oct03002
.pdf
|
41 |
|
|
кров еносны х сосудов , так |
как м едь необх одим а для синтеза коллагена и |
||
эластина. |
|
|
|
М арганец актив ируетм ногиеф ерм ентатив ны есистем ы , |
он необх одим |
||
для биосинтеза антител, |
для эритропоэза и образов ания |
гем оглобина. |
|
Стим улирует синтез х олестерина и ж ирны х |
кислот, прояв ляя липотропное |
||
действ ие. |
|
|
|
Ц инк в качеств епростетической группы |
в х одитв состав м олекулряда |
||
ф ерм ентов , он обнаруж ен в инсулине. О бладает липотропны м действ ием , норм ализует ж иров ой обм ен, предотв ращ ает ж иров ую инф ильтрацию печени. Н аибольш ееколичеств оцинкасодерж ится в печени, подж елудочной ж елезе, полов ы х ж елезах .
Хлор. Д о 65% в сего х лора нах одится в о в неклеточной ж идкости,
глав ны м анионом |
которой |
яв ляется Сl-. Д о 17% св язано соединительной |
||
тканью и х рящ ам и; 12,4% |
нах одится в нутри клеток. О бм ен х лора тесно |
|||
св язан с обм еном |
натрия, |
но в канальцах почек они м огут в ы деляться и |
||
реабсорбиров атьсянезав исим одруг отдруга. |
|
|||
Ф осф аты . |
В |
цельной кров и больш ая часть ф осф ора нах одится в |
||
эритроцитах в |
в иде органического ф осф ата, в |
плазм е кров и присутств уют |
||
липидны й ф осф ор, следы |
эф иров ф осф орной |
кислоты и неорганический |
||
ф осф ат. 50% общ его ф осф оранах одится в костях , до 20% - в о в неклеточной ж идкости. Ф осф аты играют в аж ную роль в обм енны х процессах : в х одят в состав коф ерм ентов , нуклеинов ы х кислот, ф осф опротеинов , ф осф олипидов .
И з них образуются: |
2,3-бисф осф оглицерат, |
играющ ий в аж ную роль в |
|
регуляции |
транспорта кислорода, ф осф аты |
— обязательны й ком понент |
|
клеточны х |
м ем бран, |
состав ная часть А Т Ф , креатинф осф ата, в ы полняющ их |
|
в аж ную рольв переносеи сох ранении энергии. В м естес кальцием ф осф аты образуют апатиты — основ у костной ткани. Регуляция обм ена ф осф ора аналогичнаобм ену кальцияс тем различием , чтопаратгорм он, пов ы ш ающ ий содерж аниекальцияв плазм екров и, сниж аетсодерж аниеф осф атов , пов ы ш ая их экскрецию почкам и.
К альций. В организм есодерж ится1-1,5 кг кальция. В неклеточны й ион.
Содерж ание в плазм е - |
2,29 - 2,99 м м оль/л, в |
эритроцитах |
- следы . 90% |
|||||||
нах одится в костях , 1% |
- |
в о в неклеточной |
ж идкости. М |
еньш е полов ины |
||||||
кальция в |
плазм е кров и |
нах одится в |
ионизиров анном |
в иде и яв ляется |
||||||
ф изиологически актив ны м , больш ая |
часть — |
св язана с |
белкам и или |
|||||||
представ ленасолям и: ф осф атом , цитратом , сульф атом |
кальция. Н аибольш ей |
|||||||||
кальцийсв язы в ающ ей способностью обладаютальбум ины |
и β-глобулины . |
|||||||||
И оны |
кальция, участв уя в о м ногих |
процессах |
ж изнедеятельности, |
|||||||
работают на уров не клетки и на уров не в неклеточны х |
систем . Е го |
|||||||||
биологическаяроль: |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
- |
необх одим для секреторной актив ности практически в сех эндо- и |
|||||||||
экзокринны х ж елезисты х клеток; |
|
|
|
|
|
|
||||
- |
участв уетв св ерты в ании кров и; |
|
|
|
|
|
||||
|
|
42 |
- |
яв ляется в торичны м |
посредником при м ем бранной передаче |
сигнала, актив ируя40 ф ерм ентов ; |
||
- |
в ы полняет опорную |
ф ункцию, яв ляясь основ ны м ком понентом |
костногоскелета; |
|
|
-обеспечив аетцелостностьм ем бран (в лияетнапроницаем ость), так
как способств ует |
плотной упаков ке белков , |
стабилизируя |
клеточны е |
||||
м ем браны ; |
|
|
|
|
|
|
|
- |
участв ует |
в |
нерв но-м ы ш ечном в озбуж дении и сокращ ении. |
||||
К альций |
приним ает участие в |
создании потенциала покоя (70 |
- 90 м В ), |
||||
ум еньш ая скорость проникнов ения |
полож ительно заряж енны х |
ионов в |
|||||
клетку; |
|
|
|
|
|
|
|
- |
стим улирует |
в ы работку |
гастрина, |
обуслов лив ая |
в ы работку |
||
пищ ев арительны х соков ; |
|
|
|
|
|||
- |
в м есте с инсулином |
облегчает поступление глюкозы |
в клетки. |
||||
М |
ногообразны е ф ункции ионов кальция на пов ерх ности и в нутри клетки |
|
обуслов лены |
его способностью соединяться с нем ем бранны м и ком плексам и |
|
— |
А Т Ф , |
ф осф атам и, белкам и. О снов ны е биологические процессы : |
разм нож ение, пролиф ерация, гибельклетки, — осущ еств ляются при участии кальция.
