- •Выписка из учебной программы. Введение.
- •Практическое занятие № 3 – 4 часа.
- •Карта внутри- и межпредметных связей.
- •Научно-методическое обоснование темы.
- •Цели и результаты обучения по уровням усвоения учебного материала (выписка из рабочей учебной программы)
- •Приложение № 1. Устный индивидуальный опрос.
- •Приложение № 2. Рассказ. Изложение нового материала.
- •Теоретическая часть:
- •2. Указания к занятию:
- •3. Практическая часть.
- •Выполнение работы.
- •2. Построение калибровочного графика.
- •Выполнение работы.
- •Приложение № 4. Материалы закрепления знаний. Формирование умений и навыков.
- •4.1. Самостоятельная работа – изучение инструкции.
- •4.3. Определение оптических плотностей приготовленных калибровочных растворов на фотоэлектроколориметре.
- •4.4. Построение калибровочного графика. Приложение № 5. Контроль конечного уровня знаний, умений.
- •Учащиеся выполняют задания преподавателя по определению содержания пирувата у больных по калибровочному графику.
- •Фронтальный опрос – система вопросов.
- •Решение задач.
- •Работа с наборами реактивов.
- •Приложение № 8. Методические указания. Рекомендации.
- •8.1. Вводный инструктаж перед практической работой:
- •Построение калибровочного графика.
- •1. Теоретическая часть:
- •2. Указания к занятию:
- •3. Практическая часть.
- •Выполнение работы.
- •2. Построение калибровочного графика.
- •Выполнение работы.
- •4. Материалы закрепления знаний. Формирование умений и навыков.
- •4.4. Построение калибровочного графика.
- •Контроль конечного уровня знаний, умений.
- •Решение задач.
- •Работа с наборами реактивов.
- •По теме «введение. Построение калибровочного графика. Работа с наборами реактивов».
3. Практическая часть.
-
Лабораторная работа № 1: Построение калибровочного графика.
1. Приготовление калибровочных растворов из стандартного раствора белка.
Выполнение работы.
К 0,4 мл стандартного раствора с концентрацией 95 г/л прибавить 3,4 мл физиологического раствора. Из этого раствора готовят разведения:
№ пробирки |
Калибровочный раствор белка, мл |
Физиологический раствор |
Концентрация белка, г/л |
1 |
0,2 |
0,8 |
20 |
2 |
0,4 |
0,6 |
40 |
3 |
0,6 |
0,4 |
60 |
4 |
0,8 |
0,2 |
80 |
5 |
1,0 |
- |
100 |
Из каждого раствора с различной концентрацией белка отбирают по 0,5 мл образца и прибавляют по 2 мл биуретового реактива. Через 30 минут колориметрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) против контроля (0,5 мл физиологического раствора и 2 мл биуретового реактива). Кювета 10 мм.
2. Построение калибровочного графика.
Например, Ек1 = 0,1; Ек2 = 0,2; Ек3 = 0,3; Ек4 = 0,4; Ек5 = 0,5.
Исходя из этих данных и концентрации белка в г/л (см. приготовление калибровочных растворов) строят калибровочный график.
Е
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0 20 40 60 80 100 С
На оси ординат откладываем экстинции калибровочных проб, а на оси абсцисс – концентрацию белка в г/л. Через полученные точки проводим прямую линию.
Масштаб выбирают так, чтобы линия располагалась под углом, близким к 45ºС, для этого берут максимальные значения концентрации и экстинции, если между ними в пределах этих значений сохраняется прямо пропорциональная зависимость. В нашем примере отрезок из 20 клеток (10 см) на оси абсцисс составляет 100 г/л, а на оси ординат максимальное значение экстинции 0,5. На основании этих данных находят факторы калибровки по формулам:
-
Сmax : 10 = 100 : 10 см = 10 г/л
-
Еmax : 10 = 0,5 : 10 см = 0,05, где
10 г/л и 0,05 – значения концентрации и экстинции, соответствующие масштабу 1 см (2 клетки)
Чтобы облегчить процедуру откладывания на оси ординат значений экстинций стандартных и опытных проб, рекомендуется разделить величину экстинции, например, 0,2 на 0,05. полученное число (4) показывает на каком удалении от «0» точки в см следует сделать отметку для восстановления из нее перпендикуляра, т.е. 4 см. Также поступают со всеми остальными значениями, для того чтобы их разместить на вертикальной и горизонтальной осях. Из отложенных на осях значений восстанавливают перпендикуляры; в месте пересечения тонких линий находят точки, проводят калибровочную кривую (см. график выше).
-
Лабораторная работа № 2: Работа с наборами реактивов.
Выполнение работы.
-
Изучение инструкции по применению набора реактивов для определения альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым «Диахим-альбумин».
-
Приготовление рабочего реактива (изучить по инструкции) и выполнить опыт.
-
Изучить ход определения альбумина в сыворотке крови.
-
Изучить расчет концентрации альбумина.
Сделать вывод о значении применения набора реактива