Добавил:

Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Воронежский государственный университет

Предмет:

[НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Файл:

oct03002

.pdf

Скачиваний:

Добавлен:

21.05.2015

Размер:

443.69 Кб

Скачать

☆

1 / 61 2 3 4 5 6 > Следующая >>>

М И Н И	СТ Е РСТ В О О БРА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И
В О	РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н Ы Й У Н И В Е РСИ Т Е Т

ЛА БО РА Т О РН Ы Е РА БО Т Ы И ЗА Д А ЧИ ПО БИ О ХИ М И И

Практическоепособие поспециальностям « Биология» (011600), « Ф арм ация» (040500)

Воронеж

2003

У тв ерж дено научно-м етодическим сов етом биолого-почв енного ф акультета, протокол№ 10 от13.11.02

Состав ители: М атасов аЛ.В ., Попов аТ .Н ., Т екунов аН .А .,

Сем ених инаА .В .

Подготов лено накаф едре аналитической и м едицинской биох им ии и

м икробиологии	биолого-почв енного		ф акультета	В оронеж ского
государств енногоунив ерситета.
Реком ендуется для студентов 3		курса в ечернего отделения биолого-
почв енного ф акультета и студентов		2	и 3 курса ф арм ацев тического
ф акультета.

СО Д Е РЖ А Н И Е

С О Д ЕР Ж

А Н

....................................................................................................

В В Е Д Е Н И Е

..........................................................................................................

Работа1. Ц в етны ереакции набелки

..................................................................

Работа2. О саж дениебелков ................................................................................

Работа3. О пределениеизоэлектрической точки белков ...................................

Задачи потем е« А м инокислоты

и белки» ..........................................................

Работа 4. В лияние тем пературы ,

актив аторов и ингибиторов

на скорость

ф ерм ентатив ной

биох им ической

реакции.

О пределение специф ичности

ам илазы

слюны

.....................................................................................................

Работа 5. О пределение константы

М их аэлиса и м аксим альной

скорости

ф ерм ентатив ной реакции...................................................................................

Работа6. О пределениетипаи константы

ингибиров ания...............................

Работа 7.

Ф ерм енты

подж елудочной

ж елезы . О пределение актив ности

ам илазы

в сы в ороткекров и...............................................................................

Работа 8. М етаболизм

глюкозы

организм е челов ека и его наруш ения.

О пределение

концентрации

глюкозы

сы в оротке

кров и

и м оче.

К ачеств енны ереакции накетонов ы етела........................................................

Работа 9.

О бм ен х олестерина в

организм е челов ека и

его наруш ения.

О пределениеконцентрации х олестеринав сы в ороткекров и .........................

Работа

10.

етоды

определения

классиф икация

в итам инов .

К олорим етрический м етод определенияаскорбиновой кислоты в плазм е....

Задачи потем е« В итам ины »..............................................................................

Работа11. К оличеств енноеопределениепиров иноградной кислоты

в кров и

колорим етрическим м етодом

(поУ м брайту) ...................................................

Работа 12.

Биологическое окисление. К оличеств енное определение А Т Ф

креатинф осф атам ы ш ц.......................................................................................

Задачи потем е« М

етаболизм » ..........................................................................

Работа

13.

инеральны й

обм ен

организм е челов ека.

О пределение

концентрации кальцияи х лоридов в сы в ороткекров и....................................

Работа 14.

А зотисты й

обм ен.

О пределение концентрации

м очев ины

сы в ороткекров и.................................................................................................

Работа 15.

О пределение концентрации креатинина в сы в оротке кров и и в

м оче. Расчетклиренсакреатинина....................................................................

Работа 16.

М ех анизм

действ ия адреналина. О пределение адреналина в

сы в ороткекров и.................................................................................................

Заданиепотем е« Перенос генетической инф орм ации» ..................................

ЛИ Т Е РА Т У РА ....................................................................................................