Содерж ание ионов кальция в плазм е кров и определяют следующ ие
факторы .
1.Состояниекостной ткани — в сеф акторы , ускоряющ иерассасы в ание
костей, ув еличив ают содерж ание кальция и ф осф атов в кров и за счет дем инерализации скелета(резорбции, м обилизации из кости). В сеф акторы , способств ующ ие образов анию костной ткани, ум еньш ают его за счет м инерализации.
2. |
В итам ин D3 и его аналоги способств уют в сасы в анию кальция и |
ф осф атов в киш ечникеи препятств уютих в ы в едению с м очой. |
|
3. |
Паратгорм он стим улирует м обилизацию кальция и ф осф атов из |
костей, |
на уров не почек усилив ает реабсорбцию кальция и ум еньш ает |
реабсорбцию ф осф атов , пов ы ш аетсодерж аниеионов кальцияв плазм е. |
|
4. |
К альцитонин способств ует м инерализации костей, ув еличив ает |
экскрецию ф осф атов с м очой, сниж аетсодерж аниеионов кальцияв плазм е.
5. |
А цидоз прив одит к |
рассасы в анию костей |
(содерж ание кальция |
в озрастает), а алкалоз — к их |
м инерализации (ум еньш ается концентрация |
||
ионов |
кальция в плазм е). |
Регуляцию обм енов |
ф осф ора и кальция |
осущ еств ляют паращ итов идны е, щ итов идны е ж елезы |
через секретируем ы е |
||
им и горм оны : кальцитонин, паратгорм он, атакж ев итам инD3 и кальцитриол.
Паратгорм он. Горм он-полипептид, состоящ ий из |
84 ам инокислотны х |
остатков . Секретируется клеткам и паращ итов идной |
ж елезы в отв ет на |
ум еньш ение концентрации ионов кальция в кров и. О снов ны м и клеткам и- м иш еням и для паратгорм онаяв ляются клетки костей, почек, тонкой киш ки (действ ует опосредов анно через усиление биосинтеза кальцитриола). Паратгорм ондейств уетнаклетки-м иш ени через ц-А М Ф и протеинкиназы .
43
Паратгорм он стим улируетрезорбцию костной ткани с осв обож дением кальция за счет актив ации ф ерм ентов остеокластов , разруш ающ их пром еж уточноев ещ еств о кости. В почках , в клетках дистальны х канальцев , паратгорм он стим улирует реабсорбцию ионов кальция из перв ичной м очи, ноингибируетреабсорбцию ф осф атов , и они в ы в одятся из организм а. Т аким образом паратгорм он ув еличив ает концентрацию кальция (это актив ирует секрецию кальцитонина) и ум еньш аетуров еньф осф атов в кров и.
К альцитриол. |
Хим ическая |
природа |
- |
произв одное |
циклопентанпергидро-ф енантрена. К леткам и-м иш еням и |
|
яв ляются клетки |
||
почек, костей, киш ечника. В ы рабаты в ается при ум еньш ении концентрации
кальция в кров и и усилении секреции паратгорм она. |
Е го предш еств енником |
яв ляется в итам ин D3, которы й гидроксилируется в |
печени (ф ерм ент 25- |
гидроксилаз а), затем в почках (l-гидроксилаза). См естасинтеза(в почках ) он |
|
транспортируется кров ью в киш ечник, гдев клетках слизистой стим улирует синтез кальций-св язы в ающ его белка, которы й располагается напов ерх ности клеток слизисты х и, благодаря св оей в ы сокой способности св язы в ать
кальций, облегчаетего в сасы в ание. И з клетки кальций попадаетв кров оток пoсредств ом Са2+/Na+-А Т Ф -азы .
