Lektsia_1_kultury_rastitelnykh_kletok_2012_nov

Основные требования к получению тканевых культур

•1. Наличие подходящего экспланта

•2. Подбор подходящей среды

•3. Выбор подходящих условий выращивания

Культуры in vitro тканей растений

Виды эксплантов:

Эксплантами для культивирования in vitro в зависимости от задач исследования могут быть все части растения: верхушки побегов, листья, пазушные почки, стебли, корни Любой фрагмент растения представляет собой

мозаику различных тканей, и в зависимости от того, какая ткань даст начало каллусу, возникшие даже из одинаковых эксплантов каллусы будут гетерогенными и отличающимися друг от друга. Одинаковых, в полном смысле, эксплантов в природе быть не может, следовательно, неоднородность исходного материала (видовая, возрастная, физиологическая) предопределяет разнокачественность клеток в культуре.

14

ТРЕБОВАНИЯ К КУЛЬТУРАЛЬНЫМ СРЕДАМ

•1. Минеральные компоненты

•А) макросоли

•Б) микросоли

•2. Органические компоненты

•Сахароза, глюкоза, фруктоза, инозитол

•3. Витамины

•В1, В6, В12, рибофлавин, никотиновая кислота, никотинамин,

•4. Регуляторы роста

•А) ауксины (α-нафтилуксусная кислота, индолилуксусная к-та, гибберелловая кислота)

•Б) цитокинины ( кинетин, зеатин,

•6-бензиламинопурин)

•В состав питательных сред входят макро- и микроэлементы (N, P, K, Ca, S, Mg, Fe, B, Zn, Cu, Co, Mn, J, Mo); витамины В1, В6, В12, РР и другие; углеводы (сахароза, глюкоза, маннит); фитогормоны (чаще всего цитокинины и ауксины в определенном соотношении).

•Ауксины вызывают клеточную дедифференцировку, цитокинины индуцируют деление дедифференцированных клеток и необходимы для получения каллусных тканей.

На средах без гормонов растут “привыкшие” и опухолевые ткани. Для получения стеблевого морфогенеза снижают содержание ауксинов.

Из ауксинов чаще всего применяют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту (2,4-Д) - 0.1-10 мг/л, нафтилуксусную кислоту (НУК) - 0.1-2 мг/л, ИУК - 1-30 мг/л.

•Необходимы также источники карбогидратов – сахароза, глюкоза, лактоза и др.

•Для роста большинства культур необходимы желирующие агенты

•Агар-агар, агароза, фитогель

•Разработано много питательных сред, но большинство из них представляют модификации основных: Мурасиге-Скуга (МС), Уайта, Шенка-Хильдебрандта, Гамборга (В5), Линсмайера-Скуга, Хеллера, Чапека и др.

•Составы питательных сред, получивших наибольшее распространение приведены в справочниках по физиологии растений и биотехнологии.

•Для индукции каллусогенеза используют примерно равные соотношения регуляторов роста

•В качестве цитокининов используют кинетин, 6- бензиламинопурин (БАП), зеатин (0.001-10 мг/л); из них кинетин наименее активен.

•В состав некоторых сред входит аденин. Иногда используют гибберелловую кислоту (ГК). В качестве ростактиваторов применяют также кокосовое молоко, дрожжевой экстракт, гидролизат казеина и др.

Состав питательных сред при культивировании растительных тканей

Каллус

•Эквимолярные количества ауксинов и цитокининов стимулируют клеточное деление и ведут к появлению массы неорганизованных (дедифференцированных) клеток, которые и называются каллусом.

20