Б и охи м и я

В В ЕД ЕН И Е

(греческоеbios - ж изнь) - это наукао м олекулярны х основ ах

ж изни. О наизучаетх им ический состав организм ов , прев ращ ениев ещ еств и

энергии, котороеосущ еств ляетсяв процессеих ж изнедеятельности. В опросы

и задачи, представ ленны е в данном	м етодическом	пособии,	призв аны
акцентиров ать в ним ание студента	на основ ны х	в опросах	учебной

програм м ы , в ы зв атьинтерес к познанию этой ув лекательной области науки. Лабораторны е работы дают в озм ож ность в х оде их в ы полнения осв оить основ ны еприем ы в ы деления и количеств енного определения биом олекули научитьсяоценив атьинф орм атив ностьбиох им ических тестов при некоторы х патологических состояниях

Р абота 1. Ц ветн ы е реакциин а белки

1. Биуретов ая реакция: обуслов лена наличием пептидны х св язей в белках и полипептидах , благодаря которы м в щ елочной средес солям и м еди образуют Си— Nа-ком плексную соль полипептидов и белков сине- ф иолетов ого цв ета. К 1 м лраств орабелкадобав ляют1 м л10%-го раств ора

NaOH и 1-2 капли 1%-го	раств ора	CuSO4. Появ ляется	ф иолетов ое
окраш ив ание.
2. К сантопротеинов ая	реакция	основ ана на	способности

присутств ующ их в м олекуле белка аром атических ам инокислот (тирозина, триптоф ана и ф енилаланина) образов ы в ать с концентриров анной азотной кислотой при подогрев ании ж елтоокраш енны е нитросоединения. К 1 м л раств ора белка прилив ают 0,5 м л концентриров анной HNO3. В ы падает осадок, которы й при подогрев ании частично раств оряется, при этом раств ор приобретаетж елтую окраску. Е сли послеох лаж дения в пробирку добав ить1

м л концентриров анного	раств ора ам	м иака, то ж елтое окраш ив ание
перех одит в оранж ев ое	в следств ие	прев ращ ения нитропроизв одны х

циклических ам инокислотв соли х иноидной структуры . Ф енилаланинлучш е нитруетсяпри добав лении см еси концентриров анны х Н NО 3 и H2SO4.

3. Реакция на триптоф ан. К 1 м л раств ора белка прилив ают 2 м л концентриров анной Н Сl и нагрев ают, не дов одя до кипения, чтобы не улетучился х лористы й в одород. О садок, в ы пав ш ий при добав лении кислоты , при подогрев ании раств оряется, и ж идкость окраш ив ается в ф иолетов ы й цв ет. Э та реакция указы в ает на наличие в яичном белке не только триптоф ана, но и углев одов : триптоф ан реагируетс оксим етилф урф уролом , образующ им ся из м оносах аридов , в результате чего в озникает ф иолетов о- красноесоединение.

5. Реакция с ацетатом св инца. Полож ительная реакция указы в ает на наличие в белков ой м олекуле атом ов серы цистеина и цистина. К 1 м л раств ора белка добав ляют 2 м л1%-го NaOH, перем еш ив ают, кипятят 2-3 м ин., затем прибав ляют 1-2 капли 5%-го (CH3COO)2Pb и продолж ают нагрев ать до в ы падения черного осадка PbS. Реакция идетпо следующ ем у урав нению:

R-SH+2NaOH → Na2S+R-OH+H2O Na2S+(CH3COO)2Pb → РbS+2СН зСО ONa

5 6. Н ингидринов ая реакция указы в аетнаприсутств иев ам инокислотах

α-ам иногрупп. При этом				происх одитв ы делениеСО 2. К 0,2-0,5 м лраств ора
ам инокислот		прибав ляют 2-3			капли		0,1 %-го ацетонов ого				раств ора
нингидрина,		кипятят 2		м ин.	Появ ляется			сине-ф иолетов ое окраш енное
соединение		в следств ие		в заим одейств ия			дв ух		м олекул нингидрина с
ам инокислотой.
				Р абота 2. О сажден ие белков
Характерны м			св ойств ом белков ы х в ещ еств						яв ляется их	способность
осаж даться из раств оров				под	в оздейств ием			различны х ф акторов среды .
О саж дение	белков		нейтральны м и			солям и		(« в ы салив ание»),			наприм ер
(NH4)2SO4,	NaCL,		Nа2SO4, наш ло			ш ирокое прим енение в				их	очистке,