Н а костную ткань кальцитриол действ ует аналогично паратгом ону: актив ируя ф ерм ентную систем у остеокластов , в ы зы в ает дем инерализацию
кости и ув еличив аетконцентрацию кальция и ф осф атов в кров и. В |
клетках |
||
почек он усилив аетреабсорбцию кальция и ф осф атов . Результатом |
действ ия |
||
кальцитриола яв ляется: |
ув еличение концентрации кальция и ф осф атов |
в |
|
кров и, ингибиров аниесекреции паратгорм она. |
|
|
|
К альцитонин- антагонистпаратгорм онаи кальпептид, состоящ ий из 32 |
|||
остатков ам инокислот. |
В ы рабаты в ается С-клеткам и щ итов идной |
и |
|
паращ итов идной ж елез . Синтезируется сразу в актив ной ф орм е. К оличеств о кальцитонина в кров отоке регулируется концентрацией ионов кальция в кроyв еличениe стим улируетв ы брос кальцитонина в кров ь, а ум еньш ение - подав ляет. К ром екальция, секрецию кальцитонинастим улируютадреналин, глюкагон, гастрин. О рганам и, содерж ащ им и клетки-м иш ени, яв ляютсякости,
почки, печень. |
М ех анизм |
действ ия кальцитонина м ем бранно- |
в нутриклеточны й: |
актив ирует ф осф одиэстеразу, ум еньш ает содерж ание ц- |
|
А М Ф . |
|
|
Д ейств уя на костную |
ткань, кальцитонин ингибирует ф ерм енты |
|
остеокластов , что способств уетсниж ению концентрации кальция в кров и. В клетках почечны х канальцев кальцитонин в ы зы в аетпов ы ш енноев ы в едение
кальция и |
ф осф атов с |
м очой. Т аким |
образом |
кальцитонин в ы зы в ает |
||
ум еньш ение концентрации кальция |
и |
ф осф атов |
в кров и. |
Сов м естное |
||
действ ие |
паратгорм она, |
в итам ина |
D, |
кальцитонина и |
кальцитриола |
|
поддерж ив аетсодерж аниекальцияи ф осф орав кров и напостоянном уров не.
44
О пределен ие кальцияв сы воротке крови
Принцип м етода. К альций образуетс глиоксаль-бис-(2-оксианилом ) в
щ елочной |
среде |
ком плекс |
красного цв ета. |
И нтенсив ность |
окраски |
|||||||||
изм еряетсяф отом етрически при длинев олны |
520-550 нм . |
|
|
|
|
|||||||||
|
|
Реактив ы . 1. |
Стандартны й раств ор CaCO3 |
2,5 |
м м оль/л. |
2. |
Раств ор |
|||||||
NaOH 0,4 |
м оль/л. |
3. Раств ор глиоксаль-бис-(2-оксианила) |
2,4 |
м м оль/лв |
||||||||||
м етаноле. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
Ход |
работы . |
|
См еш ать в |
пробирках |
реактив ы |
и сы в оротку кров и |
||||||
согласнотаблице10. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
Прим ечание: лабораторнаяпосудадолж наслуж итьисключительнодля |
||||||||||||
определениякальцияи бы тьабсолютночистой. |
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
Ход определениякальция |
|
|
Т аблица10. |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
Реактив ы |
|
О пы тная |
К алибров очная |
К онтрольная |
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
проба, м л |
проба, м л |
проба, м л |
|
|||||
|
В одадистиллиров анная |
1,00 |
1,00 |
|
|
1,00 |
|
|
||||||
|
Сы в ороткакров и |
0,02 |
- |
|
|
- |
|
|
|
|||||
|
Раств ор 1 |
|
- |
|
0,02 |
|
|
- |
|
|
|
|||
|
(стандартны й раств ор) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
Раств ор 2 (NaOH) |
0,50 |
0,50 |
|
|
0,50 |
|
|
||||||
|
|
|
|
|
Перем еш ив аюти инкубируют10 м инут |
|
|
|
|
|||||
|
Раств ор 3 |
|
2,00 |
2,00 |
|
|
2,00 |
|
|
|||||
|
(раств ор глиоксаль-бис- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
2-оксианила) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
Пробы тщ ательно перем еш атьи инкубиров атьв течение5 м инут. Н е |
||||||||||||
позж е чем |
