МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«Новгородский Государственный Университет им Ярослава Мудрого»

(НовГУ)

Великий Новгород

Институт медицинского образования

Кафедра общей и факультетской хирургии

«УТВЕРЖДАЮ»

заместитель директора института

медицинского образования

______________Сулиманов Р.А.

“______”_______________2011г.

МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ

ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ И СТУДЕНТОВ

Специальность: 060101 – “Лечебное дело”

Дисциплина: ОБЩАЯ ХИРУРГИЯ С КУРСОМ АНЕСТЕЗИОЛОГИИ.

Тема: Переливание крови и кровезаменителей. История вопроса. Изоаглютинация и группы крови. Методы определения групп крови. Резус-фактор.

Время: 4 часа

СОГЛАСОВАНО: Начальник УМО ИМО НовГУ ______________И.В.БОГДАШOВА “___”_______________2011г.	РАЗРАБОТАЛ: профессор каф. общей и факультетской хирургии _____________В.П.БАЙДО “____”_____________2011 г.
	ПРИНЯТО: на заседании кафедры О и ФХ _________зав.каф.проф.В.П.БАЙДО “____”_____________2011 г.

Великий Новгород – 2006г.

1.Цель работы:

1.Ознакомить студентов с понятием “гемотрансфузия”.

2.Теоретический разбор истории вопроса.

3.Теоретический и практический разбор способов и методов переливания крови и кровезаменителей.

4.Разбор понятий “изоаглютинация” и “группы крови”.

5.Теоретический и практический разбор методов определения групп крови.

6. Разбор понятия “резус-фактор”.

7. Теоретический и практический разбор методов определения резус-фактора крови.

2.Оснащение занятия:

Таблицы, слайды, наборы стандартных сывороток, предметные стекла, тарелочки, системы для переливания крови, инструкции МЗ РФ по переливанию крови.

3. ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ТЕМЫ ЗАНЯТИЯ: Трансфузионная терапия занимает ведущее место в хирургической практике. Она является основным лечебным мероприятием в борьбе с гипоксией, анемией, гипопротеинемией, при травматическом шоке и острой кровопотере, при подготовке больных к оперативным вмешательствам, во время и после операций.

4. Вопросы для определения исходного уровня знаний:

1. Основные этапы развития переливания крови.

2. Вклад российских ученых-медиков в вопросах переливания крови.

3. Определение понятия “гемотрансфузия”.

4. Перечислить способы и методы переливания крови.

5. Определение понятия “изоаглютинация”.

6. Определение понятия “группы крови”.

7. Перечислить методы определения групп крови.

8. Определение понятия “резус-фактор”.

9. Перечислить методы определения резус-фактора крови.

5. Справочный материал:

История вопроса.

В 1901 г. Ландштейнер, изучая иммунологические свойства крови, установил групповые антигенные и серологические различия между людьми. Он смешивал эритроциты одних людей с сывороткой крови других и обнаружил, что при некоторых сочетаниях наблюдается аглютинация (склеивание) эритроцитов. По этому признаку он выделил три группы крови, А, В, С.

Позднее в 1907 г. Янский доказал что существует 4 группы крови. Различия в аглютинабельных свойствах эритроцитов зависят от наличия или отсутствия в них специфических веществ - аглютининов, которые Дунгерн и Гиршфельд (1910г.) обозначили как А и В. Кроме того, было обнаружено, что в сыворотке крови человека содержатся аглютинины обозначенные как a и b. При встрече одноименных аглютиногенов и аглютининов происходит реакция аглютинации.

Группы крови по Янскому

1. первая Оab

2. вторая Аb

3. третья Вa

4. четвертая АВО

Позднее были обнаружены другие аглютиногены группы А аглютинирующие свойства которых выражены слабее А₁. А₂, А₃ и т.д.

Наиболее важным в практическом плане является существование Rh-антигена, впервые обнаруженные у макак - резус Ландштейнером и Винером в 1940 г. Им удалось доказать, что у 85% людей в эритроцитах крови содержится резус-антиген.

Дальнейшее изучение этого вопроса показало, что в эритроцитах человека содержатся антигены, которые находятся по отношению резус-антигену как бы в обратных взаимоисключающих отношениях. Их назвали Hr т.е. в обратном порядке Rh, и который в свою очередь представлен тремя вариантами - Hr_o, hr`, hr``.

После системы резус на втором месте по клиническому значению стоит система Келл-Челлано, иммунологические факторы которой были причиной тяжелых посттранфузионных осложнений, а также гемолитической болезни новорожденных.

Групповые антигены системы Лютеран, Люис, Даффи, Кидд сравнительно редко являются причиной пострансфузионных осложнений. Однако в силу недостаточной еще изученности этих систем антигенов, а также известных трудностей их определения дать полную оценку их клинического значения еще не представляется возможным.

Наличие или отсутствие в эритроцитах того или иного антигена, а также различные сочетания их дают большое разнообразие биохимических антигенных структур, присущих людям.

Если принять во внимание даже далеко не полный набор антигенов, известных в настоящее время, а именно - антигены 9 выше названных систем, то прямой подсчет укажет на существование 300000 иммунологически различных комбинаций.

