III. По консистенции:

1. Жидкие (мясо-пептонный, сахарный, кровяной, желчный бульоны, пептонная вода, молоко).

2. Полужидкие - содержат 0,5% агара (полужидкий агар).

3. Плотные – содержат уплотнители, придающие среде желеобразную консистенцию. В качестве уплотнителей могут использоваться:

• агар (по-малайски желе) – очищенный полисахарид из морских водорослей, который добавляют к жидким средам в концентрации 1–3% (обычно 15–20г/л). Плавится при 100⁰С, застывает  ниже +45⁰С; разлагают его немногие бактерии;

• желатин - он разжижается многими микроорганизмами и имеет низкую температуру плавления (2630⁰С), поэтому редко используется в качестве уплотнителя;

• силикагель - используется в случаях, когда требуются плотные среды, не содержащие органических компонентов (для хемолитотрофов).

4. Свёрнутые  плотные среды, содержащие сыворотку крови или яичный белок, которые в процессе температурной коагуляции приобретают плотность.

5. Сыпучие  пшено, отруби и др., используют для длительного хранения микроорганизмов на поверхности среды.

IV. По назначению:

1. Общего назначения, основные (МПБ, МПА). На них растут многие нетребовательные микроорганизмы (псевдомонады, энтеробактерии, стафилококки).

2. Элективные (селективные, избирательные) содержат вещества, подавляющие рост сопутствующей микрофлоры и усиливающие рост определенных видов или родов микроорганизмов. В качестве селективных добавок используют антибиотики, антисептики (фурагин), анилиновые красители (феноловый красный, метиленовый синий, эозин, малахитовый зеленый), соли (теллурит калия, 4-9% NaCl, селенит натрия), желчь. Примеры элективных сред: для стафилококков  желточно-солевой агар, для синегнойной палочки – фурагиновый агар.

3. Дифференциально-диагностические позволяют отдифференцировать по внешнему виду колоний и биохимической активности одну группу микроорганизмов от другой при посеве биологического материала со смешанной микрофлорой. Содержат углеводы, индикаторы рН, селективные добавки. Примеры дифференциально-диагностических сред: для энтеробактерий  Эндо, Левина, Плоскирева, для клебсиелл  лактозо-бромтимоловый агар с пенициллином, для Clostridium difficile  фруктозо-циклосерин-цефокситиновый агар.

4. Индикаторные. В состав таких сред кроме индикатора рН (табл. 6) входят углеводы, либо аминокислоты, при разложении которых изменяется рН и как следствие этого  цвет среды.

Таблица 6

Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах

Название индикатора	Окраска индикатора в зависимости от значения рН
	щелочное	нейтральное	кислое
Андреде	бесцветный	бесцветный	красный
Бромтимоловый синий	бирюзовый	зеленый	желтый
ВР (водный голубой+розоловая кислота)	малиновый	бесцветный	синий
Феноловый красный	малиновый	красный	желтый

Изначально рН среды устанавливают 7,2±0,2. Эти среды позволяют изучать биохимические свойства чистых культур микроорганизмов и не обладают селективными свойствами. Примеры индикаторных сред: среды Гисса, Клиглера, Олькеницкого.

5. Хромогенные. Новый тип диагностических сред, получающий в последнее время широкое распространение в ускоренной диагностике инфекционных заболеваний. На хромогенных средах по цвету колоний можно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов (рис. 18).

В состав таких сред, кроме ростовых и селективных компонентов, входит меченый хромогеном субстрат (субстраты). Колонии микроорганизмов, которые разлагают хромогенный субстрат, окрашиваются в определенный цвет. Разработаны хромогенные среды для выделения и предварительной идентификации листерий, сальмонелл, шигелл, E. coli О_157, кандид, устойчивых к метициллину стафилококков (MRSA) и др.