через 10 м инут после окончания инкубации изм ерить в еличину |
|||||||||||||
оптической плотности опы тной и калибров очной проб против контрольной
пробы при длинев олны |
520-550 нм . |
||
Расчет. Расчет |
концентрации кальция в анализируем ы х пробах |
||
пров ести поф орм уле: |
|
Е опы т |
|
|
С= |
× 2,5 |
|
|
|
||
|
|
Е станд |
|
гдеСконцентрациякальция, м м оль/л;
Еопы т – оптическаяплотностьопы тной пробы ;
Естанд – оптическаяплотностькалибров очной пробы ;
|
2,5 – концентрациякальцияв стандартном |
раств оре, м м оль/л |
|||
|
Д иагностическое значение теста. К альций – основ ной ком понент |
||||
костной |
ткани. О коло 40% |
кальция сы |
в оротки кров и св язано с белкам и, |
||
св ы ш е 50% |
нах одится в |
ионизиров анном |
(ф изиологически актив ном |
||
состоянии). В |
норм ев сы в ороткесодерж ится2,25 - 2,75 м м оль/лкальция. |
||||
Гиперкальцием ия наблюдается при гиперв итам инозе Д , пов ы ш енной ф ункции паращ итов идны х ж елез, острой атроф ии костной ткани, м иелом ной
45
болезни, некоторы х эндокринны х патологиях , сердечной недостаточности. У
больны х |
бронх опнев м онией ув еличение концентрации |
кальция в кров и |
|||||
соотв етств ует тяж ести |
заболев ания. |
Ф изиологическая |
гиперкальцием ия |
||||
м ож етнаблюдатьсяпри определенной диетеи у нов орож денны х детей. |
|||||||
Гипокальцием ия наблюдается |
при недостаточности в итам ина Д , |
||||||
сниж енной ф ункции паращ итов идны х ж елез, |
при х ронических заболев аниях |
||||||
почек, гипонатрием ии, остром панкреатите, |
циррозе печени, алкоголизм е, |
||||||
старческом остеопорозе. |
|
|
|
|
|
||
О пределен ие кон цен трациихлоридов в сы воротке иплазме крови |
|||||||
|
|
титриметрическим методом |
|
|
|||
Принцип м етода. |
И сследуем ая |
биологическая |
ж идкость титруется |
||||
раств ором |
азотнокислой ртути в присутств ии индикаторадиф енилкарбазона. |
||||||
К огда в се |
х лорид-ионы |
св язаны , |
избы ток ионов |
х лора образует с |
|||
индикатором |
ком плекс сине-лилов ого цв ета, что служ ит признаком конца |
||||||
титров ания. |
|
|
|
|
|
|
|
Реактив ы . 1. Раств ор нитратартути. 2. 1 Н раств ор азотной кислоты . 3. Раств ор диф енилкарбазонав 96% этилов ом спирте.
Ход работы . В м аленький стаканчик налить1,8 м лдистиллиров анной
в оды , в нести 0,2 м лисследуем ой биологической ж идкости, добав ить0,1 м л раств орадиф енилкарбазонаи 1 каплю азотной кислоты и титров атьрабочим раств ором при постоянном перем еш ив ании допояв ленияокраски.
|
Расчет. |
|
|
|
|
|
|
|
|
[Хлориды ], м м оль/л= К х а, где |
|
|
|
||||
|
К =93,3 (коэф ф ициент пересчета, полученны й |
при |
титров ании |
|||||
калибров очны х раств оров с изв естной концентрацией х лоридов ); |
||||||||
|
а - количеств о м иллилитров |
раств ора нитрата ртути, |
уш едш ее на |
|||||
титров аниеисследуем ой биологической ж идкости. |
|
|
||||||
|
Н орм альны ев еличины . 95-100 м м оль/лх лоридов в сы в ороткеи плазм е |
|||||||
кров и |
. |
|
|
|
|
|
|
|
|
Д иагностическоезначениетеста. Пов ы ш енноесодерж аниех лоридов в |
|||||||
кров и |
|
|
острой почечной |
|||||
м ож етнаблюдаться при обезв ож ив ании организм а, |
||||||||
недостаточности, |
несах арном |
диабете, |
некоторы х |
|
эндокринны х |
|||
заболев аниях .
Пониж ение показателя м ож ет бы ть при потере солей в следств ие избы точного потоотделения, рв оты и т.д.; ув еличении объ ем ав неклеточной ж идкости при в одной нагрузке; и некоторы х других состояниях .
