Методы посева с разобщением на основании биологических свойств бактерий
Посев площадкой, основанный на подвижности некоторых бактерий (по Шукевичу)
Использование элективных сред и сред обогащения.
Использование лабораторных животных и других живых объектов.
Оснащение занятия.
Стерильные плотные питательные среды в чашках Петри.
Стерильные жидкие питательные среды в пробирках.
Культура бактерий для посева.
Оборудование для создания анаэробных условий.
Спиртовки, спички, бактериальные петли, шпатели.
Дезинфицирующий раствор, карандаши по стеклу.
Самостоятельная работа студентов.
Задача №1: Провести посев культуры бактерий на плотные питательные среды.
Задача №2: Провести посев культуры бактерий на жидкие питательные среды.
Занятие 6 Дата
Тема: Выделение чистых культур бактерий и их идентификация.
Цель: изучить бактериологический метод диагностики инфекционных болезней, уметь определять биохимические свойства чистой культуры бактерий.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
Бактериологический метод диагностики инфекционных болезней.
Этапы выделения и идентификации чистых культур бактерий.
Ферменты бактерий, классификация, механизм действия. Контроль биосинтеза ферментов.
Использование ферментативных свойств микроорганизмов для их идентификации. Дифференциально-диагностические среды. Экспресс-методы определения ферментативной активности микроорганизмов.
Протокол практического занятия Выделение и идентификация чистых культур бактерий.
I Этап (нативный материал): посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой (МПА) «штриховым» методом.
Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
Примечание: в том случае, если в исследуемом материале содержится незначительное количество возбудителя, то его предварительно накапливают путём посева материала в жидкую питательную среду, а затем после инкубации при 37оС производят пересев на плотную питательную среду.
II Этап (изолированные колонии): идентификация выделенной чистой культуры по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам:
а) макро- и микроскопическое исследование колоний производится так же с целью проверки чистой культуры.
Схема описания колоний: учитывают размеры, форму, цвет, характер поверхности, характер края, консистенцию и структуру колоний.
б) пересев оставшейся части колонии на скошенный агар (для накопления чистой культуры).
Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
III Этап (чистая культура)
Идентификация выделенной чистой культуры, выращенной на скошенном МПА
а) по культуральным свойствам (характер однородности роста).
б) приготовление мазка, окраска, микроскопия (для проверки выделенной части культуры).
в) по биохимической активности – посев выделенной чистой культуры на среды Гисса, желатин, МПБ (для выявления Н2S и индола) и другие тесты.
Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
Примечания: помимо перечисленных свойств, для определения вида возбудителя исследуют:
г) антигенные свойства;
д) токсигенные свойства.
Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам и др.
химиопрепаратам с помощью бумажных дисков. Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
Примечание: с целью выявления источника заболевания производится фаготипирование.
Внутривидовая идентификация (эпидемиологическое маркирование) – определение фаговаров, сероваров и т.д.
IV Этап (учет результатов)
Заключение: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных свойств, выделенной исследуемой чистой культуры возбудителя, можно сделать предварительное заключение о его принадлежности к ….
Выделенная культура чувствительна к антибиотикам….
Оснащение занятия.
Дифференциально-диагностические питательные среды стерильные и с посевом исследуемых культур.
Культура бактерий для посева.
Среда Эндо с посевами кишечной палочки.
Спиртовки, спички, бактериальные петли.
Дезинфицирующий раствор, карандаши по стеклу.
Самостоятельная работа студентов.
Задача №1: Провести посев культуры бактерий на среду Клиглера.
Задача №2: Изучить характер роста микроорганизмов на среде Клиглера (отметить особенности в протоколе).
Задача №3: Изучить характер роста кишечной палочки на среде Эндо (отметить особенности в протоколе).
Задача №4: Изучить характер роста стафилококка на средах с сахарами (отметить особенности в протоколе).