- •Практичне заняття №10 Тема: «Неспецифічні фактори захисту організму від мікроорганізмів»
- •Актуальність теми:
- •Конкретні цілі:
- •Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція).
- •Завдання для самостійної роботи під час підготовки до заняття.
- •Теоретичні питання до заняття:
- •Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •Зміст теми:
- •Рекомендації для оформлення протоколу
- •5.1. Схема титрування лізоциму в слині
- •5.3. Вивчити явище незавершеного фагоцитозу на демонстраційних препаратах.
- •6. Питання для самоконтролю.
- •Практичне заняття №11 Тема: «Серологічні реакції (1 заняття)»
- •1. Актуальність теми:
- •4.2. Теоретичні питання до заняття:
- •4.3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •5. Зміст теми.
- •Рекомендації для оформлення протоколу.
- •5.1. Реакція аглютинації на склі
- •5.2. Розгорнута реакція аглютинації, яка поставлена з метою серологічної ідентифікації культури бактерій
- •5.4. Препарати імунних діагностичних сироваток.
- •6. Питання для самоконтролю.
- •Практичне заняття №12 Тема: «Серологічні реакції (2 заняття)»
- •Актуальність теми:
- •Конкретні цілі:
- •Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція). Дивись практичне заняття №10.
- •Завдання для самостійної роботи під час підготовки до заняття.
- •4.1.Перелік основних термінів, параметрів, характеристик, які повинен засвоїти студент при підготовці до заняття:
- •4.2. Теоретичні питання до заняття:
- •4.3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •5. Зміст теми:
- •Рекомендації для оформлення протоколу.
- •5.1. Облік поставленої на попередньому занятті реакції аглютинації з метою серологічної ідентифікації культури бактерій.
- •5.2. Постановка реакції аглютинації з метою виявлення антитіл в сироватці хворого з підозрою на черевний тиф та паратифи а та в.
- •5.3. Принцип постановки та облік результатів реакції непрямої гемаглютинації (рнга), поставленої з метою серологічної діагностики.
- •5.4. Постановка реакції імунного гемолізу.
- •Питання для самоконтролю
- •Практичне заняття №13 Тема: «Серологічні реакції з мітками»
- •1.Актуальність теми:
- •Конкретні цілі:
- •3. Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція). Дивись практичне заняття №10.
- •Завдання для самостійної роботи під час підготовки до заняття.
- •Перелік основних термінів, параметрів, характеристик, які повинен засвоїти студент при підготовці до заняття:
- •Теоретичні питання до заняття:
- •Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •5. Зміст теми:
- •Рекомендації для оформлення протоколу.
- •5.1.Проведення обліку реакції Відаля, що поставлена з метою визначення ат в сироватці крові хворого проти збудників черевного тифу та паратифів а і в.
- •5.2. Постановка реакції зв’язування комплементу (рзк) з метою виявлення антитіл в досліджуваній сироватці.
- •5.4. Провести облік іфа, що була поставлена з метою виявлення нВsAg у сироватці крові хворих з підозрою на вірусний гепатит в (демонстраційна робота).
- •6. Питання для самоконтролю.
- •Практичне заняття №14 Тема: «Вакцини та імунні сироватки».
- •1.Актуальність теми:
- •Теоретичні питання до заняття:
- •4.3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •Зміст теми:
- •Рекомендації для оформлення протоколу.
- •6. Питання для самоконтролю
- •Практичне заняття №15 Тема: «Сучасні методи мікробіологічної діагностики інфекційних захворювань»
- •1. Актуальність теми.
- •Конкретні цілі
- •3. Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція). Дивись практичне заняття №10.
- •4. Завдання для самостійної роботи під час підготовки до заняття.
- •4.2. Теоретичні питання до заняття:
- •4.3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:
- •5. Зміст теми.
- •Рекомендації для оформлення протоколу
- •6. Питання для самоконтролю.
- •7. Рекомендована література
5.2. Постановка реакції зв’язування комплементу (рзк) з метою виявлення антитіл в досліджуваній сироватці.
Реакція зв’язування комплементу заснована на здатності специфічного комплексу антиген+антитіло адсорбувати (зв’язувати) комплемент. Оскільки процес зв’язування комплементу не проявляється візуально, то як індикатор використовується гемолітична система (еритроцити барана + гемолітична сироватка), яка свідчить про наслідки реакції між антигеном і антитілом. Якщо антиген і антитіло відповідають один одному, то комплемент зв’язується цим комплексом і гемоліз не проходить, а якщо комплекс не утворюється, то наступає гемоліз.
РЗК відноситься до складних серологічних реакцій і для її здійснення необхідно не менше 5 інгредієнтів: антиген, антитіло і комплемент (перша система), еритроцити барана і відповідна їм гемолітична сироватка.
СХЕМА ПОСТАНОВКИ ОСНОВНОГО ДОСЛІДУ РЕКЦІЇ ЗВ’ЯЗУВАННЯ КОМПЛЕМЕНТУ (РЗК) З МЕТОЮ ВИЯВЛЕННЯ АНТИТІЛ В ДОСЛІДЖУВАНІЙ СИРОВАТЦІ
№ пробірок
Інгредієнти (в мл) |
Дослідна |
Контрольні |
||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Досліджувана сироватка (1:10) |
0,5 |
--- |
0,5 |
0,5 |
--- |
--- |
Антиген в робочій дозі |
0,5 |
0,5 |
--- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Комплемент в робочій дозі |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
--- |
0,5 |
0,5 |
Сироватка завідомо позитивна (1:10) |
--- |
--- |
--- |
--- |
0,5 |
--- |
Сироватка завідомо негативна (1:10) |
--- |
--- |
--- |
--- |
--- |
0,5 |
Ізотонічний розчин NaCl |
--- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
--- |
--- |
В термостат на 2 години при 370 |
||||||
Гемолітична система |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
В термостат на 1 годину при 370 |
||||||
5.3. Провести ідентифікацію культури грибів роду Candida, що забарвлені імунною сироваткою, міченою флуорохромом, в препараті за допомогою реакції імунофлуоресценції (РІФ) (демонстраційна робота). Зробити висновок.
При постановці прямої РІФ досліджуваний матеріал (культури грибів роду Candida) бактеріологічною петлею наносять на знежирене предметне скло, готують тонкий мазок, висушують його на повітрі, фіксують. На зафіксований препарат наносять 1-2 краплі флуоресціюючої сироватки і фарбують його у вологій камері 20-30 хв. при 250 С. Після інкубації препарат промивають 2-4 рази забуференим ізотонічним розчином, впродовж 10-15 хв. прополіскують дистильованою водою, висушують, наносять краплю нефлуоресціюючої олії і розглядають в люмінесцентному мікроскопі за допомогою імерсійного об’єктиву. При цьому гриби роду Candida дають яскраве світіння на темному фоні.
5.4. Провести облік іфа, що була поставлена з метою виявлення нВsAg у сироватці крові хворих з підозрою на вірусний гепатит в (демонстраційна робота).
Наявність і активність ферменту, зв’язаного з антитілом чи комплексом антиген-антитіло виявляють і оцінюють візуально за інтенсивністю забарвлення після інкубації з відповідним субстратом.