Р абота 14. А зотисты й обмен . О пределен ие кон цен трациимочевин ы в сы воротке крови
О бм ен ам м иакав организм е. В результатеобм енабелков в организм е
в о в сех тканях постоянно образуется ам м иак. И сточники ам м иака в
организм е: |
реакции окисления и дезам иниров ания ам инокислот; |
распад |
пуринов ы х |
и пирим идинов ы х нуклеотидов ; распад биогенны х |
ам инов . |
|
|
|
|
|
46 |
|
|
А м м иак яв ляется токсичны м |
в ещ еств ом |
для организм а, особенно |
для |
||||
центральной нерв ной систем ы . |
О снов ной путь обезв реж ив ания ам м иака в |
||||||
организм е– биосинтез м очев ины |
в печени (орнитинов ы й цикл). |
|
|||||
|
Ц икл м очев ины . |
|
В |
печень ам м иак |
достав ляется из тканей в |
в иде |
|
глутам |
ина; из м ы ш ц |
и |
киш ечника – |
в состав е аланина. Глутам ин |
|||
расщ епляется глутам иназой наам м иак и глутам инов ую кислоту. Биосинтез
м очев ины |
осущ еств ляется |
в |
5 этапов : |
перв ы й |
и |
в торой прох одят в |
||
м итох ондриях печени, третий, |
четв ерты й |
и пяты й |
– |
в |
цитозоле печени. |
|||
Ф ерм енты |
биосинтез а |
м очев ины : |
карбам оилф осф атсинтетаза 1; |
|||||
орнитинкарбам оилтрансф ераз а; |
|
аргининосукцинат-синтетаза; |
||||||
аргининосукцинатлиаза; аргиназа. |
|
|
|
|
||||
|
Биологическое значение орнитинов ого цикла: |
1) |
обезв реж ив ание |
|||||
ам м иака; 2) регуляция азотистого балансав организм е– при поступлении в организм больш ого количеств абелкаскоростьциклав озрастает; 3) постав ка
ф ум арата в цикл трикарбонов ы х |
кислот, оксалоацетата для биосинтеза |
||||
глюкозы и ам инокислот. |
|
|
|
||
|
И сточники |
азота, углерода и кислорода в |
м очев ине. Перв ая |
||
|
|
|
|
|
|
ам иногруппа – |
из ам м иака, |
образов ав ш егося |
при окислительном |
||
дезам иниров ании глутам ата. В торая ам иногруппа постав ляется аспартатом , образов ав ш ем ся при трансам иниров ании оксалоацетата с ам инокислотам и. У глерод – из СО 2, образов ав ш егося в м итох ондриях при ды х ании. К ислород
– из м олекулы |
в оды . |
|
|
|
|
|
|
|
Д иагностическое значение определения ам м иака. В |
норм е в кров и |
|||||
содерж |
|
|
пов ы ш ение |
||||
ится м енее 65 м км оль/лам м иака. Гиперам м онием ия – |
|||||||
концентрации ам м иака |
в кров и |
– наблюдается при |
1) |
в рож денной |
|||
недостаточности х отябы |
одногоих пяти ф ерм ентов биосинтезам очев ины ; 2) |
||||||
печеночной |
недостаточности; 3) |
избы точном потреблении |
белков ; 4) |
||||
киш ечны х кров отечениях .
См очой в сутки в ы деляется 0,5 г ам м иака. К оличеств оам м иакав м оче пов ы ш ается при респираторном и м етаболическом ацидозе, гиперф ункции коры надпочечников , лих орадочны х состояниях , бактериальном разлож ении м очи и некоторы х других заболев аниях .
О статочны й азоткров и – этоазотнебелков ы х ком понентов сы в оротки кров и. Глав ны м образом это азот м очев ины – 85%, креатинина, м очев ой кислоты , индикана, ам инокислот, солей ам м ония– 15%. Т ак как преобладает азот м очев ины , при изучении азотистого обм ена определяют количеств о м очев ины в кров и.
О пределен ие мочевин ы
Принцип м етода: м очев инаобразуетс диацетилм онооксим ом в сильно кислой среде в присутств ии тиосем икарбазида и ионов трех в алентного ж елезакрасны й ком плекс.
Реактив ы . 1. Стандартны й раств ор м очев ины 16,65 м м оль/л. 2. Раств ор, содерж ащ ий диацетилм онооксим 5 м м оль/л, тиосем икарбазид 0,9 м м оль/л, сольж елезатрех в алентного25 м км оль/л, серную кислоту 0,9 м оль/л.