Вопрос о причинах возникновения групповых антигенных различий у человека остается неизвестным.

Групповая антигенная дифференцировка человека

СИСТЕМЫ		ГРУППЫ КРОВИ			ЧАСТОТА%
АВО		О			33.5
		А			37.5
		В			21.0
		АВ			8.0
MNSs	MS	Ms		MSs	M-36
	NS	Ns		NSs	N-16
	MNS	MNs		MNSs	MN-48 S-54.7
P		P+			74
		P-			26
	ВИНЕР		ФИШЕР-РЕЙС
Rh - Hr	rh		cde			13
	rh`		Cde			1.1
	rh``		cdE			0.5
	rh`rh``		CdE			0.1
	Rho		cDe			2.0
	Rh1		CDe			54.0
	Rh2		cDE			15.0
	Rh1 Rh2		CDE			14.5
ЛЮТЕРАН	Lu (a+ )					7.65
	Lu (a - )					92.35
КЕЛЛ -	К+					10.17
ЧИЛЛАНО	К-					89.83
ЛЕВИС	Le (a+)					22
	Le (a- )					78
	Le (b+)					72
	Le (b- )					28
ДАФФИ	Fy (a+)					66
	Fy (a- )					34
	Fy (b+)					83
	Fy (b- )					17
КИДД	Jk (a+)					75
	Jk (a- )					25
	Jk (b+)					75
	Jk (b- )					25

Определение групп крови методом стандартных сывороток

1 2 3 4

Оab
Аb
Вa
АВО

Методика:

Группа крови определяется двумя сериями стандартных сывороток на тарелке.

Наносят по одной большой капле (около 0,05мл.) сыворотки соответственно маркировке. Затем по одной капле исследуемой крови в соотношении 1:10. Тарелочку плавно покачивают в течение 5 мин., затем учитывают результат.

Если результат сомнителен, исследование повторяют с другой серией сыворотки или проводят исследование методом стандартных эритроцитов.

Определение группы крови методом стандартных эритроцитов

1 2 3 4

Оab
Аb
Вa
АВО

Групповая принадлежность должна определяться при хорошем освещении и температуре 15-20^оС, так как более низкая температура может исказить результаты исследования за счет неспецифической аглютинации, а при более высокой температуре аглютинация ослабляется или замедляется.

Определение группы крови системы АВО с помощью монокло-нальных антител анти-А и анти-В (целиклоны анти-А и анти-В).

Целиклоны анти-А и анти-В применяются для определения группы крови человека системы АБО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток путем выявления антигенов А и В в эри­троцитах стандартными антителами, содержащимися в целиклонах:

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышиных антител ообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные целиклоны представляют разведен­ную асцитическую жидкость мышей — носителей гибридомы, со­держащую иммуноглобулин М против антигенов А и В. Целиклоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютина ции, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании целиклонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ.

Определяют группу крови при температуре от 15 до 25°С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле целиклонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластин­ку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3—5 с и. проявляется обра­зованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с целиклонами анти-А и анти-В — кровь не содержит агглютиногенов А и В — исследуемая кровь группы 1(0).

2. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А, эритро­циты исследуемой крови содержат агглютиноген А— исследуемая кровь группы II (А).

3. Агглютинация наблюдается с целиклоном анти-В. Эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В — исследуемая кровь группы III(В).

Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А и анти-В. Эритроциты содержат агглютиногены А и В — исследуемая кровь группы IV (АВ)

Реакция агглютинации		Группа исследуемой крови
Целиклон анти-А	Целиклон анти-В
1- 2+ 3- 4+	- - + +		I(0) II (А) III(В) IV(АВ)

Методы определения Rh-фактора.

Для определения резус фактора предложено несколько методик:

0. реакция аглютинации в солевой среде

1. реакция конглютинации с применением конглютининов (альбумин, желатин, поливинилпирролидон, полиглюкин)

2. реакция с применением протеолитических ферментов (трипсин, папаин, пролетин. фицин, бромелин).

На практике чаще всего применяют следующие методики: конглютинация с желатиной, реакция конглютинации в сывороточной среде на чашках Петри, экспресс методы.

Желатиновый метод. В центрифужные пробирки, которые соответственно маркируют, наливают по 1 капле 10% раствора желатины и по 1 капле антирезусной сыворотки (двух серий). После встряхивания пробирки помещают в водяную баню при температуре 46-48^оС на 5 минут. Затем добавляют 5-8мл. теплого изотонического раствора хлористого натрия. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат реакции по наличию аглютинатов, видимых невооруженным глазом.

Определение резус фактора на чашках Петри. Это определение основано на использование 50% взвеси эритроцитов в собственной сыворотке. Взвесь эритроцитов и сыворотку анти-резус наносят на чашку Петри, которую затем помещают на 10 мин. в водяную баню при температуре 45-48^оС. После этого чашку покачивают и учитывают результат.

Экспресс-метод определения резус фактора. Исследование проводят одновременно с определением группы крови. К антирезусным сывороткам добавляют исследуемую кровь в соотношении 1/2 и перемешивают, через 3-5 мин. добавляют 1 каплю физраствора и учитывают реакцию.