oct03002

21

злокачеств енны х опух олях , некоторы х

пораж ениях печени, эндокринны х

и 15 г глицеринав 1 лH2O.

м лм очи.

Ход определения. К

4 м лреактив а Гайнеса прилив ают 1

Став ятв кипящ ую баню на2 - 3 м инуты . В

присутств ии глюкоз ы появ ляется

ж елтая или красная окраска ж идкости и осадок.

При отсутств ии глюкозы

цв етж идкости нем еняется(остаетсясиним ).

О ценка

качеств а:

полож ительная;

слабо

полож ительная; слабо

отрицательная; отрицательная.

К оличествен н ы й метод (А льтгаузен а) определен ияглюкозы мочи

Принцип

м етода.

Глюкоза при

нагрев ании с NaOH

образует

окраш енноесоединение.

Реактив ы : 10%-й раств ор NaOH.

Ход определения: К

4 м лисследуем ой м очи прилить 1 м л10%-го

Приготов ление контрольны х

раств оров . В зять 1 г сух ой глюкоз ы и

раств

орить в 25 м л безбелков ой,

безглюкозной м очи. И з этого 4%-го

раств ораготов ятразв едения:

CH3

C=O + 3I2 + 4NAOH

CHI3

+

CH3COONA + 3NAI +

3H2O

О садок йодоф орм а

CH3

(ж елты й, кристаллический)

ацетон

П роба Л егаля

Реакция основ ана на том , что ацетон и

ацетоуксусная кислота в

щ елочной среде образуют с нитропруссидом

натрия ком плексны е анионы

оранж ев о-красного цв ета, перех одящ его

в

в иш нев о-красны й

при

гидроксида натрия. При

кетонурии появ ляется оранж ев ое окраш ив ание,

которое прев ращ ается

в в иш нев ое при

добав лении 5-8 капель

концентриров анной уксусной кислоты .

П роба Г ерхардта

Е нольная ф орм а ацетоуксусной кислоты ,

в заим одейств уя с х лорны м

CH3

CH3

C=O

C-OH

CH2

CH

COOH

COOH

ацетоуксусная

ацетоуксуснаякислота

кислота(кетоф орм а)

(енольнаяф орм а)

Холестерин (х олестерол) яв ляется

соединением ,

типичны м для

м етаболизм а ж ив отны х , и содерж ится

в

значительны х

количеств ах в

продуктах ж ив отного происх ож дения - в

яичном ж елтке,

м ясе, печени и

незам еним ы м

структурны м ком понентом м ем бран. Холестеринсодерж итсяв

состав е липопротеинов либо в св ободной

ф орм е, либо в

в иде эф иров

с

длинноцепочечны м и ж ирны м и кислотам и.

Липопротеины

транспортируют

х олестерин

в

кров отоке, где легко

устанав лив ается

рав нов есие

с

х олестерином ,

в х одящ им в состав других липопротеинов и м ем бран.

23

Липопротеины

плазм ы

кров и.

Н ераств орим ость ж иров

в в оде

обуслов

лив ает необх одим ость сущ еств ов ания специальны х

транспортны х

ф орм для переноса их кров ью. О снов ны е из этих

ф орм :

х илом икроны ,

липопротеины

очень низкой

плотности

(ЛПО Н П,

пре-β-липопротеины ),

липопротеины

низкой плотности (ЛПН П,

β-липопротеины ),

липопротеины

в ы сокой плотности (ЛПВ П, α-липопротеины ). Липопротеины

представ ляют

собой м елкие (до 1

м км

диам етром ) глобулярны е образов ания, в

которы х

м олекулы ф осф олипидов , х олестерина и белков располож ены

радиально

гидроф ильной

частью к

пов ерх ности,

гидроф обной частью

к

центру.

Ц ентральная

часть

глобулы

занята

триацилглицеролам и и

эф ирам и

белкаи обратнопропорциональнасодерж анию триацилглицеролов .

О бм ен х олестерина. Холестерин синтезируется в о м ногих

тканях

из

ацетил

в

-К оА . Приблизительно полов ина х олестерина, им еющ егося

организм е, образуется путем биосинтеза (около 500 м г/сутки),

а другая

полов инапоступаетс пищ ей. Холестерин синтезируется глав ны м

образом

в

других стероидов ,

а им енно кортикостероидов (горм онов

надпочечников ),

полов ы х горм онов ,

ж елчны х кислоти в итам ина Д . И з организм а челов ека

еж еднев но в ы в одится около 1 г х олестерина. Прим ерно полов ина этого

количеств а экскретируется с ф екалиям и

после прев ращ ения в ж елчны е

кислоты . О став ш аяся часть в ы в одится в

в иде нейтральны х стероидов .