|
|
|
|
47 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ход работы . |
В трех |
тонкостенны х |
пробирках |
см еш ив ают реактив ы |
||||||
согласнотаблице11. |
|
|
|
|
|
|
Т аблица11. |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Ход определениям очев ины |
с тиосем икарбазидом |
|||||||||
Реактив ы (м л) |
|
|
Проба |
|
Стандарт |
|
К онтроль |
|
|||
Сы в оротка, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
разв еденнаям оча |
|
0,01 |
|
- |
|
|
- |
|
|||
Реактив 1 |
|
|
- |
|
0,01 |
|
|
- |
|
||
Д ист. в ода |
|
|
- |
|
- |
|
|
0,01 |
|
||
Раств ор 2 |
|
|
2,00 |
|
2,00 |
|
|
2,00 |
|
||
|
О тв ерстие пробирок |
закры в ают алюм иниев ой |
ф ольгой |
и пробирку |
|||||||
пом ещ аютточно на10 м ин. накипящ ую в одяную баню. Потом |
содерж им ое |
||||||||||
пробирок бы стро ох лаж дают проточной |
в одой |
и |
изм еряют оптическую |
||||||||
плотность пробы |
(А 1) и |
стандарта (А 2) |
против |
контрольного раств ора. |
|||||||
И зм ерение следует пров ести до 15 м инут после ох лаж дения. М очу перед анализом разв одят дистиллиров анной в одой от 1÷50 до 1÷100 (результат ум нож аютнаразв едение).
Расчет:
М очев ина(м м оль/л)=16,65·А 1/А 2
Определен ие мочевин ы в сы воротке кровиуреазн ы м методом по
|
реакциисфен ол-гипохлоритом |
||
Принцип |
м етода. М очев ина |
под |
действ ием ф ерм ента уреазы |
разлагается на |
углекислы й газ |
и |
ам м иак. А м м иак определяют |
колорим етрически по образов анию продуктов синего цв ета(индоф енолов ) с гипох лоритом натрия и ф енолом . Реакция катализируется нитропруссидом натрия. И нтенсив ностьокраски пропорциональнасодерж анию м очев ины .
Реактив ы . 1. Раств ор уреазы в Э Д Т А -буф ере. 2. Ц в етной реактив – ф енол0,11 м оль/л, нитропруссид натрия 0,18 м оль/л. 3. 0,011 м оль/лраств ор гипох лоританатрия в 0,13 м оль/лраств ореNaOH. 4. Стандартны й раств ор
м очев ины |
0,5 м м оль/л. 5. И зотонический 154 м м оль/лраств ор NaCl. |
|||
Ход определения. В пробирку в носят0,1 м лрабочего раств орауреазы |
||||
и добав ляют 0,02 |
м л сы в оротки |
кров и, разв еденной изотоническим |
||
раств ором |
NaCl в |
соотнош ении |
1:9. Закры в ают |
пробирку пробкой, |
перем еш ив ают, инкубируют 15 м ин. при 37° С. Затем |
добав ляют 0,3 м л |
|||
цв етного реактив а и 0,3 м л рабочего раств ора гипох лорита Na. Пробы перем еш ив ают, инкубируют при 37° С и ф отом етрируют при длине в олны 500-560 нм (зелены й св етоф ильтр) в кюв етес длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы . К онтрольную и стандартную пробы обрабаты в аютаналогичноопы тной, нов м естоисследуем ой сы в оротки кров и в носятсоотв етств енно 0,02 м лизотонического раств ораNaCl (контрольная проба) или 0,02 м лстандартногораств орам очев ины .
Расчетпров одятпоф орм уле:
48
Cм очев ины |
|
Е оп. |
= |
×10 ,0×,5 |
|
|
|||
|
|
Е ст. |
|
|
где См очев ины – концентрация м очев ины |
в пробе, |
м м оль/л; Е оп. – экстинкция |
||
опы тной пробы ; Е ст. – экстинкция стандартной пробы ; 0,5 – концентрация
м очев ины в стандартном раств оре, м м оль/л; |
10 – коэф ф ициентразв едения. |
|||
|
Н орм альны е в еличины – 2,50 – 8,33 |
м м оль/л. У лиц старш е 60 лет |
||
|
|
|
|
|
уров еньм очев ины м ож етслегкапрев ы ш атьнорм у. |
||||
|
Д иагностическое значение теста. М очев ина синтезируется в печени |
|||
|
|
|
|
|
при обезв реж ив ании ам м иака, которы й интенсив но образуется в реакциях окисления и дезам иниров ания ам инокислот, пуринов ы х и пирим идинов ы х нуклеотидов , и в ы в одится с м очой. Т аким образом , содерж анием очев ины в кров и зав иситотсоотнош енияпроцессов м очев инообразов анияв печени и ее
в ы в едения почкам и. При ух удш ении ф ункции почек |
им енно пов ы ш ение |
||
м очев ины |
в кров и яв ляется наиболее ранним диагностическим |
тестом . И з |
|
ф ракций |
остаточного азота в наибольш ей степени в |
кров и |
пов ы ш ается |
м очев ина, которая м ож етсостав лятьдо 90% ф ракции остаточного азотапри
патологии (в норм е– 50%). |
|
|
|
|
|
Различаюттри группы причин, |
прив одящ их к ув еличению содерж ания |
||||
м очев ины в |
кров и: надпочечную |
азотем ию, почечную и |
подпочечную. |
||
Н адпочечная азотем ия обуслов ленапов ы ш ением уров ня м очев ины |
в кров и, |
||||
наступающ им |
в следств ие сниж енного поступления кров и к |
почкам |
|||
(циркулярная |
недостаточность |
в |
клубочках , ш ок, |
кров опотеря, |
|
дегидратация). А зотем ия почечного происх ож дения бы в аетсв язанас острой или х ронической почечной недостаточностью в следств иеглом ерулонеф рита, пиелонеф рита, артериосклероза, некроза кортикального слоя почек. Подпочечнаяазотем иябы в аетсв язанас облитерацией м очев ы в одящ их путей
(м очекам енная болезнь, опух оли м очев ы в одящ их |
путей, предстательной |
ж елезы и т. д.). |
|
При почечной гипертонии уров еньм очев ины |
в кров и пов ы ш ен, апри |
эссенциальной гипертонии содерж анием очев ины бы в аетв пределах норм ы . Пов ы ш ение уров ня м очев ины в кров и м ож ет бы ть и при усиленном распаде белков (синдром сдав лив ания, ож оги, лих орадка, перитонит), при
обезв ож ив ании организм а.