поскольку послеудаления соли белки в осстанав лив аютсв ои биологические ф ункции. При нагрев ании белков , добав лении солей тяж елы х м еталлов , экстрем альны х значениях рН и действ ии других ф акторов белки в ы падаютв осадок в следств ие денатурации. При этом их ков алентная структура не претерпев аетизм енений, но биологическая ф ункция у больш инств а белков утрачив ается. Реакции осаж дения белков используют в биох им ической практикедляудалениябелков ы х в ещ еств и дляопределенияих содерж анияв биологическом м атериале.

1. О саж дениебелков кипячением . В пробирку налив ают1 м лраств ора белкаи нагрев аютдокипения. Происх одитденатурация белка. Болееполное осаж дение белка достигается слабы м подкислением его уксусной кислотой или добав лением других электролитов : в 1 м лраств орабелкадобав ляют1-2


капли 1 %-го раств ора уксусной						кислоты		и нагрев ают. В ы падает осадок
белка.	Я в ление денатурации				(потеря			натив ны х		св ойств )	в ы зы в ается
глубоким и наруш ениям и структуры						белка.
2.	О саж дение белков				солям и		тяж елы х			м еталлов .	Белки при
в заим одейств ии с солям и				тяж елы х м еталлов адсорбируют их , образуя
нераств орим ы есолеобразны еи ком плексны есоединения.
К	1 м лраств ора белка прилив ают по каплям 5%-й раств ор CuSO4.
Появ ляетсяосадок, раств оряющ ийсяв избы ткереактив а.
К	1 м лбелка прилив ают по каплям								5%-й раств ор ацетата св инца.
Появ ляетсяосадок, раств оряющ ийсяв избы ткереактив а.
3. О саж дениебелков реактив ам и наалкалоиды . К группереактив ов на
алкалоиды		принадлеж ит		таннин,			пикринов ая			кислота,	ж елезисто-
синеродистая кислота, раств оры						йодной		ртути в		йодистом	калии и др.
Способность белков			осаж даться тем и ж е реактив ам и, что и алкалоиды ,
объ ясняется		образов анием		нераств орим ы х					солеобразны х соединений с
основ ны м и		азотисты м и		группам и:				пиррольны м и,			индольны м и,
им идазольны м и. В			этом соединении				белок		яв ляется катионом , поэтом у
реакцияпротекаетв кислой среде.

К1 м л слегка подкисленного уксусной кислотой раств ора белка прилив ают3-5 капельнасы щ енногораств орапикринов ой кислоты . В ы падает осадок белка.

К1 м лраств орабелка, подкисленного 1-2 каплям и раств орауксусной кислоты , прилив ают3-5 капельраств оратаннина. В ы падаетосадок белка.

4. О саж дение белка кислотам и. Проба Геллера. Реакция основ ана на дегидратации и денатурации белкапри действ ии крепкой азотной кислоты . К

1-2 м л концентриров анной HNO3 осторож но,		по стенкам		(в наклонном
полож ении пробирки) прилив ают пипеткой 0,5-1			м л раств ора белка. Н а
границе	дв ух соприкасающ их ся ж идкостей	образуется		белое кольцо
св ернув ш егосябелка.
К 1 м лраств ора белка добав ляют несколько капель 20%-го раств ора
сульф осалицилов ой кислоты , перем еш ив ают. В ы падаетосадок белка.
К	1 м л раств ора белка прилив ают	1	м л 10%-го раств ора
трих лоруксусной кислоты . В ы падаетосадок белка.
5.	О саж дение белков сульф атом ам м ония.		К 2 м л раств ора белка

прилив ают2 м лнасы щ енного раств орасульф атаам м ония и перем еш ив ают. В ы падает осадок глобулинов в следств ие дегидратации и нейтрализации заряда белков . Через 5 м ин осадок отделяют центриф угиров анием и к надосадочной ж идкости добав ляютрастерты й в порош ок сульф атам м ония

до полного насы щ ения. В ы падает осадок	альбум ина. Полноту осаж дения
белков пров еряют биуретов ой реакцией.	Д ля того, чтобы пров ерить

обратим ость реакции осаж дения, к осадку белка прилив ают рав ны й

содерж им ом у пробирки объ ем	дистиллиров анной в оды	и перем еш ив ают.
Раств орение осадка св идетельств ует об обратим ости		этого процесса и
сох ранении натив ной структуры	белка.

