- •Вид используемого электромагнитного излучения
- •Абсорбционные спектроскопические методы анализа Основной закон поглощения электромагнитного излучения
- •Практическое применение
- •Молекулярная абсорбционная спектроскопия в уф- и видимой области
- •Фотометрические реакции
- •74 Продолжение Дифференциальная (разностная) фотометрия
- •Производная спектрофотометрия
- •Процессы, приводящие к появлению аналитического сигнала
- •20.5.2. Общая характеристика ик-спектров
- •Измерение аналитического сигнала
- •Практическое применение
- •Процессы, приводящие к появлению аналитического сигнала
- •Измерение аналитического сигнала
- •Практическое применение
- •Природа вещества
- •Глава 22
- •22.1. Общая характеристика
- •22.2. Классификация хроматографических методов
- •22.3. Хроматографические параметры
- •Хроматографические характеристики, используемые для идентификации веществ (характеристики удерживания)
- •Хроматографические характеристики, используемые для количественного определения веществ
- •22.4. Теории хроматографического разделения
- •Глава 23
- •23.1. Общая характеристика
- •23.2. Устройство газового хроматографа
- •Хроматографическая колонка
- •Детекторы
- •23.3. Особенности газотвёрдофазной хроматографии
- •23.4. Особенности газожидкостной хроматографии
- •23.5. Индексы удерживания Ковача
- •23.6. Практическое применение
- •Глава 24
- •24.1. Общая характеристика
- •24.2. Плоскостная хроматография
- •24.2.1. Методика получения плоскостной хроматограммы
- •24.2.2. Анализ плоскостной хроматограммы
- •24.2.3. Практическое применение
- •24.3. Колоночная жидкостная хроматография
- •24.3.1. Устройство жидкостного хроматографа
- •24.3.2. Практическое применение
- •24.4. Характеристика отдельных видов жидкостной хроматографии
- •24.4.1. Ионообменная хроматография
- •Неподвижные и подвижные фазы
- •24.4.2. Эксклюзионная хроматография
- •Глава 25
- •25.1. Основные понятия, связанные с электрохимическими методами анализа
- •25.2. Классификация электрохимических методов анализа
- •В табл. 25.1 приведена классификация основных электрохимических методов анализа в зависимости от измеряемого параметра.
- •25.3. Кондуктометрия
- •25.3.1. Теоретические основы и классификация
- •25.3.2. Измерение аналитического сигнала
- •25.3.4. Практическое применение
- •25.3.5. Понятие о высокочастотной кондуктометрии
- •Глава 26
- •26.1. Потенциометрический метод анализа
- •26.1.1. Общая характеристика и классификация
- •26.1.2. Условия измерения аналитического сигнала
- •26.1.3. Индикаторные электроды
- •26.1.4. Прямая потенциометрия
- •26.1.5. Потенциометрическое титрование
- •26.2. Кулонометрический метод анализа
- •26.2.1. Общая характеристика и классификация
- •26.2.2. Прямая кулонометрия
- •1) Рабочий электрод;
- •2) Электрод сравнения;
- •3) Вспомогательный электрод
- •26.2.3. Кулонометрическое титрование
- •Глава 27
- •27.1. Принцип измерения аналитического сигнала.
- •27.2. Вольтамперограмма
- •27.3. Некоторые современные разновидности вольтамперометрии
- •27.4. Практическое применение вольтамперометрии. Амперометрическое титрование
22.3. Хроматографические параметры
Расположение разделяемых веществ в виде отдельных зон вдоль колонки называют внутренней хроматограммой, а графическое изображение состава элюата (подвижной фазы, содержащей разделённые вещества), выходящего из колонки, получаемое, например, с помощью самописца - внешней хроматограммой.
Основные характеристики внешней хроматограммы, получаемой при элюентном хроматографическом анализе
Часть хроматограммы, соответствующая выходу из колонки чистого элюента (например, газа-носителя), называется нулевой линией. Часть хроматограммы, соответствующая выходу из колонки элюента вместе с компонентом разделяемой смеси, называется пиком. Для описания хроматографического пика используются следующие характеристики (рис. 22.1).