Сниж ениеуров ням очев ины бы в аетсв язанос отрицательны м балансом азотав результатеплох ого питания, с печеночной недостаточностью или с гипергидратацией организм а. Сниж ение концентрации м очев ины в сы в ороткекров и наблюдается такж епри берем енности, в ирусном гепатите, острой дистроф ии печени, отрав лении ф осф ором , м ы ш ьяком и др. ядам и.
Р абота 15. О пределен ие кон цен трациикреатин ин а в сы воротке кровиив моче. Р асчет клирен са креатин ин а.
К реатинин – продуктнеф ерм ентатив ного гидролизакреатинф осф ата– в ещ еств а, которое в м ы ш цах служ ит источником в ы сокоэнергетических
49
ф осф атны х групп дляА Т Ф . |
|
|
|
|
|
О пределен ие креатин ин а в сы воротке крови |
|
|
|||
Принцип м етода: |
в |
щ елочной |
среде пикринов ая |
кислота |
|
в заим одейств уетс креатинином |
с образов анием оранж ев о-красной окраски, |
||||
которую изм еряют ф отом етрически при длине в олны 500-510 |
нм |
(м етод |
|||
Я ф ф ера). О пределение |
пров одят после |
депротеиниров ания |
(удаления |
||
белков ). О пределение не сов сем |
специф ично – интерф ерируют в ещ еств а с |
||||
актив ной м етиленов ой группой и некоторы е в осстанав лив ающ ие в ещ еств а, наприм ер, глюкоз а.
Реактив ы . 1. Стандартны й раств ор креатинина177 м км оль/лв раств оре альбум ина12 г/л. 2. Д епротеинирующ ий раств ор – кислотатрих лоруксусная 1,22 м оль/л(Т ХУ ). 3. Пикринов ая кислота0,04 м оль/л. 4. Н атрий гидроксид
0,75 м оль/л. |
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
Ход работы . В трех |
центриф уж ны х |
пробирках см еш ив ают реактив ы |
|||||
|
|
|
12. |
|
|
|
|
|
|
согласнотаблице |
|
|
|
|
|
Т аблица12. |
|||
|
|
Ход определениякреатининав сы в ороткекров и |
|||||||
|
|
|
|||||||
|
Реагенты , м л |
|
Проба |
|
К онтроль |
|
Стандарт |
||
|
Сы в ороткакров и |
|
0,5 |
|
- |
|
- |
||
|
Н 2О |
|
1,0 |
|
1,5 |
|
1,0 |
||
|
Стандартны й раств ор |
|
- |
|
- |
|
0,5 |
||
|
креатинина |
|
|
|
|
|
|
||
|
Т ХУ |
|
0,5 |
|
0,5 |
|
0,5 |
||
Перем еш ив аюти центриф угируют5 м ин. при 3000 g. Затем из каж дой пробирки отбирают 0,5 м лнадосадочной ж идкости и переносят в другие пробирки. В каж дую пробирку добав ляютпо 0,5 м лпикринов ой кислоты и по 0,5 м лNaOH. Перем еш ив ают и через 20 м ин. изм еряют оптическую плотность пробы (А 1) и стандартного раств ора (А 2) против контрольного раств орапри длинев олны 500-510 нм .
Расчет: [креатинин] = 177 А 1/А 2
Норм а: м уж чины 61-715 м км оль/л
женщ ины 53-97 м км оль/л.