Рис. 18.Хромогенная средаCHROMagarOrientationTMпозволяет быстро идентифицировать основных возбудителей инфекций мочевых путей

V. По цели использования в схеме бактериологической диагностики инфекционных заболеваний:

1. Транспортные. Их используют на этапах доставки биологического материала в бактериологическую лабораторию; состав этих сред такой, что бактерии сохраняют жизнеспособность, но не размножаются в них, поэтому количественный и качественный состав микрофлоры не изменяется.

2. Среды обогащения – жидкие среды, которые подавляют сопутствующие возбудителю микроорганизмов (щелочная пептонная вода для холерного вибриона, среды с желчью для энтеробактерий) и стимулируют рост возбудителя.

3. Среды для получения изолированных колоний.

4. Среды для накопления чистой культуры.

5. Среды для идентификации микроорганизмов.

6. Консервирующие  для длительного хранения микроорганизмов в условиях морозильной камеры. Эти среды содержат криопротекторы (10% глицерин), защищающие мембраны в процессе замораживания; необходимы для создания коллекций микроорганизмов.

Приготовление питательных сред.

Большинство сред, используемых в бактериологии, представляют собой высушенные концентраты в заводской фасовке, которые взвешивают, растворяют в дистиллированной воде, стерилизуют и разливают в лабораторную посуду. Этапы приготовления таких сред следующие:

1. Взвешивают навеску сухой концентрированной среды в соответствии с инструкцией по применению.

2. Растворяют навеску в соответствующем объеме дистиллированной воды.

3. Доводят до кипения при постоянном перемешивании и кипятят 1 мин до полного растворения компонентов. Доводят рН среды до требуемой величины  обычно, 7,2±0,2.

4. Разливают среду в подготовленную посуду, закрывают ватно-марлевыми пробками, стерилизуют в автоклаве при +121⁰С в течение 15 мин. Среды с углеводами стерилизуют при +115⁰С в течение 15 мин.

5. После охлаждения среды до 4550⁰С добавляют при необходимости селективные и/или стимулирующие добавки: 5% крови, 5% сыворотки, антибиотики, гемин, витамины и др., тщательно перемешивают.

6. Разливают среду в стерильные чашки Петри по 20 мл на чашку (чтобы глубина агарового слоя составляла не менее 4 мм), равномерно распределяют, оставляют до застывания. Используют стерильные одноразовые пластиковые чашки Петри или стеклянные, многоразового использования, предварительно простерилизованные.

7. После застывания среды её подсушивают от конденсата в термостате в течение 30 мин. Для этого на полку термостата кладут лист фильтровальной бумаги и помещают чашку так, чтобы крышка служила опорой для края её дна, перевёрнутого средой вниз.

8. При необходимости чашки Петри с готовой средой можно хранить в запаянном полиэтиленовом пакете при +2+8⁰С в течение 710 суток; перед посевом среды подсушивают в термостате до исчезновения конденсата на внутренней поверхности крышки.

Рост бактерий в жидких питательных средах.

При росте бактерий в жидких питательных средах могут наблюдаться:

1) равномерное помутнение среды типично для большинства факультативно-анаэробных бактерий; при этом степень помутнения может быть слабой, умеренной или сильной;

2) придонное или пристеночное помутнение среды специфично для стрептококков и облигатно анаэробных бактерий; осадок может быть плотным, рыхлым, слизистым или хлопьевидным;

3. плёнка на поверхности среды характерна для аэробов, плёнка может быть тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой. Рост в виде пленки характерен, напр., для Yersinia pestis (от пленки вниз спускаются нити- «сталактиты») и Vibrio cholera (нежная пленка).

Рост бактерий на плотных питательных средах.

На плотной питательной среде из одной микробной клетки вырастает скопление микроорганизмов  колония. Морфотипы колоний, вырастающих на средах, зависят от видовой принадлежности микроорганизма и позволяют идентифицировать и дифференцировать микроорганизмы.

На плотных питательных средах колонии микроорганизмов могут отличаться размерами, формой, краем, поверхностью, прозрачностью, структурой и консистенцией, профилем, цветом и запахом (табл. 7, рис. 19).

Таблица 7