Ж елчны е кислоты

образуются из х олестеринав печени. О ни способств уют

эм ульгиров анию

ж иров в процессе пищ ев арения и в сасы в анию ж иров

в

киш ечнике.

Значительная доля солей ж елчны х кислот,

поступающ их

с

ж елчью в

киш ечник, в сасы в ается в киш ечнике и через

в оротную в ену

в озв ращ ается в печень (киш ечно-печеночная циркуляция ж елчны

х кислот).

Д ляв осполненияпотерьж елчны х кислотв печени постоянноосущ

еств ляется

синтез

ж елчны х

кислот из х олестерина в

количеств ах ,

экв ив алентны х

в ы в одим ом у.

Н аруш ения обм ена х олестерина. В се состояния и заболев ания,

при

которы

х

изм еняется

содерж ание х

олестерина в

организм е,

кров и

или

отдельны х

тканях , м ож но разбить на три группы :

перв ая х арактеризуется

изм енением

содерж ания х олестеринав плазм еи тканях ; в торая объ единяет

в се в иды

гипер-

и

гипох олестеринем ий; к

третьей

относятся болезни

локального накопления в различны х

клетках

и тканях

х олестерина и его

произв одны х .

Холестериняв ляется основ ны м

ком понентом

ж елчны х кам ней, однако

его глав ная роль в патологии состоит в том ,

что он служ ит ф актором ,

в ы зы в ающ им

атеросклероз

ж изненно в аж ны х

артерий голов ного м озга,

сердечной м ы ш цы

и других органов .

А теросклероз

–

патология,

х арактеризующ аяся

отлож ением

х олестерина

в

стенках

сосудов .

Глав ная

причина

отлож ений

–

гиперх олестеринем ия

на

ф оне

пов реж дений

эндотелия,

в ы зв анны х

24

гипертонией, в оспалительны м и процессам и,

пов ы ш енной св ерты в аем остью

кров и, в оздейств ием токсических

в ещ еств

(наприм ер,

ком понентов

табачного ды м а). В пов реж денны х

участках

сосудистой стенки эндотелий

оказы в ается проницаем ы м для ряда в ещ еств .

В стенку

сосуда м огут

Гиперх олестеринем ия – результат наруш ения

в

одном из зв еньев

слож ной

биох им ической

систем ы ,

в ключающ ей синтез х олестерола,

его

обм ен,

транспорт и

в ы в едение,

ф орм иров ание

липопротеинов ,

их

полиненасы щ енны х

ж ирны х кислот яв ляется

ф актором ,

сниж ающ им

содерж аниех олестеринав кров и.

Лабораторная

диагностика наруш ений

обм ена

х олестерина.

Пов ы ш ение показателя

в ы ш е 6,5 м м оль/л - указание на в озм ож ность

разв ития атеросклероза.

Т акж е определяют концентрацию х олестерина в о

25

им еющ ийся

в

пробе х олестерин окисляется

кислородом

в оздух а под

действ ием

х олестеролоксидазы

с образов анием

экв им олярного количеств а

перекиси в одорода. Под действ ием

пероксидаз ы

перекисьв одородаокисляет

х ром огенны е

субстраты

с

образов анием

окраш енного

продукта.

И нтенсив ность окраски

пропорциональна концентрации

х олестерина в

пробе.

Реактив ы .

1.

Рабочий

реагент:

0,1

м оль/л ф осф атны й

буф ер,

содерж ащ ий

20

м м оль/лф енол, детергенты ,

актив аторы

и стабилизаторы

ф ерм ентов ,

х ром огены ,

200

U/л

х олестеролэстеразы ,

250 U/л

х олестеролоксидаз ы ,

500

U/л пероксидазы .

2.

Стандартны й

раств ор

х олестеринасодерж ит5,17 м м оль/лх олестерина.

Ход

работы .

В трех

пробирках

–

опы тной,

калибров очной и

контрольной – см еш

ив аютреактив ы

согласнотаблице6.

Содерж им ое пробирок

тщ ательно перем еш ив ают и инкубируют не

м енее 5

м ин.