6. О саж дение белков в ольф рам атом натрия. К 1-2 м лраств ора белка прибав ляют 3-5 капель 5%-го раств ора в ольф рам ата натрия и 3-5 капель 0,4 н. раств орасерной кислоты . В ы падаетосадок белков . Полноту осаж дения белков пров еряютбиуретов ой реакцией.

Р абота 3. О пределен ие изоэлектрической точкибелков

В следств иеналичия способны х к ионизации групп (концев ы х групп -

СО О Н	и	-NH2,	а такж е боков ы х групп дикарбонов ы х				и диам инокислот)
м олекулы		белков обладают электрическим зарядом .				В	кислой среде белки
им еют		сум м арны й		полож ительны й	заряд, в	щ елочной		среде –
отрицательны й.			При	определенном	значении	рН	среды	в еличина

полож ительны х и отрицательны х зарядов станов ится одинаков ой. Значение


рН , при котором		белок им еетм иним альны й электрический заряд,					назы в ают
изоэлектрической		точкой	(И Э Т ).	В	этом	состоянии белки	наим енее
устойчив ы	в раств оре и в ы падают в				осадок,	им еют наим еньш ее значение
в язкости,	раств орим ости,		степени	гидратации и электропров одности, не
передв игаются к		электрическим		полюсам .		К аж ды й белок им еет св ое
значениеИ Э Т . Сущ еств уетряд способов определенияИ Э Т белков .

Реактив ы : 0,2%-й раств ор казеина или 0,5%-й раств ор ж елатина (раств оряют0,2 г казеинаили 0,5 г ж елатинапри подогрев ании в 10 м л1 н.


раств ораацетатанатрияи дов одятв одой до100 м л).
	Ход работы .	В каж дую	из	8 пронум еров анны х		пробирок	по
ниж еприв еденной		сх ем е (табл.1)		в носят соотв етств ующ ие раств оры . В
каж дую пробирку добав ляют 0,5 м л 96% этанола. В					той	пробирке,	где
обнаруж ится м аксим альное			пом утнение среды		(в изуально		или

неф елом етрически), рН раств орабудетсоотв етств ов атьИ Э Т белка. О тм етьте степеньпом утнениязнакам и « ¾», « +», « ++» или « ++» в таблице.

			Приготов лениераств оров с заданны м								рН	Т аблица1.
			Приготов лениераств оров с заданны м								рН
Реагенты , м л							Н ом ерапробирок
			1		2	3		4	5	6		7		8
Н 2О			8,4		7,75	8,75		8,5	8,0	7,0		5,0		1,0
0,01 н. СН 3СО О Н			0,6		1,25	-		-	-	-		-		-
0,1 н. СН 3СО О Н			-		-	0,25		0,5	1,0	2,0		4,0		8,0
Раств ор белка			1,0		1,0	1,0		1,0	1,0	1,0		1,0		1,0
pH			5,8		5,6	5,3		5,0	4,7	4,4		4,1		3,8
Степень
пом утнения
		Задачипо теме «А мин окислоты ибелки»
					В ариан т № 1
а)	И зобразите			полную		структуру			следующ их				пептидов
(ионизиров анны егруппы				изобразитев протониров анном						состоянии): 1) Met-
Glu-Gly-His; 2) Phe-Asp-Phe-Thr.
б) Биологическая оценка белков							как ком понентов				пищ и. О снов ны м
критерием	оценки белков			в питании яв ляется наличие в							них	незам еним ы х

ам инокислот. Д айтебиологическую оценку следующ им гексапептидам :

1)Glu-Asp-Pro-Ala-Cys-Gly;

2)Glu-Asp-Pro-Ala-Val-Cys;

3)Glu-Val-Pro-Thr-Ala-Gly;

в ) Раств орим ость полипептидов зав исит от степени полярности группы , особенно отчислаионизируем ы х групп: чем больш еионизируем ы х групп, тем в ы ш ераств орим остьполипептида. К акой полипептид из каж дой пары прив еденны х ниж еболеераств орим в данны х услов иях ?

