Тема: количественный учет микроорганизмов

Вопросы для рассмотрения:

1. Подсчет клеток в счетных камерах.

2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева.

3. Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида).

4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах.

5. Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Кока).

6. Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений).

7. Определение биомассы взвешиванием.

8. Определение количества клеток и биомассы нефелометрическим методом.

Студент должен знать: методы и приемы работы со счетными камерами, капиллярами Перфильева, мембранными фильтрами; методику приготовления и подсчет клеток микроорганизмов по методу Виноградского-Брида, суть чашечного метода Коха и приемы подсчета, пользоваться таблицей Мак-Креди, устройства и принцип работы нефелометра.

Студент должен уметь: произвести подсчет клеток микроорганизмов выше перечисленными методами.

Задания для выполнения лабораторной работы:

Задание 1. Определите количество клеток микроорганизмов чашечным методом Коха, находящихся в 1 мл и 1 л воды. Сделать выводы о качестве питьевой воды или указать степень сапробности природных вод.

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

, где

Х— количество клеток в 1 мл

а— среднее число колоний при высеве разведения

V— объем суспензии взятый для посева

10 ⁿ — коэффициент разведения

Х =

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________

___________________________________________________________

Задание 2. Определите количество клеток микроорганизмов чашечным методом Коха, находящихся в 1 г сырой и 1 г абсолютно сухой почвы. По полученным результатам (количество клеток в 1 г абсолютно сухой почвы) сравнить плодородность различных почв.

Расчет количества клеток провести согласно формулам:

а) в 1 г сырой почвы:

, (при условии, чтоV=0,05 мл)

Х=

б) в 1 г абсолютно сухой почвы:

, где

0,75— при влажности почвы 25% 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы

20— коэффициент перевода 0,05 мл в 1 мл (0,05 х 20 = 1)

10ⁿ— разведение, взятое для посева

а— число колоний, выросших на чашках

V —объем суспензии, взятой для посева (в мл)

Х =

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 3. Определите количество клеток микроорганизмов седиментационным методом, находящихся в 1 м³ воздуха. Сделать вывод о степени загрязнённости воздуха и при необходимости предложить меры по снижению численности микроорганизмов в воздухе.

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

Х— число клеток микроорганизмов в 1 м³воздуха

а— число колоний, выросших на чашках

S— площадь чашки Петри (S== Пr², 3,14 х 25 = 78,5 )

Примечание 1. Установлено, что на 100 см² (b) падает примерно столько микробных зародышей, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 см³ ); чтобы узнать, сколько клеток находится в 1 м³воздуха, количество микробных зародышей умножается на 100 (с).

Х =

Примечание 2.Общая обсемененность воздуха и определение степени чистоты воздуха может быть рассчитано посуммарному числуколоний, выросших на двух параллельных чашках:

менее 250колоний — воздух чистый

250-500колоний — загрязнен в средней степени

более 500колоний — загрязнен

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 4. Выполните схемы окулярных сеток, применяемым для прямого подсчета клеток микроорганизмов

а)________________ б)_________________ в)_________________

________________ _________________ ________________

Рис. 8.1 Схемы окулярных сеток

Задание 5. Подсчитайте количество клеток микроорганизмов прямым методом в 1 мл суспензии с применением камеры Горяева-Тома. Расчет количества клеток провести согласно формуле:

, где

Х— число клеток в 1мл суспензии

а — среднее число клеток в квадрате сетки

h— высота камеры в мм

S— площадь квадрата сетки в мм²

10³— коэффициент перевода см³в мм³

n— разведение исследуемой суспензии

Х =

Вывод: _________________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________

Задание 6. Подсчитайте количество клеток микроорганизмов, содержащихся в 1 мл суспензии, прямым методом на фиксированных окрашенных мазках по Виноградскому-Бриду. Вычислить количество клеток микроорганизмов,

Расчет количества клеток провести согласно формуле:

, где

Х— число клеток в 1 мл исследуемого субстрата

а — среднее число клеток в квадрате окулярной сетки

(поля зрения), мкм²

V— объем нанесенной на стекло суспензии в мл

S— площадь приготовленного мазка в мкм²

s --- площадь квадрата окулярной сетки поля зрения), мкм²

n — разведение исследуемого субстрата

Х =

Вывод: ___________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________