при

тем пературе 37°С.

И зм еряют оптическую

плотность

опы тной и калибров очной пробпротив контрольной пробы

при длинев олны

490-500 нм . О краска стабильна в

течение 2 часов

при предох ранении от

прям огосолнечногосв ета.

Т аблица6.

Ход определениях олестерина

Реактив ы , м л

О пы тнаяпроба

К алибров очная

К онтрольная

проба

проба

Сы в оротка

0,02

-

-

В ода

-

-

0,02

дистиллиров анная

Рабочий реагент

2,0

2,0

2,0

Стандартны й раств ор

-

0,02

-

х олестерина

допустим оесодерж ание– 5,2 – 6,5 м м оль/л;

патологическоесодерж ание> 6,5 м м оль/л.

Д иагностическое

значение теста. У в еличение

концентрации

ия – яв ляется

достов ерны м

х олестерина в кров и –

гиперх олестеринем

М етоды определения в итам инов в

биологических объ ектах

делят на

ф изико-х им ические и биологические.

Н екоторы е в итам ины

обладают

нм .

Е го

концентрацию

определяют

спектроф отом етрически. При

в заим одейств ии в итам инов

с рядом х им ических

соединений наблюдаются

х арактерны е цв етны е реакции. Поэтом у

в итам ины

м ож но

определить

ф отоколорим етрически, наприм ер, в итам инB1 - при пом ощ и диазореактив аи

т.д.

Д ля

определения

в итам инов B1,

В 2

и

других

прим еняют

2,6-дих лорф енолиндоф енола. Э ти

м етоды

позв оляют

судить о

количеств енном

содерж ании в итам инов

в исследуем ом

пищ ев ом продукте

или органах и тканях ж ив отны х и челов ека.

Д ля

в ы яснения

обеспеченности

организм а челов ека

каким -либо

в итам ином

часто количеств енно определяютсоотв етств ующ ий в итам ин или

продукт его обм ена в

сы в оротке кров и, м оче или биопсийном

м атериале.

Э кскрецию

в итам инов

рассчиты в ают на 1 г

креатинина. О бъ ектив ную

инф орм ацию

об обеспеченности организм а

в итам ином

такж е дает

определение актив ности ф ерм ентов ,

использующ их

в х оде катализа

яв ляется

чув ств ительны м

тестом

оценки обеспеченности

организм а

в итам ином

B1.

основ аны

наопределении того м иним ального

Биологические м етоды

количеств а в итам ина,

которое при

добав лении

к искусств енной диете,

лиш енной

данного

в итам ина, предох раняет

ж ив отное от

разв ития

в итам ина приним ают за единицу (в литературе изв естны

« голубины е»,

« кры сины е» единицы ). Больш оем есто в количеств енном

определении ряда

в итам инов :

ф олиев ой

кислоты ,

в итам ина

В 12 и

др.

в

биологических

ж идкостях , в частности, в кров и,

заним ают м икробиологические м етоды ,

основ анны е

на

изм ерении скорости

роста

бактерий;

последняя

пропорциональна

концентрации

в итам ина в

исследуем ом

объ екте.

К оличеств о в итам инов

принято в ы раж ать,

кром е того,

в

м иллиграм м ах ,

м икрограм м ах , м еж дународны х единицах (ME или IU).

на х им ической

природе, но

до сих

пор сох раняются

и букв енны е

обозначения. В

зав исим ости отраств орим ости в неполярны х

органических

раств орителях

или в в одной

среде

различают ж ирораств орим ы е и

в итам ина предотв ращ ать или

устранять разв итие соотв етств ующ его

заболев ания; далее прив одится

ном енклатурное х им ическое назв ание

каж догов итам ина.

3.

В итам инЕ (антистерильны й, в итам инразм нож ения); токоф еролы ;

4.

В итам инК (антигем оррагический); наф тох иноны .

биоф лав оноиды .

Пом им о

этих дв ух

глав ны х групп в итам инов , в ы деляют группу

разнообразны х

х им ических

в ещ еств , из которы х

часть синтезируется в

организм е, но обладает в итам инны м и св ойств ам и.

