3.1.3. Распределение gdnf у линий дрозофилы с полиморфизмом по гену limk1 в норме
Распределение GDNF исследовали аналогично БТШ70. Антитела к HRP (horseradish peroxidase, пероксидаза хрена), специфичные плазматической мембране пресинаптической области нервной ткани, позволили нам идентифицировать аксоны и их отростки после иммунофлюоресцентной детекции. Иммунофлуоресцентный анализ позволил нам получить комплексную картину локализации GDNF в нервно-мышечных контактах линии дикого типа Canton-S (рис.29).
В интактном контроле Canton-S GDNF колокализуется с ядрами глиальных клеток. Это позволяет предположить, что большая часть этого белка находится в глии. В норме у дикого типа Canton-S GDNF располагается в мышечных и нервных клетках. Интенсивность окрашивания антителами к GDNF низкая, что свидетельствует о незначительном количестве этого белка в нормальных условиях.
Рис. 29. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Canton-S в норме. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Теперь рассмотрим распределение GDNF в нервно-мышечных контактах личинок линии Oregon-R в норме (рис. 30). У линии дикого типа Oregon-R GDNF локализуется преимущественно вдоль нейритов, в области НМК и у поверхности мембраны. Окрашивание характеризуется районами расположенными шире нейритов, это область, где выявляется GDNF. В ядрах GDNF не обнаруживается.
Рис. 30. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Oregon-R в норме. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
В интактном контроле у линии дикого типа Berlin GDNF локализуется вдоль нейритов и в области НМК у поверхности мембраны (рис.31). Область окрашивания шире нейритов, это область глиальных клеток. Но в ядрах GDNF не обнаруживается.
Рис. 31. Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии Berlin в норме. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Рассмотрим распределение GDNF в нервно-мышечных контактах личинок мутантной линии agnts3 в норме (рис. 32). В интактном контроле у мутанта agnts3 показано наличие небольшого количества исследуемого белка в мышечных и нервных клетках.
Рис.32 Локализация GDNF в нервно-мышечных контактах у линии agnts3 в норме. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Рис.33. Сравнение локализации GDNF в нервно-мышечных контактах у исследуемых линий в норме. Х63. Суммарное изображение трёх слоёв – 3 мкм. Зеленый – антитела к HRP. Красный - антитела к GDNF. Merge – сводное изображение HRP и GDNF.
Сводное изображение позволяет сделать вывод, что в нервно-мышечных контактах в интактном контроле у линии Canton-S и у мутанта agnts3 GDNF располагается в мышечных и нервных клетках. Интенсивность окрашивания антителами к GDNF низкая у этих двух линий, что свидетельствует о незначительном количестве этого белка в нормальных условиях. У линий дикого типа Berlin и Oregon-R GDNF локализуется вдоль нейритов и в области НМК, выходя значительно шире нейритов. Также, у Berlin и Oregon-R интенсивность окраски антителами к GDNF выше, чем у Canton-S и у мутанта agnts3, то есть количество GDNF в норме у этих линий больше.