1.1.2.4.1. Типы красителей

Тип красителя

Пример

Окрашиваемые структуры

Кислые красители

Кислоты и кислые соли:

эозин(от греч. эос – заря) – искусственная краска;

кислый фуксин.

Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям)

Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна)

Основные красители

Основные соли:

гематоксилин (точнее, продукт его окисления - гематеин);

азур 2,

кармин

Красящиеся структуры называются базофильные (сродство к основным красителям)

Это структуры, богатые нуклеиновыми или иными кислотами – ядра, рибосомы, аморфный компонент межклеточного вещества

Нейтральные красители

Смесь двух красителей: основного (азур 2) и кислого (эозин)

Структуры, воспринимающие кислые красители, окрасятся эозином (специфические гранулы в эозинофильных лейкоцитах)

Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2

Индифферент- ные красители

Судан III, судан IV

Суданом окрашиваются жировые капли

Заключительным этапом на препарат наносят каплю канадского бальзама (в случае среза) или кедрового масла (на мазки крови) и накрывают покровным стеклом.

Примеры тотального препарата – это участки сальника или мягкой мозговой оболочки, растянутые на предметном стекле.

В подобных случаях, а также при приготовлении мазков, из четырех перечисленных этапов  опускаются два – уплотнение материала и приготовление среза (с последующим освобождением от уплотнителя).

Остаются фиксация, окраска и заключение в консервирующую среду.

В электронном микроскопе образец облучается не видимым светом, а пучком электронов.

Длина же электронной волны значительно меньше, чем световой.

Соответственно такая волна “чувствует” меньшие препятствия: разрешающая способность микроскопа оказывается выше.

Конструктивная же особенность состоит в том, что в электронном микроскопе в качестве линз используются электромагнитные катушки.

Внешний вид электронного микроскопа

Ход лучей в электронном микроскопе в принципе таков же, как в световом.

Источником электронов служит катод, а движущей силой – разность потенциалов между катодом и анодом.

Анод расположен вблизи катода и имеет отверстие посередине, через которое проскакивают электроны.

Чтобы их поток далее не ослабевал, в тубусе микроскопа создается высокий вакуум.

Одна электромагнитная катушка служит в качестве конденсора (фокусирует пучки на образце); вторая катушка – в качестве объектива (принимает лучи, расходящиеся от образца); а третья катушка – в качестве окуляра, или проекционной линзы.

Лучи, проходящие через последнюю катушку, попадают далее на люминесцентный экран и вызывают его свечение в месте падения электронов.

Взятие материала и фиксация

Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм³), а фиксацию осуществляют обычно в две стадии:

а) вначале глутаральдегидом (стабилизация белков),

б) четырехокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани)

Уплотнение материала

Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы.

Заливку производят в специальных формах; затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате; затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей

Приготовление срезов

Срезы делают с помощью ультратома; их толщина – 30–50 нм (ср. с микротомными срезами – 10000–20000 нм).

Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла)

Окрашивание срезов

Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжелых металлов (свинца, вольфрама, урана); эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны; поэтому соответствующие места клетки выглядят более темными