Д ля челов ека и ряда

при нагрев ании на в одяной

бане раств оряют 20 г

NaWО 4•2Н 20 и 10 г

Nа2HPО 4•2Н 2О ; в 15 м лв оды

раств оряют 5 м лконцентриров анной H2SO4,

затем в торой раств ор м едленно в лив ают в

теплы й раств ор в ольф рам ата и

см есь кипятят с обратны м х олодильником

в течение 2 ч.). 2. Стандартны й

раств ор аскорбинов ой кислоты (2 м г/м л)

в 0,5%-м

раств оре щ ав елев ой

кислоты .

700 нм .

Расчет. К онцентрацию

аскорбинов ой кислоты

рассчиты в ают по

калибров очном у

граф ику,

построенном у

с

использов анием

св еж еприготов ленного стандартного раств ора

аскорбинов ой кислоты

Т аблица7.

Приготов лениекалибров очны х раств оров аскорбинов ой кислоты

Н ом ера

Реактив ы , м л

Содерж аниеаскорбинов ой

пробирок

Э талонны й раств ор

Н 2О

кислоты , м г/м л

1

1

4

0,4

2

2

3

0,8

3

3

2

1,2

4

4

1

1,6

5

5

0

2,0

В ариан т № 2

1.

П оли неври т

у голуб ей.

В став ш их

классическим и эксперим ентах

голуби,

содерж ащ иеся

на

эксперим ентальной

диете,

утрачив али

координацию дв иж ений и

способность удерж ив ать тело в

рав нов есии.

У ров ень пирув ата в

кров и и

м озгу этих

птиц значительно прев ы ш ал

норм альны й. Т акое состояние прох одило,

если

голубям

дав али м ясо.

О бъ яснитеэти наблюдения.

В итам ины

: B2, B3

(пантотенов ая кислота),

B5

(PP), Bс

(ф олиев ая

кислота), С, А , Д

, К .

Биологическая роль: а –

участв ует в

переносе ацильны х

групп; б –

опротеинов ;

в

–

необх одим

для

образов ания

в х одит в

состав

ф лав

гидроксилизина и

гидроксипролина в

состав е коллагена; г

–

в

состав

м олекулы

в х одятглутам инов ая и параам инобензойная кислоты ; д – в х одитв

состав ф оточув ств ительны х элем ентов

глаза; е –

образуется в

кож е под

в лиянием

ультраф иолетов ы х

лучей;

ж –

участв ует

в образов ании γ-

карбоксиглутам инов ой кислоты ; з – в х одитв состав Н А Д + и Н А Д Ф +.

3. О бъ ясните,

почем у в

детском

в озрасте потребность в

в итам инах

в ы ш е, чем

у в зрослы х .

В ариан т № 3

1.

Lactobacillus

casei

–

представ ители

сем ейств а

бактерий,

используем ы х для

получения

таких

продуктов

брож ения,

как

йогурт,

кв аш еная

капуста,

соленья,

не

способны

синтезиров ать

рибоф лав ин.

секреторной ф ункции

добав

очны х клеток ж елудка; б –

яв ляется

антиоксидантом ; в –

при

гипов итам инозе наруш ается

структура

стим улирует отлож ение кальция и ф осф ора в

костях ; з –

в х одит в состав

Н А Д Ф Н .

3. При перех оде на рацион с в ы соким

содерж анием

белка организм

содерж ащ ей рибоф лав ин, пиридоксин и четы ре ам инокислоты . Е сли

в

культуральную среду добав итьполны й набор ам инокислоти рибоф лав ин,

то

кислот; д –

стим улятор биосинтеза протром бина; е – ослабляет цепны е

св ободнорадикальны е процессы ;

ж

–

участв ует

в

реакциях

карбоксилиров ания; з – в х одитв состав Н А Д Ф Н .

3. При

расследов ании

дорож но-транспортного происш еств ия бы ло

установ лено,

что в одитель страдает гипов итам инозом .

Э то

послуж ило

причиной столкнов ения дв ух

ав том обилей

в

ночное в рем я.

Н едостаток

какогов итам инаприв елк трагедии?

В ариан т № 5

1. Бактерии Streptococcus faecalis, обитающ ие в

толстом

киш ечнике,

нуж даются в

в итам ине ф олиев ой

кислоте.

Е сли в

питательной среде

ф олиев ой

кислоты . Почем у бактерии нуж даются в ф олиев ой кислоте?

Почем у потребность в ф олиев ой

кислоте исчезает при добав лении в

культуральную среду аденинаи тим ина?

2. В

лев ой части страницы

перепиш ите столбиком обозначения