1)(Gly)30 или (Glu)30 при рН 7;

2)(Lys-Ala)20 или (Ile-Met)20 при рН 3,0

г) Почем у подкисш еем олоко св ерты в ается при кипячении? Чтонуж но

сделать, чтобы избеж атьэтого? Почем у несв ерты в аетсясв еж еем олоко?

			8
		В ариан т № 2
а)	И зобразите	полную	структуру	следующ их		пептидов
(ионизиров анны егруппы		изобразитев протониров анном состоянии): 1) Met-
Leu-Val-Pro; 2) Phe-Ala-Trp-Tyr.
б) Биологическая оценка белков как ком понентов					пищ и.	О снов ны м
критерием	оценки белков	в питании яв ляется наличие в			них незам еним ы х

ам инокислот. Д айтебиологическую оценку следующ им гексапептидам :

1)Glu-Asp-Pro-Ala-Cys-Gly;

2)Glu-Asp-Pro-Ala-Val-Cys;

3)Glu-Val-Pro-Thr-Ala-Gly;

в) Э лектроф орез ам инокислотнабум аге. К аплю раств ора, содерж ащ его

см есь лейцина, аспарагинов ой кислоты , аргинина,	нанесли на полоску
бум аги, предв арительно см оченную буф ером с рН 6,	и к концам полоски

прилож или электрическоенапряж ение. К акая ам инокислотабудетдв игаться

каноду? К акаяк катоду? К акаяостанетсянастартов ой точкеили в близи нее?

г) Ф ункции белков . При ум еньш ении концентрации общ его белка в кров и у челов ека пов ы ш ается в осприим чив ость к инф екциям , появ ляются

отеки в тканях , наруш ается кислотно-основ ноесостояниеорганизм аи обм ен в ещ еств . О бъ яснитепричину этих яв лений.

		В ариан т № 3
а)	И зобразите	полную	структуру	следующ их		пептидов
(ионизиров анны егруппы		изобразитев протониров анном			состоянии): 1) Tyr-
Cys-Val-Lis; 2) Thr-Asn-Met-Arg.
б) Биологическая оценка белков как ком понентов					пищ и. О снов ны м
критерием	оценки белков	в питании яв ляется наличие в			них	незам еним ы х

ам инокислот. Д айтебиологическую оценку следующ им гексапептидам : 1) Gln-Cys-Pro-Thr-Ala-Ile;

2) Val-Pro-Lys-Thr-His-Phe;

в ) Пепсин ж елудочного сока (рН 1,5) им еет изоэлектрическую точку И Э Т =1, т.е. нам ногониж е, чем другиебелки. К акиеф ункциональны егруппы долж ны бы тьв пепсинев относительно больш ом числе, чтобы этотф ерм ент м ог им еть такую низкую И Э Т ? К акие ам инокислоты им еют эту группу в св оем состав е? Н апиш итеструктурны еф орм улы этих ам инокислот.

г) При х им ическом способезав ив ки в началев осстанав лив ают, азатем окисляюттиолов ы е(-SH) группы белков , в х одящ их в состав в олос. И сх одя из особенностей пространств енногостроениябелков в олос, объ ясните, какие м огутпроисх одитьизм ененияв структуребелкапри этом ?

			В ариан т № 4
а)	Полипептиды назы в ают путем перечисления ам инокислот (от N-
конца к	C-концу),	зам еняя в	случае больш инств а ам инокислот – ин (-ат)
суф ф иксом – ил.		Н азв ание	последней ам инокислоты не изм еняется.

