка реакции агглютинации.

Реакция агглютинации – реакция взаимодействия АГ и АТ, в которой антигеном являются корпускулярные частицы: клетки микроорганизмов, животных и монодисперсные частицы (латекса, окиси бария), исполняющие роль корпускулярного носителя, к которому предварительно присоединяют молекулы антигена. Для образования комплекса АГ+АТ (агглютината) необходимо присутствие электролита – изотонического раствора NaCl.

При добавлении к взвеси антигенных частиц антител, полученных из сывороток крови иммунизированных данным антигеном животных, микроскопические элементы взвеси склеиваются между собой и оседают на дне пробирки в виде крупных различимых невооруженным глазом хлопьев или зерен.

При использовании в качестве АГ эритроцитов барана и сыворотки животных, которым вводили эти эритроциты (АТ), происходит склеивание эритроцитов – гемагглютинация.

1. Постановка реакции агглютинации.

Компоненты реакции:

• взвесь микробной культуры (антиген);

• антитела – диагностические сыворотки, полученные иммунизацией соответствующим антигеном животных;

• изотонический раствор (0,9% раствор натрия хлорида).

Ориентировочная реакция агглютинации ставится на обезжиренных предметных стеклах, на которые наносятся капли компонентов реакции по схеме:

1. Диагностическая сыворотка + микробная взвесь.

2. Диагностическая сыворотка (контроль сыворотки).

3. Физиологический раствор + микробная взвесь (контроль антигена).

Если контроль сыворотки остается прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерное помутнение, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья осадка (агглютината), результат реакции считается положительным.

2. Постановка реакции преципитации. Реакцию ставят в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые разливают преципитационные сыворотки (антитела) по 0,2 мл. Затем пастеровской пипеткой медленно по стенке, держа пробирку в наклонном положении, наслаивают по капле раствор антигена (0,1 мл). Пробирку ставят в вертикальное положение и через минуту проводят учет: в результате положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым материалом появляется осадок преципитата в виде белого кольца.

3. Просмотр демонстрации, оформление протокола и уборка рабочего места.