Рис. 22.1. Характеристики хроматографического пика
Отрезок нулевой линии, заключенный между крайними точками пика (в данном случае A и В), называется основанием пика. Часть основания пика, заключённая между точками пересечения касательных, проведённых к точкам перегиба на сторонах пика (G и G’), с нулевой линией (точки C и D), называется шириной пика (w - от англ. width). Расстояние от вершины пика до его основания, измеренное параллельно оси ординат, называется высотой пика (h - от англ. hight). Отрезок прямой, проведённой параллельно нулевой линии на половине высоты пика, заключённый между точками её пересечения с касательными (в данном случае точками E и F), называется шириной пика на половине высоты (w0,5).
Хроматографические характеристики, используемые для идентификации веществ (характеристики удерживания)
Время от момента ввода пробы до момента регистрации максимума пика называется временем удерживания (tR).
В идеальном случае время удерживания не зависит от концентрации вещества, но зависит от его природы, а также от природы подвижной и неподвижной фазы и условий хроматографирования. Время удерживания вещества зависит от упаковки сорбента и поэтому может изменяться при переходе от одной колонки к другой. Более надёжной характеристикой является исправленное время удерживания ( ), которое равно разности между временем удерживания данного вещества и несорбируемого компонента (t0). Поскольку t0 = tm, то = tS.
Объём подвижной фазы, который необходимо пропустить через колонку с определённой скоростью для того, чтобы элюировать вещество, называется удерживаемым объёмом (VR). Аналогично понятию исправленное время удерживания существует понятие исправленный удерживаемый объём ( )
где F - объёмная скорость подвижной фазы (см3/мин)
Отношение равновесной концентрации вещества в неподвижной фазе (Cs) к его равновесной концентрации в подвижной фазе (Сm) называется коэффициентом распределения (D).
Удерживаемый объём связан с коэффициентом распределения уравнением, называемым основным уравнением хроматографии:
(либо )
Произведение коэффициента распределения на соотношение объёмов неподвижной и подвижной фазы называется коэффициентом ёмкости колонки ( )
Хроматографические характеристики, используемые для количественного определения веществ
В качестве аналитического сигнала в хроматографии используют высоту или площадь хроматографического пика, которые пропорциональны содержанию вещества в хроматографической зоне.
Приёмы количественного определения, используемые в хроматографических методах, приведены в табл. 22.3.
Табл. 22.3.
Приёмы количественного определения в хроматографии
Метод |
Принцип метода |
нормировки |
Используется для определения относительного содержания компонентов в анализируемой смеси. Может быть применён лишь в том случае, когда на хроматограмме присутствуют пики всех компонентов смеси. или , где f – поправочные коэффициенты, учитывающие неодинаковую чувствительность детектора к различным компонентам смеси |
внешнего стандарта |
Аналитическим сигналом является высота (площадь) пика определяемого вещества |
внутреннего стандарта |
Аналитическим сигналом является отношение высот (площадей) пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта. |
Внутренний стандарт представляет собой специально добавляемое к анализируемой пробе в точно измеренном количестве вещество, свойства которого близки к свойствам определяемого вещества. Вещество, взятое в качестве внутреннего стандарта:
не должно химически взаимодействовать с компонентами анализируемой смеси, с неподвижной или подвижной фазой;
должно отсутствовать в исходной анализируемой смеси;
давать пик, находящийся на хроматограмме в непосредственной близости от пиков определяемых веществ, но не накладывающийся на них и на пики других соединений.
Концентрацию внутреннего стандарта выбирают таким образом, чтобы высота (площадь) пика внутреннего стандарта была соизмерима с высотой (площадью) пика определяемого вещества (рис. 22.3).
Рис. 22.3. Хроматограмма, полученная при ГЖХ-определении аминазина в печени (внутренний стандарт – бромгексин)
В методе внешнего и внутреннего стандарта используются одни и те же приёмы расчёта содержания вещества (метод градуировочного графика и др.). Основное различие заключается в характере используемого аналитического сигнала. Метод внутреннего стандарта обладает большей надёжностью и даёт более воспроизводимые результаты, особенно в случае сложной пробоподготовки.