Н арисуйтеструктуру глициларгинилтреонилцистеинапри рН 7.

б) Биологическая оценка белков как ком понентов пищ и. О снов ны м критерием оценки белков в питании яв ляется наличие в них незам еним ы х ам инокислот. Д айтебиологическую оценку следующ им гексапептидам :

1)Glu-Val-Pro-Thr-Ala-Gly;

2)Val-Pro-Lys-Thr-Ala-Phe;

3)Val-Leu-Met-Thr-Trp-Lys.

в ) Раств орим ость полипептидов зав исит от степени полярности группы , особенно отчислаионизируем ы х групп: чем больш еионизируем ы х

групп, тем	в ы ш е раств орим ость полипептида. К акой полипептид более
раств орим	в прив еденны х услов иях ?

1)(Ala-Asp-Gly)5 или (Asn-Ser-Arg)5 при рН 10,0;

2)(Ala-Asp-Gly)5 или (Asn-Ser-Arg)5 при рН 3,0.

г) И з см еси белков необх одим о в ы делить белок с изоэлектрической

точкой 9,0. О стальны е белки им еют изоэлектрическую точку около 6,0.

Опиш итеспособполученияэтогобелка.

Работа 4. В лиян ие температуры , активаторов иин гибиторов н а скоростьфермен тативн ой биохимической реакции. О пределен ие

специфичн остиамилазы слюн ы .

Влиян ие температуры н а скоростьфермен тативн ой реакции

Втерм олабильности ф ерм ентов м ож ноубедиться наприм ередейств ия

ам илазы слюны .	Ф ерм ент ам илаза осущ еств ляет гидролиз		крах м ала через
пром еж уточны е	продукты	распада (декстрины )	до м альтозы .

Н ерасщ епленны й крах м алс йодом даетсинееокраш ив ание, адекстрины в зав исим ости отв еличины св оих частиц даютс йодом ф иолетов ую, красно-

бурую, оранж ев ую	окраску или в ообщ е не окраш ив аются. М альтоза,
конечны й продукт	распада крах м ала, не окраш ив ается раств ором йода.

Т аким образом , по окраскераств орайодам ож носудитьостепени гидролиза

крах м ала.
Ход	работы . В центриф уж ную пробирку собирают 1	м л слюны	и
дов одят дистиллиров анной в одой до 10 м л. Затем берут 4		пробирки:	в

каж дую пом ещ аютпо 1 м л1 %-го раств оракрах м алаи по 1 м лразв еденной слюны . Пробирки пом ещ аютна15 м инут: перв ую - в терм остат(при 37° С); в торую – в ледяную баню (при 4° С); третью – накипящ ую в одяную баню (при 100° С); четв ертую остав ляют при ком натной тем пературе (+20° С). Через 15 м инутпробирки ох лаж даюти в каж дую пробирку добав ляютпо 2 капли йода. По интенсив ности и цв ету в озникающ его окраш ив ания судято скорости и глубинепротеканияф ерм ентатив ной реакции гидролизакрах м ала


ам илазной	слюны .	Д елают в ы в од		о в лиянии	тем пературы		на скорость
ф ерм ентатив ной биох им ической реакции.
	С пецифичн остьдействияфермен тов
По	специф ичности		действ ия ф ерм енты		делят на		дв е	группы :
обладающ ие абсолютной			специф ичностью		и	с	относительной
специф ичностью.		О тносительная		специф ичность		наблюдается,		когда
ф ерм ент	катализирует реакции			одного типа с		более чем		одним

структуроподобны м субстратом . А бсолютная специф ичность прояв ляется тогда, когда ф ерм ент действ ует лиш ь на единств енное в ещ еств о и катализируетлиш ьопределенноепрев ращ ениеданногов ещ еств а. Н априм ер, ф ерм ент уреаза катализирует гидролиз м очев ины ; сах араз а катализирует прев ращ ение только сах ароз ы . Стереоспециф ичность – ф ерм ент катализирует прев ращ ение только одного из в озм ож ны х стереоизом еров субстрата.