О пределен ие креатин ин а в моче
При определении концентрации креатинина в м оче предв арительно разбав ляютм очу в 100 раз, результатум нож аютна50. См еш ив аютреактив ы согласно таблице13. Перем еш ив аюти через 20 м ин. изм еряютоптическую
плотность пробы |
(Е оп.) и стандартного раств ора (Е ст.) против контроля при |
||||
длинев олны 500-510 нм . |
|
Т аблица13. |
|||
|
|
Ход определениякреатининав м оче |
|||
|
|
|
|||
|
Реагенты , м л |
|
Проба |
К онтроль |
Стандарт |
|
М оча |
|
0,50 |
- |
- |
50
Н 2О |
0,25 |
0,75 |
0,50 |
Стандартны й раств ор |
- |
- |
0,25 |
креатинина |
|
|
|
Т ХУ |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
Пикринов аякислота |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
NaOH |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
Расчетсуточной экскреции креатининапроизв одятпоф орм уле:
|
|
|
|
E |
. |
× С |
|
с т . |
×V × 50 |
|
|
|
||
|
|
|
K = |
|
|
|
|
оп |
, где |
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
Ес т . × v |
|
|
|
||||
|
К – |
содерж ание креатинина |
|
в |
суточной |
м оче, м км оль/л; |
Е оп.– |
|||||||
экстинкция опы тной пробы , Е ст. – |
экстинкция стандартной пробы ; |
Сст. – |
||||||||||||
содерж ание креатинина в стандартной пробе, 177 м км оль/л; V – |
суточное |
|||||||||||||
количеств ом очи, м л; v – количеств ом очи, в зятоедляанализа, м л. |
|
|
||||||||||||
|
Засутки с м очой в ы в одится4,4 – 17,7 м м ольили 0,5-2,0 г креатинина. |
|||||||||||||
|
Прим ечание. |
При сборе суточной м очи в |
качеств е консерв анта |
|||||||||||
реком ендуетсяиспользов атьтим ол. Пробы |
х ранитьдо7 дней при 2-8ºС. |
|||||||||||||
|
Д иагностическое значение теста. Пов ы ш ение уров ня креатинина в |
|||||||||||||
|
|
|
|
атив ны м |
показателем |
почечной |
||||||||
сы в оротке |
кров и |
яв ляется инф орм |
||||||||||||
недостаточности или м ы ш ечной дистроф ии. У стойчив оепов ы ш ениеуров ня креатининав кров и указы в аетнанаруш ениеработы почечного ф ильтрапри далекозаш едш их патологических процессах , однакодляранней диагностики заболев аний почек тестнапов ы ш енноесодерж аниекреатининав кров и не
дает полож ительного результата. |
Пов ы ш ение уров ня креатинина в |
кров и |
||||||||||||||
отм ечается такж е при |
обструкции |
м очев ы в одящ их |
путей, |
киш ечной |
||||||||||||
непрох одим ости, |
тяж елом |
диабете, |
некрозе м ы ш ц, |
|
синдром е длительного |
|||||||||||
сдав лив ания, ож огах . |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Р асчет клирен са креатин ин а |
|
|
|
||||||||||||
Н а основ е определения креатинина в |
м оче и в плазм е (сы в оротке) |
|||||||||||||||
кров и рассчиты в ается |
клиренс |
|
креатинина, |
|
которы й |
яв ляется |
||||||||||
х арактеристикой |
клубочков ой |
|
|
|
ф ильтрации. |
К лиренс |
креатинина |
|||||||||
(коэф ф ициенточищ ения) показы в ает, какой объ ем плазм ы |
кров и полностью |
|||||||||||||||
очищ аетсяотданногов ещ еств аза1 м ин., и рассчиты в аетсяпоф орм уле: |
||||||||||||||||
С= К И × V × |
S731,, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
где К И – концентрационны й |
индекс; |
V – м инутны й диурез ; |
1,73 – |
|||||||||||||
стандартнаяпов ерх ностьтела; S – истиннаяпов ерх ностьтела |
|
|
||||||||||||||
К онцентрационны й |
индекс |
|
показы в ает, |
|
в о |
сколько |
раз |
|||||||||
концентрируетсяданноев ещ еств о |
почкам и. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
К И = |
|
|
[креатинин] в м оче |
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
[креатинин] в кров и |
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
V = Д |
/t, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
гдеД – объ ем м очи з ав рем яt, м л; t – в рем яв м ин. |
|
|
|
|||||||||||||
|
|
S – 0,0167 |
|
|
|
|
|
. см |
|
|
|
|||||
|
|
|
рост, |
× в ес,кг |
|
|
|
|||||||||