Ход работы . В дв е пробирки налив ают по 1 м л раств ора ам илазы

(разв еденной слюны ) и в перв ую добав ляют 1 м лраств ора крах м ала, а в о

в торую – 1 м лраств орасах ароз ы . Пробы		в ы держ ив аютв терм остате15 м ин.
при 37ºС. Затем	с перв ой пробой (субстрат+ крах м ал) проделы в ают дв е
реакции: пробу	Т ром м ера и реакцию	с раств ором йода (к 5 каплям

инкубационной см еси добав ляют1-2 капли раств орайода). Сов торой пробой проделы в аютреакцию Т ром м ера.

Реакция Т ром м ера: в пробирку добав ляют0,5 м лр-расульф атам еди и прибав ляют по каплям (до появ ления осадка) раств ор гидроксида натрия. Д алее пробирку с содерж им ы м нагрев ают и наблюдают за появ лением окраски. Н аличиекирпично-красногоокраш ив анияуказы в аетнаприсутств ие глюкозы . Сах ароз анеим еетсв ободной альдегидной группы , поэтом у недает реакции Т ром м ера. Реакция Т ром м ерам ож етбы тьполож ительной только в том случае, если сах арозарасщ епиться насв ои состав ны ечасти – глюкозу и ф руктоз у.

Д елают в ы в од о специф ичности ам илазы – гидролизует ли ам илаза сах арозу, или толькокрах м ал?

В лиян ие активаторов иин гибиторов н а активн остьамилазы слюн ы

Ход работы 1. В одну пробирку в носят1 м лH2O, в о в торую – 0,8 м л в оды и 0,2 м л1 %-гораств ораNaCl, в третью – 0,8 м лв оды и 0,2 м лраств ора сульф атам еди (II). 2. В каж дую пробирку добав ляютпо 2 м лразв еденной (1:10) слюны , содерж им оепробирки перем еш ив ают, добав ляютпо 0,5 м лрракрах м алаи остав ляютстоятьпри ком натной тем пературе. 3. В это в рем я готов ят три пробирки с в одой (по 1 м лв каж дой), подкраш енной каплей раств орайода, и добав ляютв них по 2-3 капли содерж им ого опы тны х проб. Н аблюдают окраш ив ание в зав исим ости отстепени расщ епления крах м ала

ам илазой. В перв ой	пробирке появ ляется ф иолетов ая или красно-бурая
окраска, в о в торой	пробирке,	где ионы	х лора играют роль актив атора,
появ ляется ж елтая окраска, в		третьей пробирке, где ионы м еди торм озят
действ ие ам илазы , окраска остаeтся синей. Е сли описанной картины				не
наблюдается, тоопы тпов торяютчерез 10			м ин.
Записы в ают в	тетрадь полученны е наблюдения. Д елают в ы в оды			о

характерев лияниях лориданатрияи сульф атам еди наактив ностьам илазы .

Работа 5. О пределен ие кон стан ты М ихаэлиса имаксимальн ой

скоростифермен тативн ой реакции

При постоянной концентрации ф ерм ентакрив ая зав исим ости скорости катализируем ой им реакции от концентрации субстрата им еет

1 / 61 2 3 4 5 6 > Следующая >>>

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

#
21.05.2015654.33 Кб6nov06114.pdf
#
20.05.2015397.31 Кб14NOZ_SUM_by_everyone.doc
#
21.05.2015185.34 Кб5o.g.boyko_ageing_mechanism_in_mammals.pdf
#
20.12.20182.85 Mб23obrabotka_zagotovok_na_protyazhnykh_stankakh_a.doc
#
21.05.2015552.08 Кб8obshestvo2015demo-proekt+kodif+spec.pdf
#
21.05.2015443.69 Кб7oct03002.pdf
#
19.03.20162 Mб61ODEGuide-arpfshr6kt7.doc
#
20.05.2015105.47 Кб25Oformlenie_diploma_2011.doc
#
20.05.201571.42 Кб48OIK.docx
#
20.03.201617.35 Mб59Oracle DB Administration.pdf
#
09.11.20181.22 Mб27org_evm.doc